胡曉嵐，馮乾健，張 蓉，湯麗倩，龔 文，虞英民

(1.杭州澳醫(yī)保靈藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310022;2.寧夏農(nóng)林科學院 植物保護研究所，寧夏 銀川 750002)

枸杞 (Lycium barbarum L.)屬于茄科多年生落葉灌木，主要包括枸杞L．chinense Mill.和寧夏枸杞L．barbayum L.。枸杞干果枸杞子具有抗氧化、抗衰老、調(diào)節(jié)免疫、降血糖、降血脂等多種功效［1］。由于野生資源有限而市場需求量又大，枸杞的人工栽培發(fā)展很快［2］。處于栽培條件下的枸杞同樣會遭受多種害蟲如蚜蟲、木虱、癭蚊等侵襲，生產(chǎn)上常使用農(nóng)藥防治。

吡蟲啉 (imidacloprid)，化學名稱1-(6-氯吡啶-3-吡啶基甲基)-N-硝基亞咪唑烷-2-基胺，CAS號 138261-41-3，最早由 Bayer CropScience開發(fā)，是一種以乙酰膽堿受體作為主要靶標的內(nèi)吸性殺蟲劑。毒死蜱 (chlorpyrifos)，化學名稱 O，O-二乙基-O-3，5，6-三氯-2-吡啶基硫逐磷酸酯，CAS號2921-88-2，最早由美國 Dow Chemical Company于1965年投入市場，是以乙酰膽堿酯酶作為主要靶標的有機磷殺蟲劑。這兩種殺蟲劑常被用于枸杞害蟲防治［3-6］。有關(guān)吡蟲啉和毒死蜱在枸杞中的殘留動態(tài)，已有文獻報道［7-12］，但是缺乏系統(tǒng)地比較。本文在相同時間按推薦劑量和加倍劑量對生長于相同環(huán)境下的枸杞植株噴施吡蟲啉和毒死蜱，噴藥后定期采集果實，測定兩種殺蟲劑在鮮果中的殘留。本項研究將有助于了解不同農(nóng)藥在枸杞果實中的消解特征，為枸杞害蟲防治用藥的篩選提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

受試藥劑分別為吡蟲啉2.5%可濕性粉劑 (山東京蓬生物藥業(yè)股份有限公司出品)和毒死蜱40%乳油 (山東華陽科技股份有限公司出品)。試驗于2007年7月在寧夏林科學院枸杞試驗基地進行，以5年生枸杞品種寧杞1號為試材。試驗共設(shè)吡蟲啉推薦劑量 (12.5 mg·L-1)、吡蟲啉加倍劑量 (25mg·L-1)、毒 死 蜱 推 薦 劑 量 (600 mg·L-1)、毒死蜱加倍劑量 (1 200 mg·L-1)及空白5個處理。每處理設(shè)3個重復，每小區(qū)9株，采用噴霧法施藥。分別于施藥后1 h和3，5，7，14，2l，28 d摘取果實樣品。無法及時測定的樣品冷藏于-20℃以下的冰柜內(nèi) (冷藏時間最長不超過90 d)。

1.2 吡蟲啉農(nóng)藥殘留分析

對于鮮果中的吡蟲啉，多采用酸化的極性較強的有機溶劑，如甲醇、乙腈等進行提取，用液-液分配法去除提取液中的極性雜質(zhì)，非極性雜質(zhì)用柱層析法去除，最后用高效液相色譜 (HPLC)法對吡蟲啉進行測定。本文參照張艷等［12］的方法并略作改動 (用C18固相萃取柱去除提取液中的非極性雜質(zhì))。

1.2.1 試劑

吡蟲啉標準品 (純度為99.8%)由農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所提供;色譜純乙腈、甲醇均為Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品;分析純甲醇、乙腈、乙酸乙酯、石油醚 (60～90℃)、二氯甲烷、氯化鈉 (使用前在140℃下烘烤4 h)、濃鹽酸均為國產(chǎn);超純水自制;AccuBOND ODS C18固相萃取小柱 (規(guī)格6 mL 500 mg)為Agilent產(chǎn)品。

