周海純，鄭迎虹，蔡國(guó)鋒，馬育軒

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150001)

腦梗死(Cerebral infraction，CI)又稱缺血性腦卒中，是神經(jīng)系統(tǒng)臨床常見病、多發(fā)病，急性腦梗死患者由于腦部血液循環(huán)障礙，缺血、缺氧引起局灶性腦組織缺血性壞死，出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征。具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高的“三高”特點(diǎn)［1－3］。如何使腦卒中所致神經(jīng)功能缺損癥狀降低到一個(gè)最小的限度這一系列問(wèn)題成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)［4－7］。本研究旨在從分子水平上對(duì)比研究頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)法對(duì)大鼠腦梗死后行為功能的影響，為臨床上進(jìn)一步采用頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療腦梗死提供客觀依據(jù)，對(duì)改善神經(jīng)功能缺損狀況、降低腦梗死的致殘率和提高生活質(zhì)量具有重要意義。

1 資料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠，體質(zhì)量250～300g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。采用大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型制備方法。

1．2 動(dòng)物分組方法

造模后24h按Bederson 4級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分。0級(jí):未見行為缺陷;1級(jí):前肢屈曲;2級(jí):側(cè)推抵抗力下降(即側(cè)向推力實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性)伴前肢屈曲，無(wú)轉(zhuǎn)圈行為;3級(jí):同二級(jí)行為伴自發(fā)性旋轉(zhuǎn)，評(píng)分低于兩分者剔除。將符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠隨機(jī)分為4組。

1)模型組12例，48h后，行大腦中動(dòng)脈梗塞術(shù)，不予任何治療，常規(guī)飼養(yǎng);2)康復(fù)組12例同上，造模后康復(fù)治療;3)針康組12例同上，造模后頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療;4)假手術(shù)組4例僅分離動(dòng)脈，不結(jié)扎插線。各時(shí)間點(diǎn)分組方法相同。

1．3 治療方法

1)假手術(shù)組大鼠僅分離動(dòng)脈不插入線拴，術(shù)后置于普通籠中飼養(yǎng)。2)模型組術(shù)后另置普通籠中術(shù)后清潔飼養(yǎng)，不予任何治療。3)康復(fù)組大鼠進(jìn)行大腦中動(dòng)脈阻塞術(shù)，清醒后予以轉(zhuǎn)籠，網(wǎng)屏，雜技任務(wù)訓(xùn)練，轉(zhuǎn)棒等綜合康復(fù)療法。轉(zhuǎn)籠長(zhǎng)100cm，直徑60cm的圓柱形金屬網(wǎng)籠;中間分為4格，同時(shí)訓(xùn)練4只大鼠;水平放置于金屬架上，一端有轉(zhuǎn)動(dòng)柄，可按需要縱軸轉(zhuǎn)動(dòng)。術(shù)后24h開始到21天。10min/d，5次/周。轉(zhuǎn)棒:長(zhǎng)750cm，直徑4.5cm木棒一根，兩端懸掛，手動(dòng)以5r/min順、逆時(shí)針交替轉(zhuǎn)動(dòng)。術(shù)后24h開始，10min，5天/周;雜技任務(wù)訓(xùn)練:要求大鼠按順序走過(guò)獨(dú)木直徑2.7cm、繩直徑2cm、梯(間距)5cm、重金屬鉸鏈(扣環(huán)2.7cm ×4.3cm)、系列障礙(高 l．3cm ～21cm)、網(wǎng)格平臺(tái)(85cm×11cm，平臺(tái)上依次有面積 6.25cm2、8.4cm2、12.25cm2的小洞)、一條縫隙，最后回到小籠。術(shù)后24h到4天在實(shí)驗(yàn)者的幫助下讓大鼠適應(yīng)此訓(xùn)練過(guò)程，然后改為4次/天(5～14天)，到2次/天(15～21天)。4)針康組大鼠造模24h后進(jìn)行頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)治療，頭穴叢刺:采用頭穴叢刺法，在相應(yīng)的刺激區(qū)，按照“大鼠穴位圖譜”所示，取百會(huì)穴及百會(huì)左、右側(cè)各旁開4mm處沿皮分別刺入10mm，快速捻轉(zhuǎn)1min后留針2h，期間每20min快速捻轉(zhuǎn)1次，每日1次，共治療3周;康復(fù)技術(shù):同康復(fù)組。

1．4 指標(biāo)測(cè)定方法

1．4．1 神經(jīng)功能評(píng)定

按Bederson等制定的標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，評(píng)分分為4級(jí)。0級(jí):未見行為缺陷;1級(jí)前肢屈曲;2級(jí):側(cè)推抵抗力下降(即側(cè)向推力實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性)伴前肢屈曲，無(wú)轉(zhuǎn)圈行為;3級(jí):同二級(jí)行為伴自發(fā)性旋轉(zhuǎn)。各組大鼠在治療前、7天、14天、21天分別進(jìn)行行為學(xué)評(píng)估，觀察其評(píng)分情況。

