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        丹莪婦康煎膏對子宮內膜異位癥模型大鼠血漿TXB2和6-Keto-PGF1α的影響

        2012-12-23 06:10:54賀克劉姣李彩霞劉麗華李清
        藥品評價 2012年17期
        關鍵詞:血漿模型

        賀克,劉姣,李彩霞,劉麗華,李清

        1.石家莊市第四醫(yī)院藥學部,河北石家莊 050011;2. 河北醫(yī)科大學中醫(yī)學院藥學部,河北石家莊 050091

        子宮內膜異位癥(EMS)為育齡婦女的常見疾病,是指子宮內膜腺體及間質異位并種植、生長于子宮腔體以外部位[1]。盆腔疼痛為EMS主要臨床癥狀之一,給女性帶來了極大痛苦,嚴重影響了女性的身心健康。近年來,因其發(fā)病率逐年上升而受到醫(yī)學界的關注,但其發(fā)病機理至今不明。丹莪婦康煎膏具有活血化瘀,疏肝理氣,調經止痛,軟堅化積功效,為臨床治療EMS的常用中成藥,對EMS患者出現(xiàn)的經期不適、痛經等癥狀具有較好療效。為觀察丹莪婦康煎膏對EMS的防治作用以及其抑制EMS盆腔疼痛的作用機制,本實驗采用子宮內膜自體移植法建立大鼠EMS模型,通過觀察異位子宮內膜組織形態(tài)學改變,血漿血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α的含量變化,以期為臨床應用提供參考及依據。

        1 材料

        1.1 動物 Wistar大鼠,清潔級,雌性,體重180~200g,由河北省實驗動物中心提供,實驗動物使用許可證 SYXK(冀)2006-0047,動物合格證號1009075。飼養(yǎng)于溫度20~23℃,濕度45~60%,過氧乙酸溶液消毒環(huán)境。

        1.2 藥物 丹莪婦康煎膏,昆明滇虹藥業(yè)有限公司,批號100404;孕三烯酮,北京紫竹藥業(yè),批號53110101;慶大霉素,石家莊制藥集團有限公司,批號068100905;苯甲酸雌二醇,上海通用藥業(yè)股份有限公司,批號009004。

        1.3 試劑 血栓烷B2放射免疫分析藥盒,北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司;6-酮-前列腺素F1α放射免疫分析藥盒,北京普爾偉業(yè)生物科技有限公司。

        1.4 儀器 超凈工作臺,蘇州凈化設備有限公司;5417R型離心機,德國Eppendorf公司;756MC型紫外-可見分光光度計,上海精密科學儀器有限公司;全自動γ放免分析儀,北京金泉水科技有限公司。

        2 方法

        2.1 動物 造模采用自體移植法建立EMS大鼠模型, 造模前2天,大鼠每日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg體重促情,假手術組肌肉注射等容量生理鹽水。手術時,大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉0.2mL/100g體重,待麻醉后固定于操作板上。開腹找到子宮,暴露左側子宮,在離卵巢約1cm處,分離附著于子宮肌壁的脂肪和結締組織,兩端分別用手術線結扎,剪取中間約1cm長子宮組織,縱向剖開宮腔,暴露子宮內膜,切取5mm×5mm的子宮壁塊[1]。在腹壁切口右側的腹肌與皮下筋膜層之間打隧道,以正好能置入子宮壁塊為宜,將子宮壁塊平整的置入右側隧道底部,使內膜面緊貼腹肌,常規(guī)關閉腹腔[2]。假手術組按上述方法切取子宮組織,丟棄,關腹,其余操作同上。術后各鼠腹腔注射慶大霉素0.4萬U/只,連續(xù)5d。術后次日,各鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.1mg/kg體重,每隔4d1次,共3次,以促進移植內膜的生長[3],假手術組肌肉注射等容量生理鹽水。術后每周觸摸包塊2次,觀察是否出現(xiàn)包塊及包塊的體積變化。術后第21d,將大鼠麻醉后固定,開腹,觀察異位內膜形態(tài)學變化。以游標卡尺測量異位內膜組織體積,若體積增大≥8mm3,并出現(xiàn)液體積聚,隆起呈透明小囊狀,則為造模成功。

