摘要：采用苯酚—硫酸法對(duì)青海不同地區(qū)蕨麻1號(hào)與野生蕨麻中多糖含量進(jìn)行了對(duì)比測(cè)定。結(jié)果顯示，青海蕨麻1號(hào)中多糖含量高于野生蕨麻，在南山栽培的蕨麻多糖含量最高，五峰的蕨麻多糖含量最低。通過對(duì)不同地區(qū)蕨麻中多糖含量的測(cè)定，不僅可以對(duì)蕨麻的進(jìn)一步開發(fā)利用提供可靠的參考依據(jù)，而且還可以找到優(yōu)質(zhì)的蕨麻品種。

關(guān)鍵詞：蕨麻；多糖含量；測(cè)定

中圖分類號(hào)：O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439—8114（2012）19—4361—03

蕨麻是鵝絨委陵菜（Potentilla anserina L）的原變種，屬薔薇科（Rosacrae）委陵菜屬（Potentilla），為多年生草本，是一種典型的匍匐莖克隆植物[1]。蕨麻分布極廣，常生長(zhǎng)于河岸、路邊、山坡草地，海拔500～4 300 m處。在青海、西藏等高寒地區(qū)塊根膨大[2]。蕨麻可入藥，亦可用作保健食品。其性平味甘，具有生津止渴、健脾益胃、益氣補(bǔ)血、收斂止血之功效[3]。孫潔等[4]用斐林試劑熱滴定法測(cè)定蕨麻中多糖的含量為13.87 mg/g。研究表明中藥多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗輻射、降血糖、降血脂、保肝等多種功能[5—8]。本研究采用苯酚—硫酸法測(cè)定蕨麻多糖含量[9]，通過蕨麻多糖含量的測(cè)定，研究分析青海不同地區(qū)蕨麻1號(hào)與野生蕨麻中多糖含量是否存在差異。通過不同產(chǎn)地蕨麻營(yíng)養(yǎng)成分的比較，研究環(huán)境因素對(duì)蕨麻營(yíng)養(yǎng)成分的影響，并找到優(yōu)質(zhì)的蕨麻品種。

1 材料與方法

1.1 材料

采集日月鄉(xiāng)、邊灘、五峰、南山等4個(gè)不同地區(qū)人工栽培的青海蕨麻1號(hào)與野生型蕨麻（對(duì)照品），將采集到的蕨麻洗干凈，烘干，打成粉末備用。

1.2 試劑

石油醚、濃硫酸、氯仿、95%乙醇、丙酮、乙醚，均為分析純。

1.3 儀器

752型紫外分光光度計(jì)（北京東南設(shè)備有限公司）；索氏提取器（北京卓川有限公司）；回流提取裝置（自制）；超聲振蕩儀（廣州超聲振蕩儀廠）。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取經(jīng)105 ℃下干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品100 mg置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.5 苯酚溶液的配制

取苯酚100 g，加鋁片0.1 g和碳酸氫鈉0.05 g，常壓蒸餾，收集178 ℃餾分。精密稱取該餾分15 g置于250 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻后過濾至棕色試劑瓶中，置冰箱備用。

1.6 樣品溶液的制備

稱取蕨麻粗粉0.1 g，加入100 mL 80%乙醇，80 ℃回流提取1 h，熱過濾，藥渣用80%熱乙醇洗滌（10 mL×3）后，揮干溶劑。藥渣連同濾紙置燒瓶中，加蒸餾水100 mL沸水溫浸提取1 h，趁熱過濾，藥渣用熱水洗滌（10 mL×4），合并濾液于250 mL容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 蕨麻多糖的提取與精制

稱取已干燥的蕨麻粗粉20 g，用濾紙包好后置索氏提取器中，加入150 mL石油醚（沸程為60～90 ℃）在85 ℃的水浴中回流提取1 h，待藥粉中的溶劑揮干后置于回流提取裝置中，加入80%乙醇85 ℃回流提取2次，每次1 h，過濾，取出藥渣，揮干溶劑。將藥渣加水后水浴溫浸（50 ℃左右）提取2次，每次1 h，用濾紙過濾，合并上清液約200 mL左右。上清液用正丁醇—氯仿輕搖萃取3次，靜置，分出氯仿層，除去蛋白質(zhì)。水液中再加入活性炭，回流1 h。待冷卻后用八層紗布過濾，濾液中加入乙醇，使含醇量達(dá)80%，即可看到有少量的懸浮物，放置冰箱中過夜。濾出沉淀，依次用95%乙醇、無水乙醇、丙酮、乙醚反復(fù)沖洗2次，60 ℃烘干至恒重，計(jì)算得率。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

