韓云國(guó)

山東省濱州市中心醫(yī)院藥劑科，山東濱州 251700

消化道腫瘤是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展及生活質(zhì)量的提高，不合理飲食對(duì)消化道腫瘤發(fā)生有促進(jìn)作用，因此，消化道腫瘤發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)[1]。同時(shí)，由于很多人對(duì)疾病意識(shí)不足，對(duì)消化道腫瘤的預(yù)防很難達(dá)到令人滿意的效果，臨床上接受治療的消化道腫瘤患者其疾病往往已發(fā)展到晚期[2]。眾所周知，單純手術(shù)治療消化道腫瘤的療效一般都無(wú)法達(dá)到期望目標(biāo)，大量研究表明，術(shù)后輔助放、化療可以提高術(shù)后生存率及生存時(shí)間，減少?gòu)?fù)發(fā)。本研究對(duì)我院近期收治的30例中晚期消化道腫瘤病例手術(shù)切除標(biāo)本行多種常規(guī)化療藥物的敏感性測(cè)定，以確定消化道腫瘤體外化療藥物敏感性與臨床特征的相關(guān)性，現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年10月～2010年10月間于我院普通外科四病區(qū)住院并接受手術(shù)治療的消化道腫瘤患者及其手術(shù)切除標(biāo)本，共入選患者30例，其中，男18例，女12例；年齡25～85歲，平均68.5歲，多為老年人。術(shù)后病理Ⅰ期8例，Ⅱ期6例，Ⅲ期16例。所有患者均符合相關(guān)腫瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 化療藥物 本研究選用3種臨床常用化療藥物：5-氟脲嘧啶（5-Fu，100 mg/L）、絲裂霉素（MMC，4 mg/L）、順鉑（DDP，4 mg/L）。

1.2.2 腫瘤細(xì)胞懸液制備 無(wú)菌條件下取新鮮手術(shù)切除的癌組織約1 cm3，用生理鹽水沖洗或銳器剔除等物理方法初步去除其表面的血跡、脂肪、腸內(nèi)容物等，放置入含有慶大霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室。用含有慶大霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液洗滌腫瘤組織3次，以進(jìn)一步清除標(biāo)本表面的血跡、脂肪，放置于無(wú)菌RPMI 1640培養(yǎng)液中，機(jī)械粉碎，加入0.5%Ⅳ型膠原酶3～5 mL，4℃消化12～16 h以去除纖維結(jié)締組織，1 500 r/min離心10 min，棄上清，沉淀物中加入含有10%牛胎血清、青霉素及鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)液，并吹打成細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106/mL。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 試驗(yàn)設(shè)為3組，將3種臨床常用化療藥物藥液加入96孔板，將96孔板放置入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后，取出向每孔內(nèi)各加入5 mg/mL MTT溶液20μL后放回培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4 h，然后向每孔內(nèi)加入二甲亞砜100μL，于搖床上搖晃5 min后，于酶標(biāo)儀上以570 nm檢測(cè)光密度值（OD值）。

1.2.4 藥物抑制率計(jì)算 抑制率＝（細(xì)胞對(duì)照組OD+空白對(duì)照組OD-試驗(yàn)組OD）/（細(xì)胞對(duì)照組OD+空白對(duì)照組OD）×100%，重復(fù)多次試驗(yàn)獲得多組OD值，并求出其平均值以計(jì)算抑制率[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用單因素方差分析比較不同藥物對(duì)腫瘤組織抑制率差異，采用χ2檢驗(yàn)比較各藥物抑制率的差異以及與臨床分期等指標(biāo)的相關(guān)性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同藥物對(duì)消化道腫瘤的敏感性情況

經(jīng)過(guò)觀察與分析，MMC最大抑制率為85.5%，最小抑制率為6.3%，平均抑制率為42.2%；5-Fu最大抑制率為81.2%，最小抑制率為4.4%，平均抑制率為35.6%；DDP最大抑制率為58.7%，最小抑制率為0，平均抑制率為31.2%。提示絲裂霉素體外化療敏感性最強(qiáng)。見(jiàn)表1。

表1 不同藥物對(duì)消化道腫瘤的敏感性情況（%）

2.2 腫瘤分期與化療抑制率的關(guān)系

本文結(jié)果顯示，各藥物在不同腫瘤分期下不敏感例數(shù)較多，高度敏感例數(shù)較少，各藥物敏感性與腫瘤分期無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 不同化療藥物敏感性與腫瘤分期的關(guān)系（例）

