冉啟軍，趙建峰

(1．遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，貴州 遵義 563099;2．遵義縣人民醫(yī)院檢驗科，貴州遵義 563000)

黑骨藤是貴州常用苗藥，為蘿藦科植物西南杠柳 Periploca forrestii Schltr的根或全株，性熱，味苦，入冷經(jīng)，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活血、止痛的功效，主治風(fēng)濕麻木疼痛，跌打損傷、骨折、骨痛等，苗族藥名為Uob mongb dleib蛙蟒雖(貴州黔南)、Ghab bas dlaib嘎八又賒(貴州黔東南)［1，2］。我們通過對黑骨藤的活性成分總黃酮抗炎、鎮(zhèn)痛作用的試驗研究，為苗藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料來源 黑骨藤總黃酮(PFS)來源于貴陽醫(yī)學(xué)院生藥室，用生理鹽水稀釋成高、中、低3個劑量組，稀釋濃度分別為 5 mg/mL、2．5 mg/mL、1．25 mg/mL，SD 大鼠(♂)，體重(180～220)g;昆明種小鼠(♂、♀)，體重(18～22)g，潔凈級，均購于貴陽醫(yī)學(xué)院試驗動物中心，動物合格證號SCXK(黔)2002－0001。

1．2 試劑與儀器 二甲苯與冰醋酸分析純、阿司匹林(中國醫(yī)藥公司上海分公司、批號:840130)，GJ28402型熱板測痛儀(UV2401)。阿司匹林配制成濃度為0．4 mg/mL的溶液。

1．3 試驗方法

1．3．1 黑骨藤總黃酮對小鼠耳廓腫脹度試驗方法昆明種小鼠50只(♂)，隨機(jī)分為5組(3個試驗組、生理鹽水模型組與阿司匹林陽性組)，每組10只。根據(jù)小鼠體重，高、中、低組以及阿司匹林陽性均按照0．1 mL/10g比例連續(xù)灌喂7 d，即黑骨藤總黃酮每日用量為:高試驗劑量組(0．5 mg/10g體重)、中試驗劑量組(0．25 mg/10g體重)、低試驗劑量組(0．125 mg/10g體重)，阿司匹林陽性組(0．04 mg/10g體重)，生理鹽水模型組給予同體積的生理鹽水。末次給藥30 min后每只小鼠于其右耳前后兩面涂抹二甲苯0．02 mL并與左耳對照，涂抹二甲苯20 min后處死小鼠，沿耳廓線剪下兩耳，用8 mm直徑的打孔器在兩耳片同一部位打下耳圓片并精確稱其各自的質(zhì)量，計算平均腫脹度和抑制率。腫脹度(mg)=右耳圓片的質(zhì)量－左耳圓片的質(zhì)量;抑制率(%)=(生理鹽水模型組平均腫脹度－試驗劑量組平均腫脹度)/生理鹽水模型組平均腫脹度×100%。

1．3．2 黑骨藤總黃酮對角叉菜膠銹導(dǎo)的大鼠足跖腫脹模型試驗方法 SD大鼠50只(♂)，隨機(jī)分為5組，大鼠分組、給藥方法同1．3．1，每組10只。根據(jù)大鼠體重，高、中、低組以及阿司匹林陽性組均按照1 mL/100g比例連續(xù)灌喂7 d，即黑骨藤總黃酮用量為:高試驗劑量組(5．0 mg/100g體重)、中試驗劑量組(2．5mg/100g體重)、低試驗劑量組(1．25 mg/100g體重)，阿司匹林陽性組(0．4 mg/100g體重)，生理鹽水模型組給予同體積的生理鹽水。用游標(biāo)卡尺測定大鼠右后肢足跖厚度，計算給藥前平均足跖厚度，末次給藥1 h后每只鼠右足皮下注射1%角叉菜膠0．1 mL致炎，分別測定記錄注射后0．5 h、1 h、2 h、3 h、4 h 和 5 h 大鼠右后足跖厚度。腫脹度(mm)=致炎后足跖厚度－致炎前足跖厚度。

1．3．3 黑骨藤總黃酮對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)試驗方法 小鼠分組、給藥劑量與方法同1．3．1，末次給藥30 min后，根據(jù)小鼠體重，采用0．6%冰醋酸經(jīng)腹腔注射(0．1 mL/10g體重)，15 min后記錄各鼠扭體次數(shù)，計算抑制率。扭體抑制率(%)=(生理鹽水模型組平均扭體次數(shù)－試驗劑量組平均扭體次數(shù))/生理鹽水模型組平均扭體次數(shù)×100%。

1．3．4 黑骨藤總黃酮對雌性小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗方法 昆明種小鼠50只(♀)，小鼠分組、給藥劑量與方法同 1．3．1，置于(55 ±0．5)℃熱板上，記錄自放置熱板上至出現(xiàn)舔足反應(yīng)時間，即為痛閾值，凡＜5s或＞30s及踴躍者均淘汰，合格小鼠再測1次痛閾值，取2次平均值作為各鼠閾值。痛閾值提高率(%)=(給藥后平均痛閾值－給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%。

