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        電針對(duì)大鼠腦缺血再灌注后局部腦血流量的影響

        2012-12-16 07:55:06曾超劉喆王改梅
        上海針灸雜志 2012年6期
        關(guān)鍵詞:同組督脈腦缺血

        曾超,劉喆,王改梅

        (浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院,杭州 310005)

        缺血性腦卒中是威脅人類健康與生存的主要疾病之一,具有死亡率、致殘率高的特點(diǎn),是目前重點(diǎn)防治的一種疾病[1]。臨床上處理缺血性腦損傷的原則是盡早恢復(fù)血液再灌注,使缺血腦組織重新得到氧的供應(yīng),提供代謝所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)并清除代謝廢物。然而近年來發(fā)現(xiàn)[2],缺血后的血流恢復(fù)在某些情況下能導(dǎo)致進(jìn)一步的組織損傷,降低局部腦血流量(regional cerebral blood flow, rCBF),這種恢復(fù)血流灌注后的有害情況稱為缺血再灌注損傷,抑制再灌注損傷,成為目前治療缺血性腦卒中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)通過觀察電針治療 ischemia/reperfusion(I/R)模型大鼠,對(duì)大鼠rCBF的影響,研究電針對(duì)急性局部腦缺血的治療效果并探討其作用機(jī)理。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料

        PPARg激動(dòng)劑——吡格列酮(批號(hào)H20040631)由連云港德源藥業(yè)有限責(zé)任公司提供;激光多普勒組織血流檢測(cè)儀器(型號(hào) PeriFlux 5000)由瑞典百靈威中國(guó)公司提供;韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(HANS-LH202H型)。

        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        1.2.1 大鼠大腦中動(dòng)脈I/R模型的制備

        健康清潔級(jí)Sprague-Dawley大鼠78只,雄性,體重(250±20)g,術(shù)前用10%水合氯醛(0.35 mL/100 g)行腹腔注射,仰臥固定,頸部剪毛備皮,頸部正中切開皮膚1.5 cm,從頸總動(dòng)脈(common carotid artery,CCA)鞘中分離出頸總動(dòng)脈,注意勿傷迷走神經(jīng)。結(jié)扎CCA遠(yuǎn)心端,分離右頸外動(dòng)脈(external carotid artery,ECA)與頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery,ICA),在CCA上剪一小口,經(jīng)CCA插入ICA,將栓線送至顱內(nèi),稍感阻力即止,此時(shí)插入深度約為(18±0.5)mm(自頸總動(dòng)脈分叉處算起),阻斷1.5 h后,拔出栓線,恢復(fù)頸總、頸內(nèi)動(dòng)脈再通行再灌注。

        1.2.2 動(dòng)物與分組

        隨機(jī)分為假手術(shù)組(6只)、模型組、藥物組、電針組,再根據(jù)缺血1.5 h后再灌注(reperfusion,R)的不同時(shí)間點(diǎn)將模型組、藥物組、電針組,分成R3 h、R12 h、R24 h、R48 h4個(gè)亞組,每個(gè)亞組均為6只大鼠。分別進(jìn)行以下處理。藥物組再灌注之后給予腹腔注射匹格列酮1 mg/kg[3]以后每隔24 h給予一次相同的藥物治療。電針組再灌注之后電針督脈腧穴百會(huì)、大椎,穴位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[4]中大鼠穴位定位方法取百會(huì)穴和大椎穴,用長(zhǎng)13 mm針灸針針刺穴位,用韓氏穴位神經(jīng)刺激儀連接兩穴位針灸針,輸出電流1 mA,一般大鼠頭部會(huì)出現(xiàn)輕微抖動(dòng);頻率15 Hz連續(xù)波,時(shí)間30 min。以后每隔24 h給予一次相同的電針治療。

        1.3 腦血流的監(jiān)測(cè)方法

        運(yùn)用激光多普勒血流儀監(jiān)測(cè)大鼠rCBF變化。行上述麻醉之后,統(tǒng)一選取大鼠顱腦右顳側(cè)(大鼠耳眼連線中點(diǎn),大腦中動(dòng)脈區(qū)域)部位作為檢測(cè)點(diǎn)[5],剪毛,乙醇消毒之后作一5 mm縱向切口,分離肌肉組織露出骨平面,用無菌棉球蘸少許 3%雙氧水清理骨平面上血漬,用特制膠水將自制的簡(jiǎn)易探頭底座黏貼于骨面上,觀察4個(gè)不同時(shí)相rCBF變化。首先監(jiān)測(cè)術(shù)前5 min血流值,再缺血術(shù)后隨即測(cè)值,比較手術(shù)前后 rCBF變化情況,缺血后達(dá)到缺血前70%即認(rèn)為造模成功[6]。再灌注即刻為缺血1.5 h后線栓抽出阻塞的MCA后,隨即測(cè)值,最后在再灌注后不同時(shí)點(diǎn)處死取材,進(jìn)行rCBF監(jiān)測(cè)。

