張東生 王平凡▲ 薛迪強(qiáng)

1.蘭州市第二人民醫(yī)院病理科，甘肅蘭州 730046；2.蘭州市第二人民醫(yī)院消化科，甘肅蘭州 730046

胃黏膜活檢真菌檢測(cè)方法及臨床病理研究

張東生1王平凡1▲薛迪強(qiáng)2

1.蘭州市第二人民醫(yī)院病理科，甘肅蘭州 730046；2.蘭州市第二人民醫(yī)院消化科，甘肅蘭州 730046

臨床纖維胃鏡活檢標(biāo)本經(jīng)石蠟切片后，除進(jìn)行常規(guī)的蘇木素-伊紅染色（HE染色）外，聯(lián)合應(yīng)用PAS染色和Giemsa染色，真菌的檢出明顯增多。這兩種特殊染色方法對(duì)檢測(cè)胃黏膜活檢真菌感染情況有重要的臨床病理意義。

真菌；特殊染色；胃潰瘍；胃癌

胃內(nèi)真菌感染是指胃內(nèi)常見(jiàn)的念珠菌、毛霉菌、曲霉菌等感染引起的黏膜炎癥，其中最常見(jiàn)的是真菌性潰瘍和潰瘍型胃癌伴真菌感染。胃黏膜真菌感染并不少見(jiàn)，往往被忽視。近年來(lái)，胃黏膜真菌感染時(shí)有報(bào)道[1-3]，呈逐年上升趨勢(shì)。真菌性胃潰瘍酷似潰瘍型胃癌，潰瘍巨大，壞死層增厚，纖維胃鏡下很難對(duì)其鑒別診斷，臨床醫(yī)師經(jīng)常誤診為胃癌[4-5]。病因控制和抗酸治療后，潰瘍久治不愈[6]，形成難治性胃潰瘍。究其原因，是消化科醫(yī)師和病理科醫(yī)師對(duì)難治性胃潰瘍病因重視不夠，忽視了真菌感染這一重要因素。本文探討胃黏膜常規(guī)石蠟切片、HE染色及特殊染色在真菌檢測(cè)中的意義和顯微鏡下真菌的形態(tài)。

1 真菌檢測(cè)方法及意義

1.1 切片HE染色光鏡觀察（常規(guī)染色）

胃黏膜真菌感染多在黏膜表面的滲出層或壞死層，背景污穢，難以辨認(rèn)，尤其是毛霉菌和曲霉菌的菌絲往往被誤認(rèn)為壞死脫落物質(zhì)。只有念珠菌因其粗大的假菌絲和芽生孢子容易檢出。另外，活檢標(biāo)本小、含真菌量少、一些真菌在HE染色切片中本身不易著色，這都是真菌漏檢的原因。因此，單單依靠HE染色診斷真菌感染是不夠的。

1.2 PAS染色光鏡觀察（特殊染色）

PAS染色法對(duì)真菌著色有一定特異性，切片中真菌鮮亮，是理想的真菌染色方法之一。真菌菌絲壁著紅色，菌絲不完整，呈節(jié)段性[7]。芽生孢子紅色，二端鈍圓，橫切面呈球形，有明顯折光性。

1.3 Giemsa染色光鏡觀察（特殊染色）

當(dāng)HE、PAS染色后，病理醫(yī)師鏡檢仍不能確認(rèn)是否有真菌感染時(shí)，Giemsa染色可以作為一種有效的補(bǔ)充染色。Giemsa染色對(duì)真菌著色清晰，菌絲和芽生孢子均呈藍(lán)色。

2 真菌組織切片形態(tài)

