向 梟 周興華 陳 建 李代金 王文娟 周小秋

飼料蛋白水平及魚粉蛋白含量對齊口裂腹魚生長、體組成及消化酶活性的影響

向 梟1，2周興華1陳 建1李代金1王文娟1周小秋2

(西南大學榮昌校區(qū)水產(chǎn)系淡水魚類資源與生殖發(fā)育教育部重點實驗室水產(chǎn)科學重慶市市級重點實驗室1，重慶 402460)
(四川農(nóng)業(yè)大學動物營養(yǎng)研究所2，雅安 625014)

試驗探討了不同蛋白水平(CP)及魚粉蛋白含量(FP)對齊口裂腹魚生長及體組成的影響。分別設(shè)5個蛋白水平(30%、32．05%、37%、41．95%、44%)和 5個魚粉蛋白水平(0%、5．86%、20%、34．14%、40%)。以CP、FP作為試驗因素。按照二因子二元二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計，分為16個試驗組，每組設(shè)3個重復(fù)。每個重復(fù)30尾魚［(11．45±0．39)g］。經(jīng)過50 d養(yǎng)殖試驗。結(jié)果表明，不同蛋白水平及魚粉蛋白含量對齊口裂腹魚幼魚生長有顯著影響(P＜0．05)。CP 37%，F(xiàn)P40%時，試驗魚的增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、飼料蛋白質(zhì)效率(PER)最大(分別為 103．31%、1．42%/d 和 145．74%)，CP 44%，F(xiàn)P 20% 時，試驗魚的餌料系數(shù)(FCR)最低(為1．97)。以WGR、SGR、PER、FCR為指標，利用二元回歸分析表明，齊口裂腹魚生長性能最優(yōu)時飼料CP、FP分別為39．94%～42．54%，30．67%～45．47%;對齊口裂腹魚體組成分析表明，不同的飼料CP、FP對魚體粗灰分和水分影響不顯著(P＞0．05)，但對魚體粗蛋白和粗脂肪有顯著的影響(P＜0．05);適宜的飼料CP、FP能有效改善齊口裂腹魚消化酶的活性，提高對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率。綜合考慮各生長指標、肌肉營養(yǎng)成分、消化酶活性及各指標間的相關(guān)性和成本因素，建議在實際生產(chǎn)配方中齊口裂腹魚幼魚飼料中蛋白水平及魚粉蛋白質(zhì)量分數(shù)分別以39．94%～42．54%，30．67%～45．47%為宜。

齊口裂腹魚 蛋白水平 生長 體組成 消化酶活性

蛋白質(zhì)是動物生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，具有維持動物新陳代謝等多種生理功能，其主要來源于動植物蛋白源。作為水產(chǎn)動物飼料的重要飼料蛋白源的魚粉，資源量逐年下降，價格居高不下，且大多數(shù)魚類對魚粉中磷的利用率不高［1］。因此，開發(fā)質(zhì)優(yōu)價廉的動植物蛋白源替代魚粉已成為水產(chǎn)動物營養(yǎng)研究領(lǐng)域的必然趨趨。而植物蛋白來源廣，資源豐富，價格低廉。則植物蛋白源替代魚粉的研究在不斷地深入。朱慶國［2］認為點帶石斑魚(Epinephelus coioides)生長過程中適宜的動植物蛋白比為3．0∶1～2．2∶1，陳建等［3］報道了淡水白鯧(Colossomabrachypomum)飼料中適宜的動植物蛋白比為1∶1．67;向梟等［4］研究表明飼料中動植物蛋白比為 0．37∶1～0．18∶1 時鯉(Cyprinus carpio)的消化酶活性最高。齊口裂腹魚(Schizothorax prenanti)是長江上游的一種底層冷水性魚類，肉質(zhì)細嫩，營養(yǎng)價值豐富［5－6］，味道鮮美，是我國重要的經(jīng)濟魚類。近年來由于捕撈過度等因素的影響，野生種群數(shù)量急劇下降。為了保護、開發(fā)和持續(xù)利用這一水生動物資源，對于其人工繁殖技術(shù)［7］，各種營養(yǎng)素的需求已有一定的研究［8－10］。但對于植物蛋白在其養(yǎng)殖中的應(yīng)用則少有報道。本試驗擬通過采用豆粕替代部分魚粉，設(shè)計出不同蛋白水平和魚粉蛋白比含量的飼料，對齊口裂腹魚幼魚的生長性能、體組成及消化酶活性指標進行初步研究，通過綜合評價，探索齊口裂腹魚幼魚生長過程中飼料蛋白水平和魚粉蛋白含量的最佳組合。為開發(fā)高效、優(yōu)質(zhì)的齊口裂腹魚配合飼料提供科學的依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗設(shè)計和試驗飼料