        2 結(jié)果

        缺血前各組大鼠之間的 rCBF無明顯差異(P>0.05);缺血即刻模型組、藥物組、電針組的大鼠腦血流均值均較假手術(shù)組和相應(yīng)同組的缺血前顯著降低(P<0.01),達(dá)到缺血前的(50.00±1.58)%;再灌注即刻模型組、藥物組、電針組的均值均比缺血即刻的均值升高了10%~20%(P<0.01);R3 h模型組比再灌注即刻升高了(22.63±2.68)%,R3 h藥物組和電針組比再灌注即刻分別升高了(41.90±1.60)%和(48.55±1.41)%;R12 h模型組比再灌注即刻升高了(10.02±1.38)%,R12 h藥物組和電針組比再灌注即刻分別升高了(32.22±2.19)%和(26.77±2.92)%;R24 h模型組比再灌注即刻下降了(6.83±0.75)%,R24 h藥物組和電針組比再灌注即刻分別升高了(18.72±1.36)%和(18.69±2.24)%;R48 h模型組比再灌注即刻升高了(10.00±1.10)%,R48 h藥物組和電針組比再灌注即刻分別升高了(31.05±1.17)%和(29.26±1.44)%。且經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,缺血前、缺血即刻、再灌注即刻、再灌注不同時(shí)間點(diǎn)(處死前)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1-4。

        表1 大鼠腦缺血1.5 h再灌注3 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        表1 大鼠腦缺血1.5 h再灌注3 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        注:與同組缺血前比1)P<0.05,2)P<0.01;與缺血即刻比3)P<0.05;與再灌注即刻比4)P<0.05;與模型組相比5)P<0.05

        組別 n 缺血前 缺血即刻 再灌注即刻 3 h值假手術(shù)組 6 250.00±17.47 247.50±17.21 246.33±18.18 250.00±18.18模型組 6 246.67±8.756 121.17±13.932) 156.83±14.662)3) 192.33±10.391)3)4)藥物組 6 252.50±16.66 131.33±10.172) 161.17±10.072)3) 228.83±17.331)3)4)5)電針組 6 245.50±26.79 120.67±11.982) 149.83±15.502)3) 222.17±24.421)3)4)5)

        表2 大鼠腦缺血1.5 h再灌注12 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        表2 大鼠腦缺血1.5 h再灌注12 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        注:與同組缺血前比1)P<0.05,2)P<0.01;與缺血即刻比3)P<0.05;與再灌注即刻比4)P<0.05;與模型組相比5)P<0.05

        組別 n 缺血前 缺血即刻 再灌注即刻 12 h值假手術(shù)組 6 250.00±17.47 247.50±17.21 246.33±18.18 252.50±15.66模型組 6 257.50±18.37 130.50±10.542) 158.83±14.502)3) 174.67±12.601)3)4)藥物組 6 255.50±15.02 130.83±14.632) 155.67±5.882)3) 205.83±13.181)3)4)5)電針組 6 240.67±27.23 128.17±16.402) 150.67±10.652)3) 191.50±23.281)3)4)

        表3 大鼠腦缺血1.5 h再灌注24 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        表3 大鼠腦缺血1.5 h再灌注24 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        注:與同組缺血前比1)P<0.05,2)P<0.01;與缺血即刻比3)P<0.05;與再灌注即刻比4)P<0.05;與模型組相比5)P<0.05

        組別 n 缺血前 缺血即刻 再灌注即刻 24 h值假手術(shù)組 6 250.00±17.47 247.50±17.21 246.33±18.18 249.17±17.83模型組 6 249.17±11.09 132.17±9.1742) 160.83±7.572)3) 151.00±8.391)3)4)藥物組 6 243.00±33.08 125.33±12.962) 149.83±18.362)3) 177.83±24.801)3)4)5)電針組 6 259.17±26.54 127.17±18.052) 156.67±17.332)3) 186.50±16.991)3)4)5)

        表4 大鼠腦缺血1.5 h再灌注48 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        表4 大鼠腦缺血1.5 h再灌注48 h rCBF的變化 (±s,Pu)

        注:與同組缺血前比1)P<0.05,2)P<0.01;與缺血即刻比3)P<0.05;與再灌注即刻比4)P<0.05;與模型組相比5)P<0.05

        組別 n 缺血前 缺血即刻 再灌注即刻 48 h值假手術(shù)組 6 250.00±17.47 247.50±17.21 246.33±18.18 247.83±18.98模型組 6 259.50±17.67 132.83±8.612) 160.00±11.122)3) 175.33±12.161)3)4)藥物組 6 251.33±18.18 128.33±15.062) 151.50±10.782)3) 200.50±14.671)3)4)5)電針組 6 251.50±20.60 126.50±6.802) 153.00±13.112)3) 195.83±15.301)3)4)5)

