孟克巴牙爾 常 嵐 張高娃 趙 陽 白音夫?

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.呼和浩特市環(huán)境科學研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010030;3.內(nèi)蒙古醫(yī)學院2010級研究生，內(nèi)蒙古呼和浩特 010050)

頸椎通絡丸是我院所臨床協(xié)定處方制劑。具有祛風通絡，活血化瘀作用，用于頸椎病引起的頭痛、頭暈、耳鳴等癥。主要由白芍、葛根、桂枝、羌活、地龍、烏蛇、防風、制草烏、甘草等藥材組成。制法，以上藥材粉碎成細粉，加蜂蜜制成小蜜丸。本文采用液相色譜法對桂皮醛、芍藥苷含量進行測定。

1 儀器、試劑及樣品

高效液相色譜儀:1100型(美國 Agilentg公司制造);NC－2000中北色譜工作站;1/10萬光電天平:TG332A型(湘儀制造);超聲清洗儀:AS2060B型(上?？茖W儀器公司制造)。

甲醇、乙腈:色譜純，由美國Tedai公司生產(chǎn);磷酸為分析純;水為三蒸水。桂皮醛(710～9005)芍藥苷(0736～200014)由中國藥品生物制品檢定所提供。頸椎通絡丸由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件:非羅門 Kromasil色譜柱 C18(4.6×200mm，5μm)。流速:1mL·min－1;柱溫:30℃。桂皮醛測定波長290nm，流動相:甲醇－1%:磷酸(300:200);芍藥苷測定波長為230nm，流動相:乙腈－0.1%磷酸溶液(22:78)［1］。

2.2 測定溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取桂皮醛對照品適量，用甲醇配制成0.08mg·mL－1;濃度的溶液。精密稱取芍藥苷對照品適量，用甲醇配制成0.09mg·mL－1;濃度的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品，用剪刀剪碎，稱取0.4g，置研缽內(nèi)，加甲醇2ml研磨直到全部溶散，甲醇溶液轉(zhuǎn)移至50mL具塞錐形瓶中，用甲醇沖洗研缽3次，每次2mL。超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，再將甲醇溶液轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜止，用0.45μm濾膜濾過，即的。

2.2.3 專屬性試驗:依照樣品制備方法分別制備不含肉桂和芍藥的頸椎通絡丸的陰性制劑，依照色譜條件測定。桂皮醛陰性樣品與芍藥苷陰性樣品在與樣品相應的保留時間內(nèi)無干擾峰出現(xiàn)，表明，其它藥材對桂皮醛及芍藥苷的測定無干擾。

2.3 線性關系考察:精密吸取桂皮醛溶液1mL置10mL量瓶內(nèi)為A溶液，由A溶液量取1mL按上法稀釋為B溶液。吸取 B 溶液2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測定峰面積。回歸方程:Y=5738+4369354x，r=0.9999。桂皮醛在 0.02 ～0.64μg成線性關系。

芍藥苷對照品溶液為A，精密吸取1mL置10mL量瓶內(nèi)加甲醇至刻度為B溶液。吸取A溶液4、6、8μL，B溶液2、4、6μL按色譜條件測定峰面積?；貧w方程:Y=20038+3807746x，r=0.999。芍藥苷在 0.0182 ～0.546μg 范圍內(nèi)線性關系良好。

2.4 精密度試驗:精密吸取同一供試品溶液4μL，連續(xù)進樣5次，分別測定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結果峰面積的RSD分別為0.74%與1.01%。

2.5 穩(wěn)定性試驗:取同批號供試品溶液，分別于樣品制備后第0，2，4，8h進樣 4μL，測定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結果峰面積的RSD分別為0.65%與1.10%，樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定

2.6 重復性試驗:取同批次樣品，按2.2項下的方法制備5份樣品。分別測定桂皮醛和芍藥苷含量，桂皮醛平均含量 0.21 mg·g－1，RSD 為 3.5%;芍藥苷平均含量 0.16 mg·g－1，RSD 為 3.7%。

2.7 回收率試驗:取已知桂皮醛和芍藥苷含量頸椎通絡丸0.3g，置10mL容量瓶內(nèi)分別精密加入桂皮醛對照品溶液1mL(0.08mg·mL－1)，芍藥苷對照品溶液 0.5mL(0.091mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過濾。按色譜條件測定。計算測定平均回收率。見表1樣品編號1～5為桂皮醛加樣回收率測定，6～10為芍藥苷加樣回收率測定3樣品測定分別吸取對照品溶液與樣品溶液4μL，依上述色譜條件測定不同批號桂皮醛和芍藥苷含量，二者平均含量分別為 0.24 mg﹒ g－1、0.16 mg﹒g–1。

表1 頸椎通絡丸加樣回收率測定

表2 樣品中桂皮醛和芍藥苷含量測定(n=5)

4 討論

對供試品溶液制備方法進行研究。分別考察超聲、回流提取方法，結果表明超聲處理方法操作簡便、省時，提取效率高。對提取時間考察表明，樣品超聲處理30min后桂皮醛與芍藥苷含量不再增加。色譜柱適用性研究表明，Agilent XDB －C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非羅門Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)均可適用本試驗測定。測定結果表明，桂皮醛含量在 0.21 ～0.27 mg·g－1，芍藥苷含量0.12 ～0.19mg·g－1，批次之間含量差異不大。采用 HPLC法測定頸椎通絡丸指標性成分，可作為有效控制藥品的質(zhì)量的方法之一。該方法重現(xiàn)性好，操作簡便、靈敏、準確、可靠。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典(一部)［S］.中國醫(yī)藥出版社，2010.127，96