試驗設(shè) 5個蛋白水平(30%、32．05%、37%、41．95%、44%)，5 個魚粉蛋白水平(0、5．86%、20%、34．14%、40%)。

以飼料中蛋白水平(CP)和魚粉蛋白水平(FP)作為試驗因素。按照二因子二元二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計［11］，設(shè)計出等能飼料(總能為14．0 kJ/g)?？煞譃锳1～A16共16個試驗組，每組設(shè)3個重復(fù)。試驗飼料以魚粉為動物蛋白源，豆粕為植物蛋白源，混合油脂(魚油∶豆油=1∶1)為脂肪源。設(shè)計出9個飼料配方及其營養(yǎng)水平組合(表1)。1～8號料喂A1～A8組試驗魚，9號料喂A9～A16組試驗魚。飼料原料全過60目篩，各組飼料逐級混合均勻，再加水拌勻，用QRLS－150型電動絞肉機制成粒徑2 mm顆粒飼料，25℃風干后置于4℃冰箱內(nèi)儲存?zhèn)溆谩ｏ暳吓浞揭姳?。

表1 飼料2因子5水平二元二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計表

1．2 試驗魚與試驗管理

試驗用齊口裂腹魚幼魚購自四川峨眉冷水魚場。購回后用4%的食鹽水消毒后暫養(yǎng)在水泥池中(暫養(yǎng)期間按3%投喂商品魚飼料)。暫養(yǎng)7 d后，選取體格健康、無畸形、體重(11．45±0．39)g的齊口裂腹魚1 440尾隨機投入48個水族箱(規(guī)格為1．0 m×1．0 m×1．0m)，每箱30尾。每天按3%～5%的投餌率投餌3 次(8∶00、12∶30、17∶00)，投餌 1 h 后將殘餌撈出烘干扣除。飼養(yǎng)期為50 d，每天記錄水溫，溶解氧，24 h不間斷充氣，保證水體溶解氧穩(wěn)定。試驗期間保持微流水，平均水溫在15～20℃，水體pH7．0～7．5，透明度50 cm 以上，溶氧5．5 mg/L 以上。

1．3 指標測定與方法

生產(chǎn)性能:試驗開始時，測定試驗魚的初始體重，試驗結(jié)束后，停食1 d，測定各組試驗魚體重，計算其增重率和特定生長率，依據(jù)養(yǎng)殖期間飼料的投喂量、飼料蛋白含量及試驗魚的增重計算餌料系數(shù)和飼料蛋白轉(zhuǎn)化率。

增重率(WGR，%)=(Wt－Wo)×100/Wo

特定生長率(SGR，%/d)=(ln Wt－ln Wo)×100/t

蛋白質(zhì)效率(PER，%)=(Wt－Wo)×100/F×P

餌料系數(shù)(FCR)=F/(Wt－Wo)

式中:Wo為試驗開始時魚體重/g;Wt為試驗結(jié)束時魚體重/g;F為飼料攝入量/g;P為飼料粗蛋白質(zhì)質(zhì)量分數(shù)/%;t為養(yǎng)殖試驗天數(shù)/d。

表2 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ)，%)

