[摘要] 目的 研究幽門螺桿菌（Helicobacter pylori）感染與腸上皮化生不同亞型中C-myc蛋白表達的關(guān)系。 方法 應(yīng)用14碳-呼氣試驗檢測Hp；AB-PAS和HID-AB黏液染色法進行腸上皮化生亞型分型；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色Elivision法檢測C-myc蛋白的表達。 結(jié)果 腸上皮化生各亞型Hp感染率均高于非萎縮性胃炎組，各亞型之間Hp感染率無明顯差異；不完全性結(jié)腸化生C-myc蛋白表達率高于其他亞型和非萎縮性胃炎（P < 0.05）；不完全性結(jié)腸性化生中Hp陽性患者C-myc蛋白表達率明顯高于Hp陰性患者（P < 0.01）。 結(jié)論 不完全性結(jié)腸化生中C-myc蛋白表達升高，其表達可能與Hp感染有關(guān)，Hp感染可能通過C-myc基因參與胃癌發(fā)生，同時提示不完全性結(jié)腸化生與胃癌關(guān)系密切。

[關(guān)鍵詞] 腸上皮化生；不完全性結(jié)腸化生；C-myc蛋白；幽門螺桿菌

[中圖分類號] R573 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）30-0058-03

The association among Helicobacter pylori infection and the expressions of C-myc proteins in different subtypes of intestinal metaplasia

HUANG Jue1 LAl Yuexing2 XU Ping2

1.Department of Internal Medicine， Jiuting Hospital， Songjiang District， Shanghai 201615， China； 2.Department of Gastroenterology，Songjiang Branch of the First People’s Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University， Shanghai 201600， China

[Abstract] Objective To study the association among Helicobacter pylori （Hp） infection and the expression of C-myc protein in different subtypes of intestinal metaplasia. Methods The Carbon-14-Urea Breath Test was used to determine Hp； AB-PAS and HID-AB mucinous staining was used to distinguish intestinal metaplasia subtypes； The immunohistochemical Elivision method was used to determine the expression of C-myc protein. Results The infection rates of Hp in intestinal metaplasia was higher than non-atrophic gastritis； No significant difference between subtypes of intestinal metaplasia in the infection rates of Hp. The expression of C-myc protein in incomplete colonic type of intestinal metaplasial was higher than other subtypes and non-atrophic gastritis， the expression of C-myc protein with Hp positive was higher than those with Hp negative. Conclusion There is higher expression in incomplete colonic type of intestinal metaplasial and the expression may be associated with Hp infection. Hp may promote the occurrence of gastric cancer while incomplete colonic type of intestinal metaplasia has closely relationship with gastric carcer.

[Key words] Intestinal metaplasia； Incomplete colonic type of intestinal metaplasial； C-myc protein； Helicobacter pylori

胃癌是危害人類健康最常見的惡性腫瘤，近年，胃癌的發(fā)病率和死亡率雖然有所下降，但其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)仍占所有癌癥發(fā)病率第四位，死亡率在腫瘤相關(guān)性死亡中占第二位[1]，胃癌是我國消化道高發(fā)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和病死率居各種惡性腫瘤首位[2]。淺表性胃炎→萎縮性胃炎→腸上皮化生→胃黏膜上皮異型增生→胃癌（腸型）是胃癌發(fā)生、發(fā)展的多階段模式。其中腸上皮化生是胃黏膜良性病變向胃癌演變的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，特別是不完全性結(jié)腸型腸上皮化生被認為與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[3]。幽門螺旋桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍和少見的胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤的主要病因，與胃癌的發(fā)生也有密切關(guān)系。研究腸化生各亞型與胃癌發(fā)生的關(guān)系以及幽門螺桿菌感染與腸上皮化生的關(guān)系對胃癌的高危人群的確定和篩查有積極的臨床意義，從而可有效地預(yù)防胃癌的發(fā)生。本研究應(yīng)用AB-PAS和 HID-AB黏液染色法進行腸上皮化生分型，免疫組織化學(xué)染色Elivision法檢測萎縮性胃炎不同亞型腸上皮化生中C-myc蛋白的表達，以討論Hp感染與腸上皮化生不同亞型中C-myc蛋白表達的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009年到上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院松江分院行胃鏡檢查165例，女86例，男79例，年齡31～76例。 根據(jù)胃鏡病理（標(biāo)準(zhǔn)參考中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)會2006年制定的中國慢性胃炎共識意見[4]），判斷為萎縮性胃炎伴腸化125例，非萎縮性胃炎40例。

