劉宏建 黃 瑋（通訊作者） 孫衛(wèi)國 王廣科 馬 崧 方志慧

1）河南省人民醫(yī)院耳鼻喉科 鄭州 450003 2）河南省醫(yī)學情報研究所 鄭州 450003 3）鄭州大學解剖學教研室 鄭州 450052

臨床發(fā)現(xiàn)，一些病人在前庭神經(jīng)切斷術后出現(xiàn)耳鳴性質(zhì)的改變，或耳蝸神經(jīng)切斷后出現(xiàn)眩暈或眼震，這些現(xiàn)象提示前庭神經(jīng)系統(tǒng)和耳蝸神經(jīng)系統(tǒng)可能存在著解剖上的連接［1-2］。動物實驗證實，在前庭上神經(jīng)束中有大量的纖維對純音刺激有靜息電位的改變［3］。上述臨床現(xiàn)象和動物實驗結果提示耳蝸系統(tǒng)和前庭系統(tǒng)可能存在著相互的神經(jīng)纖維投射。本實驗擬研究Wistar大鼠耳蝸核團是否存在向前庭終末器官的傳出神經(jīng)投射。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物：健康Wistar大鼠20只，雄性，體質(zhì)量（290±5）g。分為實驗組和對照組，每組10只。10只動物在腦干耳蝸核團注射綠色順行熒光示蹤劑PHA-L，10只動物在腦干耳蝸核團注射生理鹽水作為對照。5d后處死動物，獲取耳蝸和前庭外周器官，EDTA 脫鈣后行迷路連續(xù)冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察熒光細胞在前庭外周器官的分布。順行熒光神經(jīng)示蹤劑Lectin PHA-L Conjugates（PHA-L，Invitrogen L-11270），1mg溶于1mL 無菌去離子水中，內(nèi)含Alexa Fluor 488，其吸收波長／發(fā)射波長為495nm／519nm，4℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 實驗儀器：小動物腦立體定位儀：江灣一型，國產(chǎn)。熒光顯微鏡：Leica DMR，德國。激光共聚焦顯微鏡：Leica DMIRZ2，德國。

1.1.3 耳蝸核團的定位方法：由于290克的成年Wistar大鼠腦已經(jīng)發(fā)育成熟，可在圖譜中直接讀出耳蝸核團的坐標范圍［3］。

1.2 耳蝸核團示蹤劑PHA-L注射法 大鼠麻醉后，調(diào)節(jié)動物腦立體定位儀將定位儀兩側的耳桿插入大鼠外耳道骨部并刺破鼓膜，保持大鼠顱頂處于水平面上，將大鼠頭部水平的固定于腦立體定位儀上。切開皮膚及皮下組織及顱頂骨膜后，充分止血并顯露前后囟，調(diào)整高度使前后囟處于同一水平上。以前囟為基準點，確定各結構在顱頂部的垂直投影點，并在相應顱骨處鉆直徑約4mm 的孔，直至暴露硬腦膜。小心剪開并翻起硬腦膜，根據(jù)耳蝸核團的坐標，將一端連接0.5μL微量注射器內(nèi)充注射藥物的玻璃電極緩慢的插入耳蝸核團內(nèi)。調(diào)整微泵注藥速度為0.01μL／m，將藥物導入大鼠耳蝸核團中。在注射后將電極在原位留置5 min，拔除電極后，縫合創(chuàng)口，動物置于原環(huán)境中飼養(yǎng)［4-5］。

1.2.1 迷路器官取材和脫鈣：5d后大鼠麻醉，獲取耳蝸和前庭迷路器官，生理鹽水沖洗后放入10%EDTA 液中脫鈣6～10d后連續(xù)冰凍切片。

1.2.2 組織切片的觀察：晾干的切片在常溫下中性樹脂封片，光鏡、熒光顯微鏡下觀察拍照。

2 結果

在Wistar大鼠腦干耳蝸核團注射綠色順行熒光示蹤劑PHA-L后在注射同側聽神經(jīng)和前庭終末器官發(fā)現(xiàn)綠色示蹤劑（見圖1-3），提示在Wistar大鼠耳蝸核團存在向前庭終末器官的神經(jīng)投射。

圖1 大鼠腦干耳蝸核團注射綠色熒光示蹤劑 （熒光顯微鏡100×）

圖2 大鼠前庭神經(jīng)和終末器官發(fā)現(xiàn)綠色示蹤劑 （熒光顯微鏡40×）

圖3 大鼠前庭神經(jīng)和終末器官發(fā)現(xiàn)綠色示蹤劑 （熒光顯微鏡40×）

3 討論

幾個實驗證實球囊存在向耳蝸核團的神經(jīng)纖維投射。有實驗利用辣根過氧化物酶在外周前庭注射后，發(fā)現(xiàn)同側耳蝸核團內(nèi)有明顯的標記細胞，這些神經(jīng)元和神經(jīng)纖維可能是前庭和耳蝸聯(lián)系的形態(tài)基礎［6］。有研究證實在豚鼠球囊的前后兩部分分別注射辣根過氧化物酶后，發(fā)現(xiàn)球囊的后部分存在向耳蝸核團的神經(jīng)投射，而前部分則沒有，這更加精確說明了球囊可能參與了聲音的感知過程［7］。有作者在豚鼠前庭上神經(jīng)和球囊注射辣根過氧化物酶和麥芽凝集素標記的辣根過氧化物酶后發(fā)現(xiàn)一個顯著的神經(jīng)纖維走行如耳蝸的背側和后腹側核團［8］

本實驗利用順行熒光示蹤劑研究大鼠耳蝸核團向前庭終末器官的神經(jīng)投射，結果發(fā)現(xiàn)在腦干耳蝸核團注射綠色順行熒光示蹤劑PHA-L后在聽神經(jīng)和迷路的前庭部分發(fā)現(xiàn)綠色示蹤劑。這些實驗結果證實Wistar大鼠耳蝸核團和前庭終末器官存在相互的神經(jīng)聯(lián)系。

有實驗證實，耳蝸同樣也存在向前庭內(nèi)側核團的相互神經(jīng)投射［9］，將辣根過氧化物酶注射到螺旋神經(jīng)節(jié)后發(fā)現(xiàn)除了耳蝸核團有示蹤劑外，在同側的前庭內(nèi)側核團也發(fā)現(xiàn)了示蹤劑，證實前庭核團存在向耳蝸的纖維投射；同時將辣根過氧化物酶注射到前庭內(nèi)側核團后發(fā)現(xiàn)在螺旋神經(jīng)節(jié)存在示蹤劑，證實在螺旋神經(jīng)節(jié)處存在向前庭核團的纖維投射。在兔子的前庭核團的上側和內(nèi)側核團注射麥芽凝集素標記的辣根過氧化物酶逆行示蹤劑后，在雙側耳蝸核團的背側核團發(fā)現(xiàn)標記的神經(jīng)元，說明耳蝸核團存在向前庭核團的神經(jīng)投射，這種神經(jīng)聯(lián)系可能有利于聽覺和平衡感覺的相互作

用［10-12］。

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