樣品采集:試驗結(jié)束后，停食1 d，每個水族箱中隨機取魚5尾，放在冰盤上解剖，取腸道，肝胰臟，背肌(鰓蓋后端，側(cè)線上方肌肉)用4℃預(yù)冷后的生理鹽水沖洗，然后用濾紙吸干水分。清除腸道內(nèi)的食物，去除脂肪、腸系膜，用濾紙吸干后分別對腸道及肝胰臟部分稱重。并分別加入相當于其重20倍的生理鹽水，迅速用冰凍玻璃勻漿器勻漿后，低溫條件用離心機在3 500 r/min轉(zhuǎn)速下離心20 min，取上清液作為粗酶提取液，測定消化酶活性;用背肌測定肌肉營養(yǎng)成分。－20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

肌肉營養(yǎng)組成測定 肌肉粗蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法測定(GB 5009．5—2010);粗脂肪采用索氏抽提儀測定法(GB/T 6433—2006);水分采用干燥法(105℃)測定(GB/T 6435—2006);粗灰分采用馬福爐灼燒(550 ℃)法測定(GB/T 6438—2007)［12］。消化酶活性測定 蛋白酶活性采用Folin－酚試劑法［13］;淀粉酶活性采用次碘酸法測定［13］;脂肪酶活性采用聚乙烯醇橄欖油水解法測定［13］。

1．4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSSStatistics 17．0對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(One－way ANOVA)，Duncan’s氏多重比較，差異顯著水平為P＜0．05。以二元二次多項式來擬合WGR、SGR、PER、FCR與飼料蛋白水平及動物蛋白含量間的相關(guān)關(guān)系。試驗數(shù)據(jù)以平均值±標準差(Means±SD)表示。

2 結(jié)果與分析

2．1 飼料蛋白水平及動物蛋白含量對齊口裂腹魚生長性能的影響

表3 不同蛋白水平及動物蛋白含量對齊口裂腹魚生長的影響n =3

由表3可知，A7組試驗魚的增重率、特定生長率、飼料蛋白質(zhì)效率最大，分別為103．31%、1．42%/d和145．74%。分別比 A8 組提高了 46．08%、32．71%和55．36%，WGR、SGR除與A1和A2差異不顯著外(P＞0．05)，與其余各試驗組差異顯著(P ＜0．05)，而PER則與其余各試驗組差異顯著(P＜0．05)。試驗魚的餌料系數(shù)在A5組最低，為1．97。除與A1差異不顯著外(P＞0．05)，與其余各試驗組差異顯著(P＜0．05)。

飼料蛋白水平及魚粉蛋白含量的交互作用對WGR、SGR、PER、FCR的影響見圖1～圖4。隨著飼料中蛋白質(zhì)水平上升，齊口裂腹魚的WGR、SGR逐漸上升。當?shù)鞍姿竭_到37%時，WGR、SGR達到最高點，之后則逐漸緩慢下降并趨于平穩(wěn)。當魚粉蛋白質(zhì)量分數(shù)上升到20%時，隨著飼料蛋白水平的上升，試驗魚的WGR、SGR達到一折點后上升緩慢。魚粉蛋白含量處于較低水平時，隨著飼料蛋白水平的升高，試驗魚PER呈緩慢上升趨勢，魚粉蛋白含量處于較高水平時，隨著飼料蛋白水平的升高，試驗魚PER先呈升后降的趨勢，而FCR則呈現(xiàn)出與PER相反的趨勢。說明飼料中蛋白水平與動物蛋白含量間存在著明顯的交互作用。在一定范圍內(nèi)，隨著飼料蛋白水平上升，試驗魚的生長加快，但超過一定的水平后，齊口裂腹魚的生長反而呈下降趨勢。在飼料蛋白水平相等時，魚粉蛋白含量越高，試驗魚對飼料有著更高的利用率，生長越好，但當魚粉蛋白含量超過一定范圍后，齊口裂腹魚對飼料的利用率反而下降。

2．2 齊口裂腹魚主要生長指標與飼料蛋白水平及動物蛋白含量的回歸關(guān)系

分別以齊口裂腹魚的WGR、SGR、PER、FCR為因變量(分別為 Y1、Y2、Y3、Y4)，以飼料蛋白水平和魚粉蛋白含量分別作為方程自變量，用X1、X2表示。以X1X2表示蛋白水平和魚粉蛋白含量二者之間的交互作用，得到二元二次回歸方程為:

