侯永強(qiáng)，劉金彪，王新征，鄧 淼，王 寧，王明軍，黃亞楷，鄧 慶，王曉娟

乳腺癌是婦女常見(jiàn)的惡性腫瘤，世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球每年約有120萬(wàn)人發(fā)病，50萬(wàn)人死亡。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率正逐年上升，并且有躍居女性惡性腫瘤首位的趨勢(shì)[1]。乳腺癌的發(fā)病是一個(gè)多因素長(zhǎng)期作用、逐步發(fā)展的過(guò)程。人乳腺球蛋白是一個(gè)乳腺相關(guān)糖蛋白，它是一個(gè)分泌家族(包括子宮球蛋白和lipophilin)成員的遠(yuǎn)親[2]。研究表明，該蛋白是檢測(cè)前哨淋巴結(jié)和外周血液中潛伏乳腺癌細(xì)胞的靈敏標(biāo)記。如果在乳腺癌標(biāo)本中檢測(cè)乳腺球蛋白的表達(dá)情況與微轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，在今后的治療中就會(huì)更加有效。Ki-67是一種與細(xì)胞增殖特別相關(guān)的核抗原，可以通過(guò)Ki-67抗原的檢測(cè)，了解惡性腫瘤的細(xì)胞增殖活性，特別是對(duì)于乳腺癌病人。它是乳腺癌重要的增殖指標(biāo)，對(duì)指導(dǎo)乳腺癌的臨床化療有一定的意義。聯(lián)合檢測(cè)hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)可能有助于評(píng)估乳腺癌的臨床分期，為制定合理的治療方案提供參考信息。

1 材料和方法

1.1標(biāo)本選取2009～2010年于河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院外科進(jìn)行手術(shù)治療的152例乳腺癌組織作為實(shí)驗(yàn)組。所有患者年齡在29～84歲之間，中位年齡52歲。絕經(jīng)前女性90例，絕經(jīng)后62例，腫瘤<2 cm者72例，2～5 cm者76例，>5 cm者4例。腋窩淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移者66例，腋窩淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者86例。術(shù)前所有病人均未行化療或內(nèi)分泌治療。同時(shí)隨機(jī)挑選30例乳腺良性病變組織作為對(duì)照組。

1.2操作步驟全部病例組織蠟塊采用連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，取相鄰3張切片分別進(jìn)行HE染色及免疫組化染色。免疫組化一抗為鼠抗人單克隆抗體、Maxvision試劑盒購(gòu)自福建邁新公司。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定由我院兩位高級(jí)職稱病理醫(yī)師盲法讀片，獨(dú)立觀察每張切片10個(gè)具有代表性的高倍視野。人乳腺球蛋白陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性染色者在細(xì)胞膜和(或)漿有棕黃色顆粒沉著。Ki-67陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性染色者在細(xì)胞核有棕黃色顆粒沉著。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理研究資料采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1人乳腺球蛋白的免疫組化結(jié)果人乳腺球蛋白定位于胞漿，呈棕黃色顆粒。人乳腺球蛋白在乳腺癌組、乳腺良性病變組的表達(dá)率分別為51.3%、0%。乳腺癌組和乳腺良性病變組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組病人乳腺球蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

2.2人乳腺球蛋白在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系人乳腺球蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、無(wú)顯示、臨床分期有關(guān)，與年齡、月經(jīng)情況、診斷時(shí)腫瘤大小無(wú)關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 乳腺癌人乳腺球蛋白的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系

2.3 Ki-67的免疫組化結(jié)果Ki-67定位于胞核，呈棕黃色顆粒。Ki-67在乳腺癌組、乳腺良性病變組的表達(dá)率分別為68.7%、0%。乳腺癌組和乳腺良性病變組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 兩組病人Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率比較

2.4 Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移未顯示有關(guān)，與患者的年齡、月經(jīng)狀況無(wú)關(guān)。見(jiàn)表4。

3 討論

腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是一個(gè)多基因參與、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，是眾多因子相互協(xié)調(diào)以及共同作用的結(jié)果，乳腺癌也不例外，威脅乳腺癌患者生命的主要原因是乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[3]。雖然檢測(cè)乳腺癌微轉(zhuǎn)移的腫瘤標(biāo)志物有很多，但目前仍缺乏乳腺癌的特異標(biāo)志物。人乳腺球蛋白是近年發(fā)現(xiàn)的乳腺癌特異性腫瘤學(xué)標(biāo)志物，具有較好的靈敏性、較高的特異性，對(duì)乳腺癌的早期診斷具有較高的臨床價(jià)值。它是1996年Watson等利用差式篩選和cDNA末端擴(kuò)增(rapid amplification of cDNA ends，RACE)技術(shù)，從乳腺癌上皮細(xì)胞克隆出一個(gè)分子量10 kD的分泌型差異表達(dá)蛋白，并命名為人乳腺球蛋白[2]。它是一種乳腺特異蛋白，它的過(guò)量表達(dá)更傾向于乳腺上皮細(xì)胞的特異改變，所以它在微小的轉(zhuǎn)移研究中更具有特異性。但由于人乳腺球蛋白抗原決定簇的多態(tài)性，制備特異性較高的乳腺癌腫瘤疫苗仍有許多問(wèn)題亟待解決[4]。

表4 兩組病人Ki-67表達(dá)陽(yáng)性率比較

本研究采用免疫組化方法檢測(cè)乳腺良性疾病和乳腺癌組織中人乳腺球蛋白及Ki-67表達(dá)結(jié)果顯示乳腺癌組織中人乳腺球蛋白及Ki-67表達(dá)顯著高于乳腺良性疾病組織中的表達(dá)。人乳腺球蛋白的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及c-erbB2表達(dá)有顯著關(guān)系，與年齡、月經(jīng)情況、腫瘤大小無(wú)關(guān)。Ki-67的陽(yáng)性表達(dá)與臨床分期、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，與患者的年齡、月經(jīng)狀況無(wú)關(guān)。

人乳腺球蛋白及Ki-67作為目前乳腺癌特異性最好的腫瘤標(biāo)志物，對(duì)其功能的研究可進(jìn)一步揭示乳腺癌的發(fā)生機(jī)制，指導(dǎo)臨床，為基因治療提供思路。在乳腺癌中hMAM和Ki-67的表達(dá)呈正相關(guān)，二者共同參與乳腺癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。聯(lián)合檢測(cè)hMAM和Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)可能有助于評(píng)估乳腺癌的臨床分期，為制定合理的治療方案提供參考信息。

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