        2.2 分組與處理 取造模成功的大鼠40只,隨機分為模型組(MG),丹莪婦康煎膏高劑量組(DFD-H,6g/kg·d)、低劑量組(DFD-L,3g/kg·d)、孕三烯酮組(GSG,0.5mg/kg·d),每組10只。另設假手術組(SHM)大鼠10只。各組大鼠每日灌胃給藥(或蒸餾水)一次,給藥容量為10mL/kg體重,連續(xù)30d。末次給藥后禁食12h,麻醉,開腹,腹主動脈取血。觀察異位子宮內膜生長情況,以游標卡尺測量其長、寬、高,并快速剪取異位子宮內膜,以10%甲醛液固定。

        2.3指標檢測

        2.3.1 組織形態(tài)學觀察 取異位子宮內膜組織,常規(guī)石蠟包埋,作4μm連續(xù)切片,HE染色,觀察子宮內膜組織形態(tài)學變化。

        2.3.2 生化指標檢測 采用放免法測定血漿血栓烷,B2(TXB2) 6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PG1α)含量。

        圖 1 各組大鼠異位病灶體積比較Fig 1 The ectopic lesion volume of rats in each group

        3 結果

        3.1 異位病灶的外觀 觀察EMS模型大鼠腹腔內有廣泛粘連,可見移植物體積顯著增大,呈近圓形,囊狀,表面有血管生長,內有淡黃色透明積液。經藥物治療后,腹腔內粘連減少,移植物體積顯著縮小且部分萎縮,囊內液體較少或基本消失。各組異位病灶體積比較見圖1。 與模型組相比:**P<0.01。

        3.2 異位病灶的形態(tài)學 觀察對異位病灶進行形態(tài)學觀察可見:模型組大鼠橫紋肌旁可見子宮內膜組織,腺腔體積較大,腺上皮呈單層柱狀,間質致密,見圖2。以孕三烯酮治療后,異位腺體幾乎不可見,見圖3。以丹莪婦康煎膏治療后,異位腺腔體積明顯減小,并有部分細胞呈萎縮狀,腺腔內有粒細胞浸潤,見圖4、5。

        3.3 丹莪婦康煎膏 對血漿血栓烷B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量的影響從表1結果可見,與假手術組相比,模型組大鼠血漿TXB2含量顯著升高(P<0.01),6-Keto-PGF1α含量顯著降低(P<0.01),TXB2與6-Keto-PGF1α比值顯著升高(P<0.01)。與模型組相比,丹莪婦康煎膏各劑量組大鼠血漿TXB2含量顯著降低(P<0.01);丹莪婦康煎膏高劑量組大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量明顯升高(P<0.05),低劑量組也有升高趨勢,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);各劑量丹莪婦康煎膏均能使大鼠血漿TXB2與6-Keto-PGF1α比值較模型組顯著降低(P<0.01)。

        圖 3 孕三烯酮組異位病灶組織學觀察(HE×100)Fig 3 The ectopic lesions histologic observation of the gestrinone group (HE × 100)

        圖 4 低劑量組異位病灶組織學觀察(HE×100) Fig 4 The ectopic lesions histologic observation of the low-dose group (HE × 100)

        圖 5 高劑量組異位病灶組織學觀察(HE×100)Fig 5 The ectopic lesions histologic observation of the high-dose group (HE × 100)

        表 1 丹莪婦康煎膏對EMS大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量的影響(n=10, ±s)Tab 1 The influence of DFD on the EMS rats' plasma 6-Keto-PGF1α(n=10, ±s)