1.2.2 儀器設(shè)備

Agilent 1100高效液相色譜儀，Kultra turrax高速勻質(zhì)機 (德國IKA公司)，N-EVAPTM111氮吹儀(美國 Organomation Associates Inc.)。

1.2.3 樣品提取

用組織搗碎機將采集的鮮果初步搗碎，準確稱取20.00 g，置于250 mL打漿瓶中，加入10%鹽酸0.5 mL，乙腈50 mL，高速勻漿2 min，靜置3 min，抽濾到裝有10 g氯化鈉的250 mL具塞刻度試管中，加塞，劇烈振蕩30 s，靜置30 min，使乙腈相和水相分層，從乙腈相中準確移取20.0 mL，放入250 mL圓底燒瓶，在40℃下N2吹至近干。

1.2.4 樣品凈化

用2 mL二氯甲烷+3 mL石油醚溶解提取物，將其轉(zhuǎn)移到預先用5 mL甲醇+5 mL石油醚順序活化的C18固相萃取柱上。用10 mL石油醚淋洗容器中殘留的提取物，一并上柱，棄去淋出液，將10 mL乙酸乙酯過柱，收集洗脫液，在55℃下氮吹至近干，用甲醇溶解殘留物并定容至2 mL，過0.45 μm濾膜，待測。

1.2.5 色譜條件

Agilent C18色譜柱 (4.6 m ×250 mm，5 μm)，柱溫30℃，流動相0～8 min，乙腈∶水0∶100，8～20 min，乙腈∶水 95∶5，流速 1.0 mL·min-1，檢測波長270 nm，進樣量20 μL，外標法定量。

1.2.6 標準曲線

準確量取吡蟲啉標準品準儲備液，用色譜甲醇稀釋，配制成濃度為 5.00，2.00，1.00，0.50，0.20，0.10，0.05 μg·mL-1的 工 作 液， 按 照1.2.5節(jié)設(shè)定的條件進行測定，在此基礎(chǔ)上以標準品濃度為自變量，以每一濃度所對應(yīng)的峰面積作為應(yīng)變量，采用DPS?建立線性方程。

1.2.7 添加回收率

準確稱取20.00 g空白樣品，分別加入濃度為0.10，1.00，10.00 mg·L-1的吡蟲啉標準品 1 mL，制成含量為 0.005，0.050，0.500 mg·kg-1的加標樣品，按照1.2.3和1.2.4節(jié)設(shè)定的方法對加標樣品進行前處理，再按1.2.5節(jié)設(shè)定的條件對吡蟲啉進行測定。

1.3 毒死蜱農(nóng)藥殘留分析

1.3.1 試劑

毒死蜱標準品 (純度99.5%，百靈威公司)，分析純乙腈、丙酮、石油醚 (60～90℃)、氯化鈉(使用前在140℃下烘烤4 h)、硫酸鈉 (使用前在馬福爐中灼燒2 h)、中性氧化鋁 (100～200目，使用前在馬福爐中灼燒4 h，再添加5%超純水)均為國產(chǎn)。

1.3.2 儀器設(shè)備

6890氣相色譜儀 (HP公司)，RE-85A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海吉眾有限公司)，N-EVAPTM111氮吹儀(美國 Organomation Associates Inc.)，30 cm×1.0 cm玻璃層析柱，恒溫振蕩器。

1.3.3 樣品提取

用組織搗碎機將采集的鮮果搗碎，準確稱取20.00 g，移入250 mL具塞三角瓶，加50 mL乙腈，加塞，以150 r·min-1的速度震蕩40 min，用三角漏斗過濾，濾液收集于100 mL具塞量筒，用10 mL乙腈洗濾渣，向濾液中加15 g氯化鈉，劇烈震蕩1 min，靜置10 min，準確移取上層提取液25 mL，置于250 mL平底燒瓶，于40℃下減壓濃縮至近干，用少量混合溶劑 (丙酮∶石油醚50∶50)將殘留物溶解。