WGR與飼料蛋白水平和動物性蛋白含量的回歸方程:

則齊口裂腹魚WGR最優(yōu)時飼料蛋白水平和動物性蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)分別為41．19%、32．82%。

SGR與飼料蛋白水平和動物性蛋白含量的回歸方程:

1.3.1 術(shù)后患者恢復(fù)情況 患者術(shù)后下床活動時間、術(shù)后胃腸道恢復(fù)時間、胸腔引流管放置時間及住院時間。

齊口裂腹魚SGR最優(yōu)時飼料蛋白水平和動物性蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)分別為:42．54%、30．67%。

PER與飼料蛋白水平和動物性蛋白含量的回歸方程:

齊口裂腹魚PER最優(yōu)時飼料蛋白水平和動物性蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)分別為:29．42%、45．47%。

FCR與飼料蛋白水平和動物性蛋白含量的回歸方程:

齊口裂腹魚FCR最優(yōu)時飼料蛋白水平和動物性蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)分別為:39．94%、37．93%。

2．3 飼料蛋白水平及動物蛋白含量對齊口裂腹魚肌肉營養(yǎng)成分的影響

由表4可知:試驗魚肌肉中的粗蛋白含量為A1組最高(22．17%)，除與A2、A7組差異不顯著外(P＞0．05)，顯著高于其他各組(P ＜0．05);粗脂肪含量在 A4 組最高(7．13%)，除與 A1、A2、A5、A8 差異不顯著外(P＞0．05)，顯著高于其他各組(P＜0．05);飼料蛋白水平和魚粉蛋白含量對試驗魚肌肉中水分和灰分的含量均無顯著的影響(P＞0．05)。

表4 飼料蛋白水平及魚粉蛋白含量對齊口裂腹魚肌肉營養(yǎng)成分的影響(鮮重基礎(chǔ)，%) n=10

2．4 飼料蛋白水平及動物蛋白含量對對齊口裂腹魚消化酶活性的影響

3 討論

3．1 飼料蛋白水平及動物蛋白含量對齊口裂腹魚生長及營養(yǎng)成分的影響

蛋白質(zhì)除了是魚體的構(gòu)成成分外，還能為魚類提供能量。在適宜的蛋白質(zhì)水平范圍內(nèi)，隨著蛋白含量增加魚體生長速度加快［14－15］。當幼魚飼料中蛋白質(zhì)超過55%時暗紋東方鲀(Takifugu obscurus)幼魚的增重率、飼料效率呈現(xiàn)不同程度的下降［16］。王武等［17］報道，飼料中蛋白質(zhì)水平為37%時，瓦氏黃顙魚(Pelteobagrus Vachelli)的絕對增重率、相對增重率最高，餌料系數(shù)最低。其可能的原因有:一是過量的蛋白質(zhì)對魚體產(chǎn)生毒害作用［18］，過高的飼料蛋白使魚體氨排泄增加，造成蛋白質(zhì)浪費［19］;二是多余的蛋白質(zhì)在體內(nèi)被作為能量而氧化分解［20－21］或轉(zhuǎn)化為脂肪［22］;三是由于蛋白質(zhì)的特殊動力作用增大了熱能消耗，從而降低了能量利用率和蛋白質(zhì)效率［23］。曹俊明等［24］發(fā)現(xiàn)草魚(Ctenopharyngodon idellus)攝食蛋白水平較高的飼料后，可提高魚類體蛋白質(zhì)含量。而魚類飼料蛋白是由動物蛋白和植物蛋白構(gòu)成的，由于這兩類蛋白源的氨基酸含量及組成不同，當飼料中這兩類蛋白質(zhì)的構(gòu)成合理，則飼料中氨基酸平衡程度高，可提高魚類的生長效果和對飼料的利用率。向梟等［25］認為，飼料蛋白水平為30%時，當動植物蛋白比為1:1．67時，淡水白鯧生長性最優(yōu)，魚體肌肉中粗蛋白含量最高。莊平等［26］報道，中華鱘(Aclpenser Sinensis)幼魚飼料最佳動植物蛋白比1∶1;飼料中動植物配比為0．75～1∶1 時，既能保證花魚骨生長性能和蛋白利用率又能降低養(yǎng)殖成本［27］。說明動植物蛋白之間有明顯的互補效應(yīng)。