        表 1 丹莪婦康煎膏對EMS大鼠血漿6-Keto-PGF1α含量的影響(n=10, ±s)Tab 1 The influence of DFD on the EMS rats' plasma 6-Keto-PGF1α(n=10, ±s)

        組 別TXB2(ng/mL)TXB2/6-Keto-PGF1α SHM 3.79±0.60**836.19±452.29**5.52±2.66**MG5.88±0.67 364.49±74.42 16.88±4.36 GSG 5.14±0.62* 846.20±434.27**6.80±1.85**DFD-H 4.80±0.51**687.31±248.51* 7.79±2.64**DFD-L 4.86±0.67**648.84±208.55 4.81±2.33**6-Keto-PGF1α(pg/mL)

        4 討論

        子宮內膜異位癥(EMS)是育齡婦女常見疾病之一,雖為良性疾病,但其引起的痛經、性交痛、不孕等對女性的生活和健康卻帶來了極大的影響。目前臨床上尚無治愈EMS的藥物,只能緩解癥狀或控制疼痛。近年來,中醫(yī)藥治療EMS因其療效好,不良反應低,易為患者接受,受到了醫(yī)學界的廣泛關注。中醫(yī)認為,EMS屬于痛經、癥瘕、不育等范疇,與血瘀有關。由于血瘀而致氣血運行不暢,“不通則痛”;或胞宮失于濡養(yǎng),“不榮則通”,而出現(xiàn)痛經,臨床常以行氣活血,化瘀止痛藥進行治療[4]。丹莪婦康煎膏,由紫丹參、莪術、竹葉柴胡、三七、赤芍、當歸、三棱、香附、延胡索、甘草組成,具有活血化瘀、疏肝理氣、調經止痛、軟堅化積功效,對婦女瘀血阻滯所致月經不調、痛經、經期不適、盆腔子宮內膜異位癥見上述癥狀者均具有較好療效。為探究丹莪婦康煎膏緩解EMS盆腔疼痛的作用機制,本實驗通過觀察異位子宮內膜組織形態(tài)學改變,血漿血栓烷B2、6-酮-前列腺素F1α的含量變化,以期為臨床應用提供參考及依據。

        現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),E M S痛經患者血漿血栓烷A2(TXA2)含量顯著升高,前列環(huán)素(PGI2)含量顯著降低[5]。TXA2為血小板微粒體合成的血管收縮劑,能夠使血小板內cAMP減少,并引起Ca2+內流,造成血小板聚集性增強。而前列環(huán)素(PGI2)則是一種抑制血小板聚集的物質,并具有擴張血管的作用。正常情況下,機體通過調節(jié)TXA2及PGI2含量保持平衡,調控血管舒縮、血小板聚集[6-8]。而臨床研究發(fā)現(xiàn),EMS患者的TXA2、PGI2比值較正常人升高,造成血管收縮,血小板聚集性高,進而子宮平滑肌血流減少,出現(xiàn)痙攣性收縮,引起盆腔疼痛。由于TXA2及PGI2均不穩(wěn)定,極易代謝為TXB2、6-Keto-PGF1α,因此本研究對EMS大鼠血漿TXB2、6-Keto-PGF1α含量進行檢測。結果顯示,模型組大鼠血漿TXB2含量顯著升高,6-Keto-PGF1α含量顯著降低,二者比值顯著升高,與臨床報道吻合。

        應用丹莪婦康煎膏進行治療后,可見EMS大鼠腹腔內粘連減少,移植物體積顯著減?。徊±砬衅梢姰愇幌偾惑w積減小,并有部分細胞萎縮。消除異位病灶是丹莪婦康煎膏治療EMS盆腔疼痛的根本原因。本研究還發(fā)現(xiàn),丹莪婦康煎膏能夠通過顯著降低血漿TXB2含量,明顯升高6-Keto-PGF1α含量,顯著降低TXB2與6-Keto-PGF1α比值,從而改善子宮平滑肌血管,緩解痙攣,減少盆腔疼痛。

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