1．4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 18．0軟件分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(珋x±s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 黑骨藤總黃酮對小鼠耳廓腫脹程度的影響 從黑骨藤總黃酮抑制小鼠耳廓腫脹度結(jié)果分析，黑骨藤總黃酮高、中、低劑量組均有控制二甲苯致小鼠耳廓腫脹作用［3］，其抑制率分別為55．94%、50．60%和37．35%，與生理鹽水模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0．01)，與阿司匹林陽性組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P均＞0．05)，(見表1)。

表1 黑骨藤總黃酮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹作用的影響(n=10，d=7)

2．2 黑骨藤總黃酮對角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足跖腫脹模型的影響 以大鼠足跖腫脹程度進(jìn)行評價，角叉菜膠能明顯誘導(dǎo)大鼠足跖腫脹［4］，3 h達(dá)峰值;黑骨藤總黃酮高、中、低劑量(5 mg/mL、2．5 mg/mL、1．25 mg/mL)組對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹均有不同程度的抑制作用，與模型組比較均有顯著性差異(P均＜0．01)，(見表2)。

表2 黑骨藤總黃酮對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹與時間變化關(guān)系(n=10，d=7)

2．3 黑骨藤總黃酮對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 黑骨藤總黃酮能夠有效抑制冰醋酸刺激腹腔粘膜引起的疼痛反應(yīng)，減少扭體次數(shù)［5］，與模型組比較，扭體次數(shù)下降顯著(P＜0．01或 P＜0．05)，(見表3)。

表3 黑骨藤總黃酮對冰醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)的抑制作用(n=10，d=7)

2．4 黑骨藤總黃酮對雌性小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗的影響 連續(xù)給藥7d后，阿司匹林陽性組、黑骨藤高、中低劑量組均能顯著提高小鼠痛閾值［6］，與模型組比較黑骨藤高、中、低劑量組痛閾值提高率分別為 42．91%、37．66% 和 19．98%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0．01或P ＜0．05)，(見表4)。

表4 黑骨藤總黃酮對小鼠熱板鎮(zhèn)痛作用(n=10，d=7)

3 討論

炎癥是肌體組織細(xì)胞對損傷所發(fā)生的一種以防御為主的組織反應(yīng)，其病理變化為局部組織、細(xì)胞的變質(zhì)(炎癥局部組織所發(fā)生的變性和壞死)、滲出(炎癥局部組織血管內(nèi)的液體和細(xì)胞成分通過血管壁進(jìn)入組織間質(zhì)、體腔、粘膜以及體表的反應(yīng))和增生(炎癥局部的巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和纖維母細(xì)胞增生)3種情況。一般炎癥以充血、變質(zhì)和滲出為主，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。

黑骨藤是貴州常用苗藥，為蘿藦科植物西南杠柳Periploca forrestii schltr的根或全株，是貴州苗族地區(qū)傳統(tǒng)習(xí)慣用藥。民間發(fā)現(xiàn)黑骨藤具有消腫止痛、舒筋活絡(luò)之作用，多用于治療腰腿痛、風(fēng)濕痛與跌打損傷等疾病。

二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足跖腫脹模型是急性非特異性炎癥反應(yīng)，所導(dǎo)致的炎癥改變包括血管擴(kuò)張、毛細(xì)血管通透性增加和滲出改變等。試驗結(jié)果表明黑骨藤總黃酮對急性非特異性炎癥有顯著抑制作用，并呈劑量依賴效應(yīng)。角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足跖腫脹同時也是一種免疫性炎癥反應(yīng)，試驗表明黑骨藤總黃酮對免疫性炎癥也有明顯抑制作用;由于炎癥發(fā)生時，滲出物的壓迫和炎癥介質(zhì)的作用會引起疼痛，醋酸致小鼠扭體反應(yīng)試驗和雌性小鼠熱板法鎮(zhèn)痛試驗表明，黑骨藤總黃酮有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其機(jī)理為黑骨藤總黃酮顯著提高了小鼠痛閾。綜上所述，黑骨藤總黃酮具有抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

本研究結(jié)果顯示，黑骨藤總黃酮對急性非特異性炎癥抗炎與鎮(zhèn)痛作用顯著，且不含激素，無西藥副作用，值得進(jìn)一步研究。

［1］汪毅．中國苗族藥物彩色圖集［M］．貴陽:貴州科技出版社，2002:665．

［2］國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會．中華本草·苗藥卷［M］．貴陽:貴州科技術(shù)出版社，2005:526－627．

［3］徐叔云．藥理試驗方法學(xué)［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，2001:911．

［4］李儀奎．中藥藥理試驗方法學(xué)［M］．上海:上?？萍汲霭嫔纾?991:298－299．

［5］馬越鳴，閆晶超，王天明，等．瀉心湯在急性炎癥動物模型上的抗炎效應(yīng)［J］．中國藥理學(xué)通報，2006，22(11):1393－1398．

［6］陳奇．中藥藥理研究方法學(xué)［M］．北京:人民衛(wèi)生出版社，1996．378