        3 討論

        激光多普勒血流測(cè)量可以無損傷性地快速反饋血流量的變化信息,可以連續(xù)、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)神經(jīng)組織微循環(huán)血流量,其測(cè)量范圍小,可以精確地動(dòng)態(tài)反映局部組織的微循環(huán)的血流動(dòng)力學(xué)[7]。本實(shí)驗(yàn)用激光多普勒血流判斷大腦中動(dòng)脈線栓模型是否成功,并監(jiān)測(cè)局部腦血流的動(dòng)態(tài)變化,由以上數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),缺血即刻造模成功,達(dá)到了阻塞右側(cè) MCA的目的,再灌注時(shí)血流的瞬間再通,使得血流值均有所上升。藥物組選用PPARg激動(dòng)劑匹格列酮(1 mg/kg)其對(duì)于神經(jīng)病的保護(hù)已被多次驗(yàn)證和報(bào)道[8]。模型組、藥物組、電針組在相應(yīng) 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的rCBF值比再灌注時(shí)又有進(jìn)一步的升高,其中與模型組相比較,藥物組和電針組上升幅度明顯(P<0.05),但藥物組和電針組之間的差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且各組均在R3 h此時(shí)間點(diǎn)升高的幅度最大。

        本實(shí)驗(yàn)中造模之后的腦血流說明腦缺血發(fā)生后,如不采取有效措施迅速增加腦血流,改善腦微循環(huán),隨著缺血時(shí)間的延長(zhǎng),最終可導(dǎo)致腦梗死。在缺血后立即給予電針治療則能使局部腦血流顯著增加,使缺血組織局部維持有效的血供,對(duì)抗缺血引起的損傷,為再灌注后組織恢復(fù)功能提供機(jī)會(huì),再灌注期電針增加局部腦血供,可促進(jìn)代謝物質(zhì)的運(yùn)輸,最終可使腦梗死面積顯著減小,神經(jīng)功能得到有效的保護(hù)。

        電針對(duì)腦局部缺血區(qū)腦血流影響的確切機(jī)理尚不十分清楚。有文獻(xiàn)報(bào)道,電針使甘氨酸和牛磺酸濃度于再灌注后特定時(shí)段升高,這可能是電針腦保護(hù)作用的重要機(jī)制之一[9]。有研究者發(fā)現(xiàn)MCAO后,腦微血管首先發(fā)生高度的痙攣,持續(xù)較長(zhǎng)時(shí)間后又發(fā)生微血管麻痹舒張,認(rèn)為梗阻導(dǎo)致腦血管自律性運(yùn)動(dòng)的功能紊亂是造成腦缺血、腦梗死的重要原因,電針可改善腦缺血局部微血管的自律運(yùn)動(dòng),能有效地解除缺血早期的微血管痙攣,為周邊側(cè)枝代償血流進(jìn)入缺血區(qū)創(chuàng)造條件[10]。根據(jù)電針影響腦血流作用顯著發(fā)生在缺血再灌注早期,因此認(rèn)為電針治療宜早且治療時(shí)間宜適當(dāng)延長(zhǎng)。

        歷代醫(yī)家素有“病變?cè)谀X,首取督脈”之說,故本實(shí)驗(yàn)針刺選穴以督脈經(jīng)為主,因督脈屬奇經(jīng)八脈之一,是人體諸陽(yáng)經(jīng)脈之總匯,對(duì)整個(gè)經(jīng)脈系統(tǒng)有統(tǒng)帥作用,其主干行于脊里,向上行至項(xiàng)后風(fēng)府進(jìn)入腦內(nèi),上循巔頂,故督脈與腦、脊髓等關(guān)系相當(dāng)密切。百會(huì)穴首見于《針灸甲乙經(jīng)》,別名“三陽(yáng)五會(huì)”,為督脈經(jīng)穴,亦是督脈、足太陽(yáng)膀胱經(jīng)、手少陽(yáng)三焦經(jīng)、足少陽(yáng)膽經(jīng)、足厥陰肝經(jīng)五條經(jīng)脈的交會(huì)穴,居一身之最高,刺之有通陽(yáng)啟閉、醒腦利水之功。臨床實(shí)踐證明,百會(huì)極具升陽(yáng)舉陷、益氣補(bǔ)虛之力。大椎穴在第7頸椎棘突下,位近于腦部,是手足三陽(yáng)、督脈的交會(huì)穴?!按搜ㄊ嵌矫}之結(jié),統(tǒng)乎三陽(yáng)而助衛(wèi)氣”(《古法新解·會(huì)元針灸學(xué)》),調(diào)益陽(yáng)氣之總綱。因此兩穴相配共奏益氣活血、通絡(luò)化瘀之功。

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