本試驗中，蛋白水平和魚粉蛋白含量之間存在顯著的交互作用。飼料蛋白水平對齊口裂腹魚生長速度的影響較大，且二者間的不同組合對其生長有顯著影響，高蛋白、中等魚粉蛋白含量組合的試驗飼料使齊口裂腹魚表現(xiàn)出較好的生長效果。當齊口裂腹魚的WGR、SGR、PER、FCR達到最優(yōu)時，本試驗中齊口裂腹魚飼料中的適宜蛋白水平和動物蛋白質(zhì)量分數(shù)分別為 39．94%～ 42．54%，30．67%～ 45．47%。這與何雷等［10］的結(jié)論有一定的差異，可能與試驗魚的規(guī)格、飼料組成及試驗條件等多種因素有關(guān)。

表5 不飼料蛋白水平及動物蛋白含量對對齊口裂腹魚消化酶活性的影響(鮮物質(zhì)基礎(chǔ)，U/g)n=10

蛋白水平為 41．95%，魚粉蛋白質(zhì)量分數(shù)為34．14%時能顯著提高齊口裂腹魚肌肉中粗蛋白含量，飼料蛋白水平為32．05%，魚粉蛋白質(zhì)量分數(shù)為5．86%的時則可顯著提高試驗魚肌肉粗脂肪含量，不同的蛋白水平和魚粉蛋白含量對試驗魚肌肉中水分和粗灰分的影響均不顯著。這與張顯娟等［28］對牙鲆(Paralichthys olivaceus)、劉永堅等［29］對紅姑魚(Sciaenops ocellatus)的報道有一定的差異，可能與魚類的食性有關(guān)。

3．2 飼料蛋白水平及動物蛋白含量對齊口裂腹魚消化酶活性的影響

消化酶是維持機體正常代謝的活性物質(zhì)，對生物體內(nèi)的各種化學變化起催化作用。消化酶活性的提高，可促進魚類對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高魚類的生長速度。但消化酶活性的變化受到飼料中蛋白質(zhì)含量等多種因素的影響［30］，且飼料的性質(zhì)可影響魚類消化酶的活性［31］。Lee等［32］認為飼料中蛋白源的種類對南美白對蝦(Penaeus vannamei)蛋白酶活力的影響大于蛋白質(zhì)含量所造成的影響;攝食蛋白水平為10．26%的飼料時蟾胡子鲇(Clarias batrachus)腸道蛋白酶的活性低于攝食蛋白質(zhì)水平為21．85%的飼料［33］，大口黑鱸(Micropterus salmoides)［34］、大西洋鯡(Clupea harengus)［35］幼魚的消化酶的活性均與所攝取的食物性質(zhì)有關(guān)。用豆粕替代50%的魚粉時，能提高斑點叉尾鮰的淀粉酶活性［36］，向梟等［37］報道，飼料中動植物蛋白比為0．18∶1時，鯉蛋白酶、淀粉酶活性和脂肪酶活性均達到最大。表明飼料中適宜的動植物蛋白比例在一定程度上刺激了消化酶的分泌，提高了魚類對各種營養(yǎng)成分的消化率和蛋白質(zhì)利用率，促進魚類的生長。