2.1 念珠菌

在組織切片中，念珠菌主要位于黏膜表面的滲出及壞死組織內(nèi)，HE染色尚能辨認(rèn)芽生孢子和假菌絲（圖1）。芽生孢子在10×40倍視野下可見(jiàn)兩種形態(tài)：一種是較大的孢子，球形或略呈卵圓形，體積相當(dāng)于中性粒細(xì)胞分葉核的一個(gè)片段，直徑 3～5 μm，蘇木素濃染，染色細(xì)膩；另一種芽生孢子形態(tài)較小，圓形，紫紅色，直徑2～3 μm，中心可見(jiàn)淡染折光性強(qiáng)的空染區(qū)。在10×100倍光鏡下，芽生孢子清晰，厚膜，中心可見(jiàn)淡染小泡。假菌絲由芽管延長(zhǎng)形成，細(xì)而直，像一根透明膠管，有分隔，少部分有分枝。HE染色切片呈淺藍(lán)色。孢子和假菌絲PAS染色呈鮮亮的玫瑰紅色 （圖2），Giemsa染色呈天藍(lán)色。

2.2 毛霉菌

HE染色切片中，毛霉菌比念珠菌粗大，長(zhǎng)短不一，壁厚，直徑為 5～6 μm，多數(shù)情況下為 10～15 μm，菌絲無(wú)隔，如形成皺褶，易誤認(rèn)為分隔，分支少而不規(guī)則。毛霉菌的特征性結(jié)構(gòu)除無(wú)隔的大菌絲外，還能形成孢子囊，但HE染色切片很少見(jiàn)。毛霉菌HE染色呈淺藍(lán)色，比細(xì)胞核著色略淺，易辨認(rèn)。PAS染色切片呈玫瑰紅色（圖3），Giemsa染色粗大菌絲藍(lán)染。

2.3 曲霉菌

HE染色切片，曲霉菌菌絲粗細(xì)均勻，直徑為2～7 μm，有隔，淡藍(lán)色，有時(shí)著色較淺，不易辨認(rèn)。曲霉菌菌絲易變形，可呈小球或小囊狀，聚集成群生長(zhǎng)，也可散在生長(zhǎng)，呈深藍(lán)色，易被誤認(rèn)為是球菌。PAS染色清晰可辨（圖4），菌絲呈紅色，小球或小囊呈紫紅色；Giemsa染色呈藍(lán)色。

3 胃黏膜真菌感染的意義

3.1 重視真菌感染

真菌廣泛存在于自然界，是主要的條件致病感染菌之一。機(jī)體抵抗力下降或胃黏膜屏障作用減弱時(shí)[8]，均可引起胃黏膜真菌感染。胃黏膜真菌感染尤以慢性消化性潰瘍多見(jiàn)，表面污濁，邊緣不整；纖維胃鏡下可見(jiàn)潰瘍擴(kuò)大、加深，潰瘍面凹凸不平，表面污穢厚苔，周圍黏膜結(jié)節(jié)狀隆起，組織松脆易出血，為其典型特征，與潰瘍型胃癌的形態(tài)表現(xiàn)頗為相似[9]，X線甚至胃鏡肉眼檢查會(huì)誤認(rèn)為癌，因而在胃黏膜活檢病理診斷時(shí)，須警惕真菌感染[10]。真菌感染的診斷目前仍然根據(jù)病理檢查，在病灶內(nèi)找到真菌菌絲[11]。采用方法主要為HE、PAS、Giemsa染色。單獨(dú)依靠HE染色易造成漏診。對(duì)胃潰瘍病臨床醫(yī)師除考慮消化性胃潰瘍和胃癌外，應(yīng)高度重視真菌性胃潰瘍的存在，減少誤診率。

