范桂強 柳俊萍 頡維民 董軍杰

(河北省衡水市食品藥品檢驗所化學室，河北衡水 053000)

高效液相色譜法測定養(yǎng)陰清肺丸中芍藥苷的含量

范桂強 柳俊萍1頡維民1董軍杰△

(河北省衡水市食品藥品檢驗所化學室，河北衡水 053000)

色譜法，高壓液相;芍藥甙;分析;丸劑

養(yǎng)陰清肺丸是由生地黃、玄參、麥門冬、白芍藥、川貝母、牡丹皮、薄荷、甘草8味藥組成的中藥復方制劑，具有養(yǎng)陰潤燥、清肺利咽的功能。主要用于陰虛肺燥，咽喉干痛，干咳少痰或痰中帶血。白芍藥斂陰泄熱，牡丹皮涼血消腫，是該方劑的主要成分之一?，F行藥品質量標準中無白芍藥、牡丹皮中芍藥苷的含量測定方法，為了進一步控制產品質量，提高藥品標準，本研究采用高效液相色譜(HPLC)法測定養(yǎng)陰清肺丸中的主要成分芍藥苷的含量，結果如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與制劑 高效液相色譜儀:Waters e2695高效液相色譜儀，檢測器:Waters 2489紫外檢測器;色譜工作站:Empower。養(yǎng)陰清肺丸為從市面購得，北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產(國藥準字Z11020179，批號:0013657、0013659、0013660);芍藥苷對照品(批號:2011 －07－36—2010－03－05，中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純;乙醇為分析純;水為純化水。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 Waters色譜柱(SymmetryC18，3.9 mm×150 mm，5 μm);流動相:乙腈 － 0.1% 磷酸溶液(14∶86);流速:1.0 mL/min;檢測波長:230 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL;理論板數:按芍藥苷峰計應不低于3 000;芍藥苷峰與其前后相鄰峰的分離度均＞1.5。

1.2.2 試驗溶液的制備

1.2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品0.010 46 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻;精密吸取5 mL，置25 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中含20 μg的溶液，即得。

1.2.2.2 供試品溶液的制備 取養(yǎng)陰清肺丸約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理50 min，放冷，再稱定質量，用稀乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得。

1.2.2.3 陰性對照溶液的制備 按養(yǎng)陰清肺丸處方比例和工藝同法制成缺牡丹皮及白芍藥的陰性樣品，按上述供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。

1.2.2.4 樣品測定干擾性試驗 按上述色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入色譜儀，測定。供試品色譜中，芍藥苷峰與其他峰分離較好，陰性樣品在芍藥苷出峰處無干擾峰出現，結果表明本法可行。

1.2.3 線性關系考察 精密稱取芍藥苷對照品0.021 07 g，置100 mL容量瓶中，加稀乙醇溶解至刻度，搖勻，分別精密量取 2、3.5、5、6、7.5、9 mL，置 50 mL 容量瓶中，加稀乙醇制備成不同濃度對照品溶液。精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，按上述條件分別測定芍藥苷的吸收峰峰面積。

1.2.4 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10 μL，重復進樣5次，測得峰面積并計算。

1.2.5 重復性試驗 取北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠生產的養(yǎng)陰清肺丸(批號:0013657)樣品，按0.5 g精密稱取樣品6份，按1.2.2項制備供試品溶液，吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定并計算含量。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗 取1.2.5供試品溶液(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號:0013657)，每隔2 h進樣測定峰面積。

1.2.7 加樣回收率試驗 取已知含量的養(yǎng)陰清肺丸樣品(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批號:0013657)，取0.25 g，精密稱定共9份，分別精密加入濃度為 7.380 0、9.615 0、11.070 0 mg/mL 的芍藥苷對照品溶液50 mL(精密稱取芍藥苷對照品0.014 76、0.012 82 g置100 mL的容量瓶中，分別加稀乙醇使溶解，并稀釋至刻度，再分別吸取濃度為 0.1476 mg/mL的對照品 10、15 mL，濃度為0.1282 mg/mL的對照品溶液15 mL，分別置于200 mL容量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用)，按1.2.2項下自“精密加入稀乙醇50 mL”起制備得供試品溶液，用外標法測定，計算回收率。

1.2.8 樣品測定 按 1.2.1、1.2.2 方法測定 3 批樣品含量。

2 結果

2.1 對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液的色譜見圖1～3。

圖1 芍藥苷對照品HPLC圖

圖2 樣品溶液HPLC圖

圖3 陰性樣品溶液HPLC圖

2.2 芍藥苷對照品的精密度試驗結果 見表1。

表1 芍藥苷對照品的精密度試驗結果

由表1可見，芍藥苷對照品精密度良好。

2.3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結果 見表3。

表2 供試品溶液穩(wěn)定性試驗結果

由表2可見，供試品溶液在12 h內穩(wěn)定。

2.4 芍藥苷回收率測定結果 見表3。

表3 芍藥苷回收率測定結果

由表3可見，芍藥苷含量測定加樣回收率試驗符合規(guī)定。

2.5 芍藥苷線性關系考察結果 見表5。

表4 芍藥苷線性關系考察結果

由表4可見，峰面積為3次測定平均值。以進樣量(μg)與峰面積進行回歸計算，得回歸方程:Y=1.258 3×106X+2.306 4 ×104 r=0.999 5，表明芍藥苷在0.081 ～0.365 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.6 含量測定重復性試驗結果 見表5。

表5 含量測定重復性試驗結果

由表5可見，6次含量測定數據重復性良好。

2.7 樣品中芍藥苷含量測定結果 見表6。

表6 樣品中芍藥苷含量測定結果

由表6可見，芍藥苷含量均符合規(guī)定。

3 討論

養(yǎng)陰清肺丸是中藥復方制劑，成分復雜，為達到芍藥苷的理想分離效果，本試驗參照《中國人民共和國藥典2010年版》一部方法，采用乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)的流動相［1］，測定本品中芍藥苷的含量，對流動相比例進行了調整，比較了乙腈 －0.1%磷酸溶液(13∶87)、(15∶85)、(16∶84)等不同比例流動相的分離效果，結果證明(14∶86)的流動相可使芍藥苷的峰形對稱，分離完全，效果最好。通過對不同時間超聲提取結果的比較，確定超聲50 min最好。通過對不同提取試劑的試驗比較，確定稀乙醇作為提取試劑效果最好。

用本法測定養(yǎng)陰清肺丸中芍藥苷的含量作為定量指標具有實際意義，方法簡便、快速，準確可靠。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版:一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:96.

R284.1

A

1002－2619(2012)07－1063－03

△通訊作者:河北省醫(yī)學情報研究所，河北 石家莊 050071

1 河北省衡水市食品藥品檢驗所中藥室，河北 衡水 053000

范桂強(1978—)，男，主管藥師，學士。從事藥品檢驗與標準研究工作。研究方向:藥品檢驗與分析。

2012－04－11)