吸取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻。分別吸取2.0 mL于10 mL帶塞試管中，另取2.0 mL蒸餾水作空白對(duì)照。各管再加入1.0 mL苯酚溶液，混勻，迅速加入濃硫酸5.0 mL，搖勻后放置5 min，再置沸水浴中加熱15 min，取出冷卻后于490 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果見表1。經(jīng)過計(jì)算得回歸方程y=0.330 2x—0.005 3（R2= 0.999 7）。

2.3 換算因素的測(cè)定

稱取干燥至恒重的蕨麻多糖17.5 mg置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻。吸取此液5.0 mL置于50 mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻作貯備液。吸取貯備液2.0 mL，同標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，從而求出多糖供試液中葡萄糖濃度，按公式f=w/（C·D）計(jì)算得換算因素f值，結(jié)果見表2。

式中，w為多糖的重量（mg）；C為多糖稀液中葡萄糖濃度（mg/mL）；D為多糖的稀釋因子。

2.4 樣品含量的測(cè)定

吸取2.0 mL樣品溶液于10 mL帶塞試管中，另取2.0 mL蒸餾水作空白對(duì)照。各管再加入1.0 mL苯酚溶液，混勻，迅速加入5.0 mL濃硫酸，搖勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，取出冷卻后于490 nm處測(cè)定吸光度，按下式計(jì)算樣品中多糖的含量，結(jié)果見表3。

多糖含量=（C×D×f/w）×100%

式中，C為供試液中葡萄糖濃度（mg/mL）；D為供試液的稀釋因素；f為換算因子；w為供試品重量（mg）。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

量取某一濃度五峰對(duì)照樣品溶液，按樣品測(cè)定方法進(jìn)行處理，每隔0.5 h測(cè)定1次。結(jié)果表明，在波長(zhǎng)不變的情況下，2.5 h內(nèi)測(cè)定值不變。結(jié)果見表4。

2.6 精密度試驗(yàn)結(jié)果

按照樣品多糖含量的測(cè)定方法，吸取邊灘對(duì)照蕨麻的多糖溶液進(jìn)行精密度試驗(yàn)，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果見表5。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

稱取5份邊灘青海1號(hào)蕨麻粉末各0.1 g，按照“2.4”中方法同時(shí)制備5 份樣品溶液。移取樣品溶液各2 mL分置于帶塞的試管中，按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定吸光度。計(jì)算多糖含量。結(jié)果見表6。

2.8 加樣回收率測(cè)定

稱取樣品粉末0.1 g，精制蕨麻多糖10 mg置于同一燒瓶中，按樣品液制備與含量測(cè)定方法進(jìn)行操作。平均回收率為99.4%，RSD為2.53%，結(jié)果見表7。

3 小結(jié)與討論

南山青海1號(hào)蕨麻的多糖含量為31.37%，南山野生蕨麻多糖含量為21.22%。邊灘青海1號(hào)蕨麻的多糖含量為34.41%，邊灘野生蕨麻多糖含量為15.53%；日月鄉(xiāng)青海1號(hào)蕨麻的多糖含量為32.32%，日月鄉(xiāng)野生蕨麻多糖含量為15.68%；五峰青海1號(hào)蕨麻的多糖含量為18.30%，五峰野生蕨麻多糖含量為6.30%。

青海1號(hào)蕨麻的多糖含量高于野生蕨麻的多糖含量10個(gè)百分點(diǎn)。在邊灘采集的青海蕨麻1號(hào)多糖含量最高，五峰采集的野生蕨麻多糖含量最低。在南山、日月鄉(xiāng)、邊灘等3個(gè)地區(qū)種植的青海蕨麻1號(hào)多糖含量相差不大，野生的蕨麻多糖含量也相差不大；五峰種植的青海蕨麻1號(hào)比其他3個(gè)地區(qū)種植的低達(dá)13個(gè)百分點(diǎn)以上；五峰野生的蕨麻多糖含量比其他3個(gè)地區(qū)的低達(dá)9個(gè)百分點(diǎn)以上。