3.2 胃潰瘍與真菌的關(guān)系

胃黏膜真菌感染是否與胃潰瘍有關(guān)，取決于胃黏膜上皮的完整性。胃黏膜始終處于細(xì)胞凋亡與增殖的動(dòng)態(tài)平衡中。當(dāng)真菌感染時(shí)，可能誘發(fā)胃黏膜上皮細(xì)胞過(guò)度增殖和凋亡，當(dāng)?shù)蛲龅臄?shù)目大于增殖的數(shù)目，增殖細(xì)胞又不能及時(shí)彌補(bǔ)凋亡細(xì)胞時(shí)，會(huì)導(dǎo)致潰瘍形成[12]。胃潰瘍形成后，缺損的黏膜層保護(hù)屏障不完整，局部免疫力下降，真菌進(jìn)入胃內(nèi)后，在潰瘍滲出及壞死物中生長(zhǎng)、繁殖。此時(shí)，真菌的代謝產(chǎn)物和酶加速潰瘍的發(fā)展，使?jié)冞M(jìn)一步擴(kuò)大、加深，增加了出血及胃穿孔的機(jī)會(huì)。臨床上難治性胃潰瘍并不少見(jiàn)。潘國(guó)宗等[13]對(duì)難治性消化性潰瘍的定義為：經(jīng)用標(biāo)準(zhǔn)量的H2受體拮抗劑治療后，曲霉菌菌絲粗細(xì)均勻，體積較小，有隔，淡藍(lán)色，著色較淺；經(jīng)胃鏡確定，胃潰瘍?cè)?2周末不愈合者。難治性胃潰瘍病因復(fù)雜，除幽門螺桿菌感染外，真菌感染也是其病因之一。真菌感染引發(fā)的胃潰瘍，一旦診斷明確，治療效果非常明顯，常用的藥物有克霉唑（三苯甲咪唑）、制霉菌素等，療程2～4周[14]，治療后經(jīng)胃鏡復(fù)查及病理活檢診斷，潰瘍可完全愈合。

3.3 胃癌與真菌的相關(guān)性

從慢性胃炎到最終發(fā)展為胃癌的演變過(guò)程中，各種致病因子可能單獨(dú)或協(xié)同作用于不同的階段，微生物感染是其中一個(gè)重要因素[15]。幽門螺桿菌感染引起胃潰瘍、胃癌已普遍形成共識(shí)，真菌在胃潰瘍、胃癌的發(fā)生中同樣不能忽視。當(dāng)真菌感染胃黏膜時(shí)，可能產(chǎn)生一些酶和毒素，造成胃黏膜上皮細(xì)胞過(guò)度增殖，通常被視為胃癌發(fā)生危險(xiǎn)性增加的重要生物標(biāo)記[16]。胃黏膜上皮細(xì)胞始終處于凋亡與增殖的動(dòng)態(tài)平衡中，細(xì)胞過(guò)度凋亡同樣可造成上皮細(xì)胞癌變。因?yàn)檫^(guò)度凋亡可刺激細(xì)胞不斷增殖，許多致癌因子誘發(fā)癌腫的早期都能引起細(xì)胞凋亡增加[17]。因此，胃潰瘍真菌感染可增加胃癌的發(fā)生機(jī)會(huì)，故胃癌的發(fā)生與真菌感染有一定相關(guān)性。

4 小結(jié)

胃鏡活檢檢查對(duì)真菌性胃潰瘍和潰瘍型胃癌的鑒別診斷非常重要，是唯一的確診方法[18]。雖然真菌在病理組織切片HE染色中能夠被檢出，但其結(jié)果不夠理想，易造成漏診。所以，PAS染色、Giemsa染色是非常有用的補(bǔ)充方法，對(duì)真菌的診斷意義重大。另外，在分子生物學(xué)方面已有學(xué)者開(kāi)始注意用PCR技術(shù)來(lái)輔助診斷真菌感染[19]。胃鏡涂片和真菌分離培養(yǎng)等技術(shù)也可嘗試。

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Fungal detection methods and clinical pathological study in gastric mucosa biopsy

ZHANG Dongsheng1WANG Pingfan1▲XUE Diqiang2
1.Department of Pathology,Second People′s Hospital of Lanzhou City in Gansu Province,Lanzhou 730000,China;2.Department of Gastroenterology,Second People′s Hospital of Lanzhou City in Gansu Province,Lanzhou 730000,China

Fungal detection of paraffin sections of biopsy specimen collected by fibergastroscope increased obviously by the combined application of PAS,Giemsa staining and conventional hematoxylin-eosin staining(HE stain).The two special staining methods have important clinical and pathology significance in detection of fungal infection in gastric mucosa biopsy.

Fungi;Special staining;Gastric ulcer;Gastric cancer

R446.8

A

1674-4721（2012）11（b）-0015-03

張東生（1959-），男，副主任醫(yī)師，甘肅省病理專業(yè)委員會(huì)副主任委員；研究方向：消化系統(tǒng)疾病的病理研究。

▲通訊作者

2012-08-20 本文編輯：陳 ?。?/p>