[摘要] 目的 建立一種香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的測定方法。 方法 以香菇多糖精制品為對照品，使用蒽酮-硫酸比色法測定。 結(jié)果 香菇多糖氯化鈉注射液在（10.15～30.45） μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r = 0.999 9），精密度RSD = 0.87%（n = 6），平均回收率為99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）。 結(jié)論 本法簡便、可行、準(zhǔn)確，適用于香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的測定。

[關(guān)鍵詞] 香菇多糖氯化鈉注射液；蒽酮-硫酸比色法；含量測定

[中圖分類號] R927 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2012）30-0108-02

Determination of the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection

LI Yulong

School of Pharmaceutical Sciences，Hainan Medical University，Haikou 571199，China

[Abstract] Objective To establish a method of determining the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection. Methods To determine by anthrone-sulfuric acid colorimetry，taking lentinan product as the reference control. Results When the concentration of the lentinan and sodium chloride injection is between 10.15 μg/mL and 30.45 μg/mL，it shows positive linear relations（r = 0.999 9），with the precision RSD = 0.87%（n = 6） and average recovery rate of 99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）. Conclusion This method is simple，feasible and accurate，so it can be applied to the determination of the lentinan content in lentinan and sodium chloride injection.

[Key words] Lentinan and sodium chloride injection；Anthrone-Sulfuric acid colorimetry；Content determination

香菇多糖氯化鈉注射液有效成分為香菇多糖，其結(jié)構(gòu)以β2（1→3）吡喃葡糖苷的結(jié)合為主鏈，又含有以β2（1→3）及β2（1→6）吡喃葡糖苷為分枝的β2（1→3）葡聚糖[1]。目前，國內(nèi)外對香菇多糖的研究比較深入，測定方法也不斷改進(jìn)，主要有比色法、滴定法、高效液相色譜法等[2，3]。本文著重探討蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖含量的條件，并進(jìn)行了方法學(xué)研究，證明該方法簡便、可行、準(zhǔn)確，可為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)香菇多糖氯化鈉注射液的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1儀器

UV1700-型紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司）RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），HH-S2S型恒溫水浴鍋（金壇市大地自動化儀器廠）。

1.2試藥

香菇多糖對照品（含量為99.95%），香菇多糖氯化鈉注射液（海南聯(lián)合制藥工業(yè)有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：100 mL∶香菇多糖1 mg與氯化鈉0.9 g，批號：050101、050102、050103）。

1.3試劑

氫氧化鈉、硫酸、蒽酮、硝酸銀、糊精、熒光黃、硫酸銅、無水碳酸鈉、酒石酸鉀鈉、碳酸氫鈉、酚酞、草酸鉀、碘化鉀、硫代硫酸鈉、碘酸鉀、淀粉均為市售分析純。

2結(jié)果

2.1 測定波長的確定

取供試品2瓶，濃縮至約30 mL，加水分次轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。取新配制的蒽酮硫酸溶液（取0.2 g蒽酮溶于100 mL硫酸中）4 mL置于試管中，置冰浴中，沿管壁緩緩加入供試品溶液2 mL，分層后立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min；另取本品空白輔料（氯化鈉）1.812 g，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，與供試品同操作。以水為空白，在波長為400～800 nm的波長范圍內(nèi)掃描，測定紫外吸收光譜圖。結(jié)果顯示，香菇多糖氯化鈉注射液在625 nm處有最大吸收，空白輔料在此處無吸收。

2.2 測定方法的選擇

參照香菇多糖注射液國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS-1071（X-806）-2002]，擬定試驗(yàn)方法為：取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的香菇多糖對照品約10 mg，精密稱定，加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，加水分次轉(zhuǎn)移至500 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻。另取供試品2瓶，濃縮至約30 mL，加水分次轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，定容并搖勻。取新配制的蒽酮硫酸溶液（取0.2 g蒽酮溶于100 mL硫酸中）4 mL分別置于兩試管中，冰浴中分別沿管壁緩緩加入供試品溶液和對照品溶液各2 mL，分層后立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2005年附錄Ⅳ A），以水為空白，在625 nm的波長處測定吸光度，計(jì)算。

2.3精密度試驗(yàn)

取新配制的蒽酮硫酸溶液4 mL于試管中，置冰浴中，沿管壁緩緩加入供試品溶液2 mL，使分層，立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法在625 nm波長處測定吸收度，重復(fù)測定6次，見表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD = 0.87% < 2.0%，可以滿足含量測定的要求。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品6瓶，分別濃縮至約20 mL，分別加水分次轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻；照上述測定方法測定，見表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，RSD = 1.29% < 2.0%，能滿足本品含量測定的要求。