青海蕨麻1號(hào)與野生蕨麻多糖含量的差異達(dá)到極顯著水平，說明青海蕨麻1號(hào)的品質(zhì)較好。應(yīng)該大力推廣。蕨麻多糖含量可能與不同蕨麻種植地區(qū)土壤的肥力，如有機(jī)質(zhì)、速效氮、速效磷、速效鉀、鹽等存在一定差異有關(guān)[10]。有機(jī)肥的施入可以提高蕨麻的單株產(chǎn)量，促進(jìn)塊根體積的增大，從而提高塊根的商品價(jià)值[11]。蕨麻屬于典型的低溫植物，尤其是蕨麻塊根的膨大必須是低溫刺激方可完成。在蕨麻匍匐莖生長(zhǎng)期及塊根膨大前期，降水量越多對(duì)其生長(zhǎng)越有利，但塊根膨大后期降水量卻對(duì)蕨麻的膨大沒有意義，反而不利于淀粉等物質(zhì)的累積[12]。隨著降水減少、氣溫降低、植物停止生長(zhǎng)進(jìn)入枯黃期，物質(zhì)又逐漸轉(zhuǎn)運(yùn)到地下貯藏，到10月份根的積累達(dá)到高水平[13]。生長(zhǎng)在高海拔地區(qū)的蕨麻品質(zhì)較好，多糖含量可能與海拔有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李棟元，毛東風(fēng)，楊具田，等.蕨麻營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定與分析[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2007（3）：43—44.

[2] 湯青川，李軍喬.干旱脅迫對(duì)蕨麻克隆構(gòu)件的可塑性反應(yīng)[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2005，21（11）：205—207.

[3] 馬春花.藏藥蕨麻的化學(xué)成分及藥理作用研究概況[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（8）：1584—1585.

[4] 孫 潔，呂加平，薄海波.藏藥蕨麻的營(yíng)養(yǎng)成分分析及評(píng)價(jià)[J].食品科學(xué)，2008，29（2）：411—414.

[5] 陳炅然，王 琴.蕨麻多糖的提取及其清除自由基的作用[J].中國(guó)獸醫(yī)科技，2004，34（4）：59—62.

[6] 鄭應(yīng)馨，徐恒衛(wèi).具有抗腫瘤活性的多糖及其作用機(jī)理研究概況[J].中國(guó)藥師，2003，6（6）：368—369.

[7] 陶 喆，程建明.中藥多糖抗腫瘤機(jī)制探討[J].江蘇中醫(yī)藥，2003， 24（6）：47—49.

[8] 劉景田，黨小軍，王惠萍，等.中藥多糖對(duì)紅細(xì)胞膜相CD35免疫活性的調(diào)節(jié)作用[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2002，12（1）：7—9.

[9] 楊 樺，賈 旭，易 紅.藏藥蕨麻中多糖的含量測(cè)定研究[J].中草藥，2001，32（1）：29—31.

[10] 許 興，鄭國(guó)琦，楊 娟，等.寧夏不同地域枸杞多糖和總糖含量與土壤環(huán)境因子關(guān)系的研究[J].西北植物學(xué)報(bào)，2005，25（7）：1340—1344.

[11] 沈?qū)帠|，韋梅琴，馬國(guó)良，等.有機(jī)肥對(duì)蕨麻生長(zhǎng)及塊根產(chǎn)量的影響[J].青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007（4）：54—56.

[12] 余青蘭，李軍喬.蕨麻生物量變化與氣候因子關(guān)系數(shù)學(xué)模型的建立[J].中國(guó)野生植物資源，2008，27（5）：53—55.

[13] 劉鳳云.藏藥蕨麻生長(zhǎng)規(guī)律及營(yíng)養(yǎng)氮的變化[J].青海大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2001，19（3）：29—31.