1.2 方法

1.2.1 14碳-呼氣試驗 囑患者空腹或進食2 h后用20 mL涼開水口服一粒尿素膠囊，靜坐25 min后用一次性吹氣管向含CO2吸收劑瓶中吹氣，吹氣1～3 min，若5 min不變色，停止吹氣，予收集瓶加閃爍劑后加蓋放入14 C呼氣儀器測試1 min。

1.2.2 腸化分型 標(biāo)本以中性甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，制成4 μm厚冷凍切片，采用AB-PAS和HID-AB黏液染色法把腸上皮化生分為四種亞型：即完全性小腸化生、不完全性小腸化生、完全性結(jié)腸化生和不完全性結(jié)腸化生。

1.2.3 免疫組織化學(xué)染色 Elivision法進行C-myc蛋白的表達的檢測： C-myc一抗和二抗均購自Labvision公司，石蠟包埋胃黏膜組織切片放于60 ℃烤箱中過夜，二甲苯脫蠟，乙醇梯度水化，微波修復(fù)組織抗原 3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，滴加一抗室溫下孵育150 min，加聚合酶輔助劑，室溫下孵育20 min，滴加二抗，室溫下孵育30 min，新鮮配置 DAB顯色5～15 min，在顯微鏡下觀察終止顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固，晾干后顯微鏡下觀察。每批染色均以PBS替代一抗為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

14碳-呼氣試驗檢：檢測數(shù)值大于100即判斷陽性；腸化分型：完全性小腸化生鏡檢呈藍色；完全性結(jié)腸化生鏡檢呈棕黑色和藍色；不完全性小腸型腸化生鏡檢呈藍色、紅色或兩者混合色（紫紅色）；不完全性結(jié)腸型腸化生鏡檢呈棕黑色、紫棕色、藍色、紅色、紫紅色；C-myc表達產(chǎn)物陽性判定：陽性細胞表現(xiàn)為細胞核和/或細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)深淺不一的棕黃色顆粒，在光學(xué)顯微鏡下觀察5個具有代表性的高倍視野，陰性：陽性細胞數(shù)< 25 %，弱陽性（+）：陽性細胞為25% ～50%，陽性（++）：陽性細胞為50%～75%，強陽性（+++）：陽性細胞> 75%，表達（+）～（+++）者均可記作為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學(xué)處理。不同胃黏膜病變中Hp感染率及不同胃黏膜病變中C-myc蛋白陽性率的比較采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

125例萎縮性胃炎胃黏膜腸化生標(biāo)本中，不完全性結(jié)腸化生占45例，不完全性小腸化生占47例，完全性結(jié)腸化生占17例，完全性小腸化生占16例。

不同胃黏膜組織Hp感染率見表1。不完全性結(jié)腸化生組Hp陽性率為55.56%，不完全性小腸化生組Hp陽性率為53.19%，完全性結(jié)腸化生組Hp陽性率為58.82%，完全性小腸化生組Hp陽性率為56.25%，非萎縮性胃炎組Hp陽性率為40.00%。腸上皮化生各亞型組間比較幽門螺桿菌感染無統(tǒng)計學(xué)差異（P > 0.05）；腸上皮化生各亞型幽門螺桿菌陽性率均高于非萎縮性胃炎組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