本試驗中，在一定蛋白水平范圍內(nèi)，齊口裂腹魚消化酶活性的變化趨勢基本與其生長性能和飼料轉(zhuǎn)化率的變化趨勢相一致。腸和肝胰腺蛋白酶活性隨著飼料中蛋白水平的增加而增高，當?shù)鞍姿胶筮_到一定程度后，消化酶活性趨于穩(wěn)定甚至有所下降。飼料CP為37%，F(xiàn)P為40%的組合能有效提高齊口裂腹魚蛋白酶、淀粉酶活性，但與CP為41．95%，F(xiàn)P為34．14%的組合無明顯差異(P＞0．05);齊口裂腹魚腸脂肪酶在飼料CP為30%，F(xiàn)P為20%時活性最高，肝胰臟脂肪酶則在飼料 CP為32．50%，F(xiàn)P為31．14%時活性最高。說明一定的飼料蛋白水平和動物蛋白含量能有效促進齊口裂腹魚消化道酶的分泌，提高消化酶的活性，從而提高對飼料的消化利用率，促進齊口裂腹魚的生長。

4 結(jié)論

綜上所述，齊口裂腹魚飼料中蛋白水平和動物蛋白含量在WGR、SGR、PER、FCR等指標上存在顯著的交互作用。綜合考慮各生長指標、肌肉營養(yǎng)成分、消化酶活性及各指標間的相關(guān)性和成本因素，建議齊口裂腹魚幼魚飼料中蛋白水平和魚粉蛋白質(zhì)量分數(shù)分別以 39．94%～42．54%，30．67%～45．47% 為宜。

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Effects of Dietary Protein and Animal Protein Levels on Growth，Body Composition and Digestive Enzyme Activities of Juvenile Prenant's Schizothoracin(Schizothorax prenanti)

Xiang Xiao1，2Zhou Xinghua1 Chen Jian1Li Dianjin1Wang Wenjuan1 Zhou Xiaoqiu2

(Key Laboratory of Freshwater Fish Reproduction and Development，Ministry of Education，Key Laboratory of Aquatics Science of Chongqing，Department of Fisheries in Rongchang Compust，Southwest University1，Chongqing 402460)
(Animal Nutrition Institute，Sichuan Agriculture University2，Ya'an 625014)

A 50－ day feeding trial of 5 dietary protein levels(30%，32．05%，37%，41．95%，44%)and 5 dietary fishmeal protein levels(0，5．86%，20%，34．14%，40%)designed with 3 replications was conducted to determine the effects of dietary protein and fishmeal protein levels on growth，muscle composition and digestive enzyme activities of juvenile prenant＇s schizothoracin ［initial body weight:(11．45 ± 0．39)g］．Using two－ factor，five－ level，orthogonal regression rotational combination design，fish were fed respectively to apparent satiation by 9 experimental diets．The results showed that the Weight Gain Ratio(WGR)，the Specific Growth Ratio(SGR)and Protein Efficiency Ratio(PER)of fish were significantly affected by dietary protein × fishmeal protein interaction(P ＜0．05)．All of the WGR，SGR and PER of prenant＇s schizothoracin were highest(103．31% ，1．42%od－1，145．74%respectively)when fed the CP37%and AP40%diet，F(xiàn)CR was the lowest(1．42)when fed the CP44%and AP20%diet．Using binary regression analysis of the WGR，SGR，PER，F(xiàn)CR，the optimal levels of protein and fishmeal protein in diet was 39．94% －42．54%and 30．67%－45．47%respectively．Muscle protein and lipid levels was influenced by dietary protein and fishmeal protein levels(P ＜ 0．05)，however，there had no significant effects on muscle moisture and crude ash of prenant＇s schizothoracin(P ＞0．05)．Activities of digestive enzyme were improved at a certain levels of dietary protein and fishmeal protein．In conclusion，this study suggests that growth performance of juvenile prenant＇s schizothoracin is improved at a suitable protein × fishmeal protein in diet．Fish fed diet containing 39．94%～42．54%protein and 30．67%～45．47%fishmeal protein got the best growth performance and the ideal body conposition．

prenant＇s schizothoracin(Schizothorax prenanti)，protein levels，growth performance，muscle composition，digestive enzyme activities

S965．1

A

1003－0174(2012)05－0074－08

中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費專項資金(XDJK2009C165)，西南大學水產(chǎn)養(yǎng)殖學科基金(SC1002)

2011－08－20

向梟，男，1973年出生，博士，副教授，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料

周小秋，男，1965年出生，教授，博士生導(dǎo)師，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料