1.3.4 樣品凈化

向玻璃層析柱中依次填入2 cm無水硫酸鈉，5 g中性氧化鋁，2 cm無水硫酸鈉，用30 mL石油醚預淋，然后將提取液上柱，用40 mL混合溶劑(丙酮∶石油醚5∶95)淋洗，用100 mL梨形燒瓶收集洗脫液，在40℃以下減壓濃縮近干，于室溫(約25℃)下用N2吹至近干，用丙酮溶解殘留物并定容至2 mL，待測。

1.3.5 色譜條件

ECD檢測器，HP-5石英毛細管色譜柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)，柱溫從80℃保持開始，以30℃·min-1的速度升至240℃，保持 2 min，再以10℃·min-1的速度升至260℃，保持5 min;進樣口溫度230℃，檢測器溫度250℃，進樣量1 μL，外標法定量。

1.3.6 標準曲線

準確取毒死蜱標準品儲備液，用丙酮配制成濃度為2.00，1.00，0.50，0.20，0.10，0.05，0.02 μg·mL-1的工作液，按照1.3.5設(shè)定的條件進行測定，在此基礎(chǔ)上以標準品濃度為自變量，以每一濃度所對應(yīng)的峰面積作為應(yīng)變量，采用DPS?建立線性方程。

1.3.7 添加回收率

準確稱取20.00 g空白樣品，分別加入濃度為0.10，1.00，10.00 mg·L-1的毒死蜱標準溶液 1 mL，制 成 含 量 分 別 為 0.005，0.050，0.500 mg·kg-1的加標樣品，按照1.3.3和1.3.4節(jié)對加標樣品進行前處理，再按1.3.5節(jié)設(shè)定的條件對毒死蜱進行測定。

2 結(jié)果和分析

2.1 線性關(guān)系

根據(jù)測定結(jié)果，獲得吡蟲啉的標準曲線:Y=103.184 1X+7.215 7，R2=0.999 9，說明5.00～0.05 μg·mL-1吡蟲啉濃度與其對應(yīng)的峰面積有良好線性關(guān)系;同理獲得毒死蜱的標準曲線:Y=82 524X+35.301，R2=0.999 9，說明在 2.00～0.02 μg·mL-1毒死蜱濃度與其對應(yīng)的峰面積有良好線性關(guān)系。

2.2 添加回收率

吡蟲啉、毒死蜱的添加回收率測定結(jié)果見表1。吡蟲啉的添加回收率 90.5% ～93.5%，RSD 2.2%～2.6%;毒死蜱的添加回收率95.4%～102.2%，RSD 3.5%～6.0%，符合農(nóng)藥殘留分析要求。

2.3 殘留動態(tài)

對采回的果實進行殘留分析 (表2)。

以取樣距離施藥時的天數(shù)為自變量 (t)，以測得樣品中受試藥劑的殘留量為應(yīng)變量 (Ct)，采用DPS?中的數(shù)學模型對數(shù)據(jù)進行擬合，其結(jié)果如表3所示。

表1 吡蟲啉和毒死蜱在枸杞中的添加回收率

表2 吡蟲啉和毒死蜱在枸杞鮮果中的殘留動態(tài)

表3 吡蟲啉和毒死蜱在枸杞鮮果中的消解方程

由表3中可知，在推薦劑量和加倍劑量下，吡蟲啉指數(shù)方程的決定系數(shù)分別為0.954 4和0.967 9，F(xiàn)值分別為125.6和180.9;毒死蜱指數(shù)方程的決定系數(shù)分別為0.994 7和0.980 6，F(xiàn)值分別為1 123和303.9。從決定系數(shù)和 F值判斷，無論是吡蟲啉還是毒死蜱，其在果實中的消解動態(tài)均能夠較好地符合指數(shù)方程。

