劉曉麗 馬禮鴻 王 凱 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563003)

NET-1、Ki-67在肺腺癌組織中的表達(dá)及意義

劉曉麗 馬禮鴻1王 凱 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，貴州 遵義 563003)

NET-1;Ki-67;肺腺癌;組織芯片;預(yù)后

WHO(2011)分類統(tǒng)計結(jié)果表明，鱗癌和腺癌約占肺惡性腫瘤的80%以上，且腺癌的發(fā)病率近年來有明顯上升趨勢〔1〕。腫瘤相關(guān)分子基因NET-1屬于四聚體超家族成員之一，在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)、增殖、分化及誘導(dǎo)血管形成過程中有著重要作用〔2〕。有文獻(xiàn)報道〔3〕，肝癌中NET-1過表達(dá)可以促進(jìn)癌細(xì)胞異常增生與失分化，前列腺癌組織中特異性存在NET-1蛋白。Ki-67是一個較全面反映細(xì)胞增殖活性的標(biāo)記，黃炳臣等〔4〕報道大腸腺癌組織中Ki-67高表達(dá);王紅梅等〔5〕報道乳腺癌Ki-67表達(dá)上升，其表達(dá)與腫瘤分期、E-鈣黏連蛋白有關(guān)。本實驗探討NET-1、Ki-67在肺腺癌組織中的表達(dá)情況及其對肺腺癌診斷及預(yù)后的判斷意義。

1 資料與方法

1.1 材料

選用廣西桂林泛譜生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的組織芯片及實驗芯片。標(biāo)本分為四組：①正常組：正常肺組織15例，②良性組：良性病變15例，均為炎性假瘤，③癌旁組：15例;④惡性組：腺癌97例，年齡35～75〔平均(63.8±2.3)〕歲，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移68例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例;根據(jù)WHO 2011年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類：浸潤前病變26例，微小浸潤性腺癌34，浸潤性腺癌37例。臨床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)39例，晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)58例。平均隨訪72個月(48～90個月)，所有病例臨床、病理資料完整，術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療及其他抗腫瘤治療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色 采用免疫組織化學(xué)(SP)法，按試劑盒說明書進(jìn)行。NET-1、Ki-67一抗購自美國Santa Cruz生物技術(shù)公司，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照，已知陽性切片作陽性對照，二抗試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)酶顯色試劑盒均購自北京中杉生物制劑有限公司。

1.2.2 結(jié)果判斷 在細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)/細(xì)胞膜出現(xiàn)棕色顆粒為陽性信號。NET-1陽性表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)/膜，Ki-67陽性表達(dá)于細(xì)胞核。計數(shù)5個視野(×200)中陽性表達(dá)腫瘤細(xì)胞所占的百分比，NET-1＜50%的癌細(xì)胞表達(dá)為低表達(dá)，≥50%為高表達(dá)〔6〕，Ki-67＜10%的癌細(xì)胞表達(dá)為低表達(dá)，≥10%為高表達(dá)〔7〕。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用Spearman等級相關(guān)分析，采用Fisher直接計算概率法，等級分組變量間表達(dá)陽性率趨勢分析用χ2檢驗，生存曲線用Kaplan-Meier估計，兩組曲線比較用Log-rank(時序)檢驗。

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，相關(guān)性

2 結(jié)果

2.1 NET-1、Ki-67表達(dá)的相關(guān)性

NET-1低表達(dá)49.5%(48/97)，高表達(dá)50.5%(49/97)。Ki-67低表達(dá)47.3%(46/97)，高表達(dá)52.6%(51/97)。在陰性對照組均未見NET-1和Ki-67的陽性表達(dá);15例肺良性病變組中9例NET-1呈低表達(dá)，4例Ki-67僅在個別細(xì)胞表達(dá)。見圖1。

2.2 肺腺癌NET-1、Ki-67的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

NET-1蛋白表達(dá)與肺腺癌分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期有密切相關(guān)(均P＜0.05)，低分化腺癌組NET-1表達(dá)高于高、中分化組(χ2=18.894，P＜0.01)，中分化腺癌組NET-1表達(dá)高于高分化組(χ2=5.035，P=0.025)。Ki-67蛋白表達(dá)與肺腺癌分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期有密切相關(guān)(P＜0.05)，低分化腺癌組Ki-67表達(dá)高于高、中分化組(χ2=6.283，P＜0.05)，中分化腺癌組Ki-67表達(dá)高于高分化組(χ2=5.807，P=0.016)。NET-1、Ki-67的表達(dá)與患者性別、年齡、腫塊大小和病理分型無關(guān)(均P＞0.05)。見表1。