免疫組化結(jié)果見圖1、圖2。C-myc蛋白陽性判定為胃黏膜腸化灶細胞核和（或）細胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)深淺不一的棕黃色顆粒（圖1）。Hp感染與不同亞型腸上皮化生和非萎縮性胃炎胃黏膜中C-myc蛋白表達率的關(guān)系見表1。結(jié)果顯示：不完全性結(jié)腸化生C-myc表達陽性率明顯高于非萎縮性胃炎（χ2=21.167，P < 0.01），統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異；不完全性結(jié)腸化生C-myc表達陽性率分別高于不完全性小腸化生、完全性結(jié)腸化生、完全性小腸化生等其他腸上皮化生各亞型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）；非萎縮性胃炎、不完全性小腸化生、完全性結(jié)腸化生、完全性小腸化生組間比較C-myc表達陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.143，P > 0.05）；不完全性結(jié)腸化生組幽門螺桿菌陽性者中C-myc蛋白表達率為76%，而陰性患者中C-myc蛋白表達率為30%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.522，P < 0.01）。不完全性小腸化生、完全性結(jié)腸化生、完全小腸化生和非萎縮性胃炎者中幽門螺桿菌陽性組中患者C-myc蛋白表達率分別為32.00%、20.00%、30.00%和18.75%，幽門螺桿菌陰性組中患者C-myc蛋白表達率分別為13.64%、14.29%、14.29%和4.17%，各組幽門螺旋桿菌陽性和陰性患者C-myc蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。

圖1 不完全性結(jié)腸化生胃黏膜C-myc蛋白表達陽性（Elivision×400）

圖2 非萎縮性胃炎胃黏膜C-myc蛋白表達陰性（Elivision×400）

3 討論

C-myc是基因研究中較常見的原癌基因，是myc基因家族的成員之一， 在細胞增殖、細胞周期、基因穩(wěn)定性等方面發(fā)揮重要作用[5，6]。C-myc的激活在多種腫瘤的形成過程中起作用，是胃癌細胞中常見的高表達的癌基因之一。病理學(xué)調(diào)查顯示C-myc基因的過度表達在某些GC的形成過程中，尤其在細胞癌變的早期起一定的作用，同時也對胃癌的轉(zhuǎn)移起一定的促進作用[7]。腸上皮化生是胃黏膜良性病變向胃癌演變的中間過程，不同類型的腸化生是胃黏膜病變的不同階段[8]。本研究顯示C-myc蛋白從非萎縮性胃炎到不同亞型腸化生胃黏膜中呈逐漸增高趨勢，不完全性結(jié)腸化生患者C-myc蛋白表達率高于其他亞型和非萎縮性胃炎，表明不完全性結(jié)腸化生患者對于其他腸化生類型患者發(fā)展成胃癌的危險性更大。Hp感染為胃黏膜腸上皮化生發(fā)生的重要因素[9]，從正常胃黏膜向胃癌的演變中，Hp感染主要起了一個引導(dǎo)作用[10]。而本研究顯示腸上皮化生各亞型Hp感染率均高于非萎縮性胃炎組，而在各亞型之間Hp陽性率無明顯差異，這進一步揭示腸上皮化生的發(fā)生和Hp感染有關(guān)，但同時表明Hp感染可能與腸化類型無關(guān)。本研究顯示在腸化生各亞型中，Hp陽性患者的C-myc蛋白陽性表達率均高于Hp陰性患者，特別是不完全性結(jié)腸化生組中Hp陽性患者中C-myc蛋白表達率明顯高于Hp陰性患者（χ2=9.522，P < 0.01），其與瞿春瑩等[11]研究結(jié)果一致，表明C-myc蛋白的過度表達可能是黏膜上皮癌變的早期促發(fā)因素， C-myc基因可能參與胃黏膜的癌變過程，并且與Hp密切相關(guān)。

由此可見，不完全性結(jié)腸化生中C-myc蛋白表達高于其他亞型腸上皮化生和非萎縮性胃炎，不完全性結(jié)腸化生幽門螺桿菌陽性患者中C-myc蛋白表達率明顯高于不完全性結(jié)腸化生陰性患者，提示我們C-myc表達可能與Hp感染有關(guān)，且Hp感染可能通過C-myc基因參與胃癌發(fā)生，故對于不完全性結(jié)腸化生合并Hp感染患者需加強監(jiān)測和定期隨訪，其對胃癌的早期發(fā)現(xiàn)有重要意義。

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（收稿日期： 2012-09-03）