在推薦劑量和加倍劑量下，吡蟲啉修正指數(shù)方程的決定系數(shù)分別為0.977 3和0.984 7，F(xiàn)值分別為107.5和160.9;毒死蜱修正指數(shù)方程的決定系數(shù)分別為0.995 3和0.981 7，F(xiàn)值分別為424.9和134.1。與指數(shù)方程的決定系數(shù)和F值相比較，說明吡蟲啉，毒死蜱的修正指數(shù)方程能更好擬合其在果實中的消解動態(tài)。

用修正指數(shù)方程擬合受試藥劑在果實中的消解半衰期發(fā)現(xiàn)，在推薦劑量和加倍劑量下，吡蟲啉的半衰期分別為3.9和4.3 d，毒死蜱的半衰期分別為1.4和1.1 d?？梢姸舅莉缭邗r果中的消解速度明顯快于吡蟲啉。

3 討論

關(guān)于吡蟲啉在枸杞中的殘留，文獻顯示［7-12］，吡蟲啉的消解半衰期介于1.6～4.3 d。本項研究顯示，吡蟲啉在推薦劑量和加倍劑量下的半衰期分別為3.9和4.3 d，其數(shù)值落在前人結(jié)論范圍之內(nèi);毒死蜱在推薦劑量和加倍劑量下的半衰期分別為1.4和1.1 d，略短于張怡［9］等報道的2.9～3.2 d。

在同一地區(qū)長勢相同的植株上同時噴藥之后，毒死蜱在枸杞果實中的消解半衰期明顯短于吡蟲啉，對此本文無法給出確切解釋。藥劑理化性質(zhì)的差異是可能的原因之一。

根據(jù)IUPAC(International Union of Pure and Applied Chemistry)提供的資料，毒死蜱和吡蟲啉在25℃下的蒸氣壓分別為1.4 mPa和4.0×10-7mPa，在20℃、pH 7.0下的正辛醇/水分配系數(shù)log P分別為4.7和0.6。野外噴施的毒死蜱有可能因極性過低而較難被植株葉片和果實吸收。未被吸收的藥劑又可能因蒸氣壓較高而較快揮發(fā)。吡蟲啉則有可能因蒸氣壓過低而較難揮發(fā)，又因極性適中而較易被植株葉片和果實吸收。造成毒死蜱在枸杞果實中的消解半衰期明顯短于吡蟲啉的原因還有可能是毒死蜱在植株中的代謝率高于吡蟲啉，但目前還沒有證據(jù)能夠證實這一猜測。

從害蟲防治的角度看，消解快不利于藥效的保持，而從食品安全的角度，消解快的農(nóng)藥不易造成殘留超標。進行選擇時，農(nóng)藥使用者需要同時考慮兩方面因素，在兩者之間尋找平衡。

對于吡蟲啉和毒死蜱，我國目前尚未制定出針對枸杞鮮果的最高殘留限量 (MRL)［13］。歐盟的相關(guān) MRL值均為0.5 mg·kg-1［14］。既然已經(jīng)證明修正指數(shù)方程能夠更好擬合這兩種殺蟲劑在果實中的消解動態(tài)，將此MRL值分別帶入表5中的方程Ⅱ，Ⅳ，Ⅵ和Ⅷ，求得相對應(yīng)的t值分別為7.6，12.1，2.9和4.8 d。由此表明，按照推薦劑量和加倍劑量施用吡蟲啉的田塊，果實的采收至少應(yīng)該在施藥7.6和12.1 d后進行;按照推薦劑量和加倍劑量施用毒死蜱的田塊，果實的采收至少應(yīng)該在施藥2.9和4.8 d后進行。需要指出的是，有關(guān)安全間隔期(PHI)的上述結(jié)論是在施藥當?shù)睾彤敃r的氣候條件，針對特定長勢的植株群體而得出的。如果上述前提發(fā)生改變，兩種藥劑的野外消解動態(tài)或許會發(fā)生相應(yīng)改變，PHI值也會發(fā)生相應(yīng)變化。

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