3 討論

惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命的疾病之一，其轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)是治療失敗的主要原因，手術(shù)切除聯(lián)合術(shù)后輔助化療已經(jīng)成為大多數(shù)惡性腫瘤的治療原則[4]。近年研究表明，術(shù)前輔助放、化療可以在術(shù)前對(duì)腫瘤進(jìn)行降級(jí)及降期，創(chuàng)造手術(shù)切除的機(jī)會(huì)[5]。近年消化道腫瘤的輔助化療藥物及相應(yīng)給藥方案得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，從最初的5-Fu、DDP到后來(lái)的氟脲嘧啶甲氨酸鹽、卡鉑、草酸鉑等無(wú)論從療效還是副作用方面都取得了很大的改進(jìn)，但是由于惡性腫瘤存在異質(zhì)性，即不同部位腫瘤的不同病理類型及相同類型腫瘤的不同分期與分級(jí)，其對(duì)化療藥物的敏感性可能存在不同。

體外化療藥物敏感性試驗(yàn)是為了選擇敏感性高的藥物而誕生并發(fā)展的試驗(yàn)方法，本文所采用的四唑鹽染色法，基本原理為活細(xì)胞特別是增生期細(xì)胞的線粒體中琥珀酸脫氫酶通過(guò)能量代謝，能將MTT還原成藍(lán)紫色的不溶于水的甲脂，而死細(xì)胞或紅細(xì)胞無(wú)此能力，其形成量與細(xì)胞活力及活細(xì)胞的量成正比。因此，可通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度判斷甲脂的量，再利用比色法間接反映腫瘤細(xì)胞活力及數(shù)量的變化，從而研究化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制及殺傷作用[6]。

本試驗(yàn)采用作用機(jī)制不同的3種化療藥，其中，5-Fu與內(nèi)源性甲酰四氫葉酸及脫氧胸苷酸合成酶形成不易解離的三聯(lián)復(fù)合物，阻止脫氧尿苷酸甲基化為脫氧胸苷酸，從而影響腫瘤DNA合成，臨床上曾應(yīng)用其治療胃腸道來(lái)源的惡性腫瘤。絲裂霉素C具有烷化作用，能與腫瘤細(xì)胞DNA雙鏈交叉，連結(jié)或使DNA降解，抑制其復(fù)制，發(fā)揮抗腫瘤作用，臨床上應(yīng)用于膀胱癌[7]。DDP通過(guò)鉑離子與DNA鏈上的堿基形成交叉聯(lián)結(jié)，從而破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致細(xì)胞的死亡，臨床曾將其應(yīng)用于胃腸道來(lái)源的惡性腫瘤，現(xiàn)已為草酸鉑替代[8]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同藥物對(duì)消化道腫瘤的抑制率有明顯差異，敏感率排序?yàn)镸MC>5-Fu>DDP，這與臨床常規(guī)用藥有一定的差異，類似研究也有相同發(fā)現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，MMC最大抑制率為85.5%，最小抑制率為6.3%，平均抑制率為42.2%；5-Fu最大抑制率為81.2%，最小抑制率為4.4%，平均抑制率為35.6%；DDP最大抑制率為58.7%，最小抑制率為0，平均抑制率為31.2%。本研究結(jié)果還顯示，各藥物在相應(yīng)濃度下敏感性與腫瘤分期無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。有報(bào)道稱，依據(jù)MTT法試驗(yàn)結(jié)果化療的患者較經(jīng)驗(yàn)性用藥的患者，在有效率、3年生存率、復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移率等方面存在優(yōu)勢(shì)。

總之，體外腫瘤藥敏試驗(yàn)可以判定各化療藥對(duì)腫瘤組織的敏感性，為臨床標(biāo)準(zhǔn)化化療用藥及個(gè)體化化療提供依據(jù)，其作用機(jī)制獨(dú)特，對(duì)消化道腫瘤的輔助化療有一定幫助。

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[8]Folkesson J，Birgisson H，Pahalman I，et al.Swedish Rectal Cancer Trial：long lasting benefits from radiotherapy on survival and local recurrence rate[J].J Clin Oncol，2005，23（24）：5644-5650.