表2 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.5線性關(guān)系試驗(yàn)

精密稱取干燥至恒重的香菇多糖對照品20.3 mg，加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，加水分次轉(zhuǎn)移至500 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻（相對于含量測定濃度的200%）；分別精密量取上述溶液加水稀釋制成含量測定濃度的50%、80%、100%、120%、150%，在冰浴條件下，分別精密量取上述溶液各2 mL，沿管壁緩緩加至已精密加入蒽酮硫酸溶液4 mL的試管中，使分層，立即劇烈振搖，搖勻，置沸水浴中加熱6 min，取出，立即置冰浴中冷卻2 min，取出，搖勻，室溫放置10 min，照紫外-可見分光光度法以水為空白，在625 nm的波長處測定吸光度分別為0.181 6、0.294 2、0.371 5、0.440 6、0.552 7。

試驗(yàn)結(jié)果表明，香菇多糖在含量測定濃度的50%～150%范圍內(nèi)，吸光度與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r = 0.999 9），可滿足含量測定的要求。

2.6回收率試驗(yàn)

取干燥至恒重的香菇多糖對照品約8 mg、10 mg、12 mg（注：每個稱三份），加0.5 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，研磨，使溶解，分別加水分次轉(zhuǎn)移至已加入工藝比例混合的空白輔料的500 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。按（2.1.2）方法測定本品的回收率，見表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：選定的含量測定法平均回收率為99.66%，回收率均在98.0%～102.0%范圍，RSD = 1.04% < 2.0%，結(jié)果良好，可以滿足含量測定的要求。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果

3討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)方法的重現(xiàn)性非常理想，蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液在（10.15～30.45） μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r = 0.999 9），精密度RSD = 0.87%（n = 6），平均回收率為99.66%，RSD = 1.04%（n = 9）。經(jīng)以上方法學(xué)考察認(rèn)為，蒽酮-硫酸法測定香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖的含量較穩(wěn)定、可靠。

3.1 香菇多糖含量測定方法的選擇

本實(shí)驗(yàn)主要成果是成功地運(yùn)用蒽酮-硫酸法測定出香菇多糖氯化鈉注射液中香菇多糖的含量。

3.2 減少誤差的方法

為了減少含量測定中存在的誤差，在樣品濃縮過程中應(yīng)注意溶液暴沸及樣品的析出，由于濃硫酸遇水放熱，可能導(dǎo)致水解等一系列的反應(yīng)迅速進(jìn)行，因此選擇較大的反應(yīng)容器（25 mL納氏比色管），并于冰水浴中加入后緩緩搖勻的操作，使置沸水浴中之前反應(yīng)的發(fā)生盡可能??；同時要嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)過程中加熱時間是6 min，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)6 min是其反應(yīng)的最高點(diǎn)，時間過短或太長都會影響測定結(jié)果。

3.3 反應(yīng)靈敏度的影響

因樣品中含有其他可能消耗堿性硫酸銅試劑的物質(zhì)，而蒽酮-硫酸法所用的顯色劑有特異性，僅與樣品中特定的物質(zhì)反應(yīng)， 具有較高的靈敏度[4]。

3.4 供試品溶液濃度高低的選擇

紫外-可見分光光度法測定供試品溶液的吸光度讀數(shù)以0.3～0.7之間的誤差較小，因此我們配制供試品溶液時要確保其吸光度在這個范圍內(nèi)。

通過實(shí)驗(yàn)的研究和總結(jié)，成功制訂出了一種科學(xué)、合理、可行的測定香菇多糖氯化鈉注射液含量的方法，為保證藥物含量的可控性提供了有力依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王國佳，曹紅. 香菇多糖的研究進(jìn)展[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27（05）：451-455.

[2] 韋丁，陳健. 香菇多糖含量測定過程中加樣回收率的比較[J]. 食品研究與開發(fā)，2010，31（10）：155-157.

[3] 范曉良，顏繼忠，阮偉峰. 香菇多糖的提取、分離純化及結(jié)構(gòu)分析研究進(jìn)展[J]. 海峽藥學(xué)，2012，24（5）：1-4.

[4] 王國佳，曹紅. 香菇多糖中藥注射液含量測定方法的改進(jìn)[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（2）：139-140.

（收稿日期：2012-09-18）