表1 肺腺癌NET-1、Ki-67表達(dá)及其與臨床病理關(guān)系(n)

圖1 NET-1、Ki-67在肺腺癌中的陽性表達(dá)(SP法，×400)

NET-1高表達(dá)組生存率低于低表達(dá)組，時序檢驗：χ2=17.56，P＜0.01;Ki-67高表達(dá)組生存率低于低表達(dá)組，時序檢驗：χ2=14.62，P＜0.01

2.3 肺腺癌NET-1、Ki-67表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

運(yùn)用Kaplan-Meier生存曲線分別對NET-1、Ki-67高表達(dá)的患者與預(yù)后關(guān)系進(jìn)行比較，見圖2。NET-1與Ki-67在肺腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(χ2=19.206，P ＜0.01)。

3 討論

NET-1、Ki-67在肺腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性目前尚未見報道。NET-1在細(xì)胞通路的信號傳導(dǎo)、調(diào)節(jié)、增殖及誘導(dǎo)血管形成等方面有著重要作用〔2〕。本實驗結(jié)果顯示，NET-1表達(dá)越強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞分化越低，越易發(fā)生轉(zhuǎn)移，臨床分期越高。與已有文獻(xiàn)的報道一致〔8〕。

Ki-67是一種核抗原，主要用于判斷細(xì)胞的增殖活性，表達(dá)在所有活動的細(xì)胞周期(G1、S、G2和有絲分裂期)中，但在G0期不表達(dá)，是判斷腫瘤細(xì)胞增殖活性應(yīng)用較廣的指標(biāo)。文獻(xiàn)報道惡性腫瘤中Ki-67陽性表達(dá)66.3% ～76.3%〔9〕。本組實驗結(jié)果顯示，Ki-67與肺腺癌的增殖及預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，NET-1與Ki-67蛋白在肺腺癌組織中的表達(dá)與肺腺癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，NET-1與Ki-67高表達(dá)提示患者預(yù)后不良，可以作為肺癌臨床預(yù)測轉(zhuǎn)移和判斷預(yù)后的分子標(biāo)記物。

1 Travis WD，Brambilla E，Noguchi M，et al.International association for the study of lung cancer/american thoracic society/european respiratory society international multidisciplinary classification of lung adenocarcinoma〔J〕.J Thorac Oncol，2011;6(2)：244-85.

2 陳 莉，李德春，朱遠(yuǎn)源.NET-1表達(dá)與肝癌臨床病理因素相關(guān)性探討〔J〕.中華病理學(xué)雜志，2005;34(9)：596-7.

3 Chen L，Li DC，Zhu YY.The expression of NET-1 gene in human tissue〔J〕.U S Chin Int J Bethune，2004;2(6)：16-20.

4 黃炳臣，覃忠衛(wèi)，羅春英，等.大腸腺癌中拓?fù)洚悩?gòu)酶IIa和ki67的表達(dá)及意義〔J〕. 實用醫(yī)學(xué)雜志，2012;28(10)：1637-9.

5 王紅梅，魏尚典，陳新文.Ki-67在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志，2012;21(5)：616-8.

6 Chen L，Wang Z，Zhan X，et al.Association of NET-1 gene expression with human hepatocellular carcinoma〔J〕.Int J Surg Pathol，2007;15(4)：346-53.

7 Gerdes J，Lemke H，Baxsch H，et al.Cell cycle analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67〔J〕.J Immunol，1984;133(3)：1710-5.

8 錢 錚，陳 莉，王桂蘭，等.胃癌NET-1與 Ki-67表達(dá)及意義〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2008;24(3)：305-8.

9 孟秀香，劉丹丹，聶慧玲，等.Bmi-1與Ki-67在肺腺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕. 中國老年學(xué)雜志，2012;32(7)：1381-3.

R730.21;R734.2〔

A

1005-9202(2012)23-5297-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.23.105

1 遵義市第一人民醫(yī)院外科

劉曉麗(1963-)，女，碩士，副教授，主要從事腫瘤分子病理研究。

〔2012-03-26收稿 2012-06-08修回〕

(編輯 袁左鳴)