1．4．2 行為功能評(píng)估

在大鼠腦梗死模型制作后24h，7，14，21天，進(jìn)行功能評(píng)估，觀察大鼠在行為學(xué)方面的差異。每項(xiàng)試驗(yàn)進(jìn)行2次，取較高的分?jǐn)?shù)值作為大鼠的該項(xiàng)得分。行為學(xué)測(cè)定在安靜的環(huán)境中進(jìn)行，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見表1。

網(wǎng)屏測(cè)驗(yàn)(screentest):將大鼠置于水平放置的網(wǎng)屏上，而后迅速將網(wǎng)屏一端抬高并轉(zhuǎn)至垂直位，記錄大鼠在網(wǎng)屏上的維持時(shí)間。此項(xiàng)主要檢測(cè)總的肌力。平衡木測(cè)驗(yàn)(balancebeamtest):將大鼠置于木棒中間位置，記錄大鼠在木棒上維持的時(shí)間，最長(zhǎng)30s。此項(xiàng)主要檢測(cè)平衡能力［8］。抓握一牽引測(cè)驗(yàn)(prehensiletractiontest):將大鼠前爪放于水平放置繩上，松開［9］。記錄大鼠在繩上懸掉的時(shí)間以及是否有第三肢(后爪)參與，最長(zhǎng)5s。抓握是指大鼠前爪懸掉在水平繩上的能力，主要檢測(cè)肌力;牽引是指大鼠將后肢放在繩上的能力，主要檢測(cè)平衡和肌力［10］。

表1 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組最終取2套切片納入統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，根據(jù)方差齊性與否分別采用參數(shù)檢驗(yàn)和非參數(shù)檢驗(yàn)，即齊性資料用單因素方差分析(one－factor ANOVA)的單向分類的方差分析(one－way ANVOA)，兩兩比較應(yīng)用LDS－t檢驗(yàn);非齊性資料采用秩和檢驗(yàn)。選擇P＜0.05為差異有顯著性，P＜0.01為差異有極顯著性。

2 結(jié)果

2．1 神經(jīng)功能評(píng)定 見表2。

表2 神經(jīng)功能評(píng)定(±s)

表2 神經(jīng)功能評(píng)定(±s)

n療前 7天 14天模型組12 3．42 ±0．67 2．83 ±0．58 1．83 ±0．55康復(fù)組 12 3．33 ±0．78 1．83 ±1．11 1．08 ±0．76針康組12 3．25 ±0．75 1．00 ±0．85 0．33 ±0．47

2．2 行為學(xué)功能評(píng)定 見表3。

表3 腦梗死大鼠行為學(xué)評(píng)估得分(±s)

表3 腦梗死大鼠行為學(xué)評(píng)估得分(±s)

n療前 24小時(shí) 7天 14天12 1．08 ±0．79 4．50 ±1．17 5．25 ±1．22 6．58 ±0．95康復(fù)組 12 1．33 ±0．98 4．67 ±1．23 6．16 ±1．11 7．41 ±0．86針康組模型組12 1．25 ±0．97 4．75 ±1．06 7．16 ±0．94 8．25 ±0．92

3 討論

本實(shí)驗(yàn)采用的頭穴叢刺結(jié)合康復(fù)技術(shù)方法對(duì)治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病特別是腦血管疾病有很好的效果。大量有關(guān)頭穴叢刺和康復(fù)技術(shù)的研究顯示，其能促進(jìn)腦損傷后原位誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化;這些方法還有改善腦血管循環(huán)、減輕腦細(xì)胞缺氧、抑制傷灶局部炎癥反應(yīng)、改善大腦電生理活動(dòng)等功效，這些條件的變化也會(huì)進(jìn)一步影響神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化［11］。而且這些方法本身不同于外源性藥物，它作用范圍廣泛，具有多靶點(diǎn)效應(yīng)，作用機(jī)制多樣，無(wú)不良反應(yīng)，因而對(duì)于誘導(dǎo)內(nèi)源性干細(xì)胞增殖分化具有其他藥物療法不可比擬的優(yōu)越性、可行性［12］。鑒于成年腦內(nèi)原位神經(jīng)干細(xì)胞本身數(shù)量較少，其增殖不一定能滿足補(bǔ)充需要，我們要做的是通過(guò)干預(yù)使干細(xì)胞數(shù)量增多以利于補(bǔ)充需要;用一定的方法促使其遷移和分化并最終融入功能缺失區(qū)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。雖然成體神經(jīng)干細(xì)胞的可塑性仍是一個(gè)爭(zhēng)論的問(wèn)題，但有較好前景。

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