段嫦麗 江敏 潘麗

妊娠期高血壓疾病是妊娠期常見的并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅母嬰健康，妊娠期高血壓疾病多發(fā)生于妊娠20周以后，臨床表現(xiàn)多為高血壓、蛋白尿、浮腫，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)抽搐、昏迷，甚至母嬰死亡。迄今為止，妊娠期高血壓疾病仍為孕產(chǎn)婦及圍生兒死亡的重要原因。大量的研究表明，妊娠期高血壓疾病發(fā)病的中心環(huán)節(jié)為廣泛的血管內(nèi)皮損傷，而胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞缺血在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中起重要作用。本研究通過測(cè)定、比較妊娠期高血壓疾病孕婦與正常孕婦血清妊娠血漿PAPP-A水平，旨在分析PAPP-A與妊娠期高血壓疾病發(fā)病的關(guān)系，探討其在臨床中的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年8月至2011年9月在我院分娩的60例妊娠期高血壓疾病孕婦為研究對(duì)象，其中患有妊娠期高血壓的患者共30例，子癇前期患者共20例，子癇患者共10例，平均年齡為(26.5±4.3)歲，平均孕周約為(37.4±2.1)周，60例患者均為初產(chǎn)婦。選擇與之同期分娩的60例正常孕婦作為對(duì)照組。病例組與對(duì)照組年齡、分娩孕周在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中均無顯著性差異，具有可比性。

1.2 操作方法 取空腹時(shí)前靜脈血5 ml置試管中，以3000 r/min離心15 min，取血清置-20℃冰箱中保存待測(cè)。PAPP-A酶聯(lián)免疫定量試劑盒，購自美國DSL公司。操作步驟:實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.2.1 加樣 分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120 min。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.2.2 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液樣品稀釋液100 μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃反應(yīng)60 min。

1.2.3 溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1～2 min，大約400 μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

1.2.4 每孔加檢測(cè)溶液樣品稀釋液100 μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60 min。

1.2.5 溫育60 min后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1～2 min，350 μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

1.2.6 依序每孔加底物溶液90 μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30 min內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3～4孔有明顯的梯度蘭色，后3～4孔梯度不明顯，即可終止)。

1.2.7 依序每孔加終止溶液50 μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

1.2.8 用酶聯(lián)儀在450 nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 1.0軟件，輸入觀察記錄的數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.繪制表格，數(shù)據(jù)組間比較采用t檢驗(yàn)

2 結(jié)果

妊娠期高血壓疾病組孕婦血清中PAPP-A含量均高于正常對(duì)照組，且隨病情的加重，血清中PAPP-A值逐漸增高。見表1。

表1 正常孕婦和妊娠期高血壓疾病孕婦血清PAPP-A水平

3 討論

PAPP-A與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系:PAPP-A是一種與妊娠相關(guān)的人分子糖蛋白，1974年由Lin等人從孕婦血清中分離得出，經(jīng)過試驗(yàn)分析，認(rèn)證其是一種胎盤組織中的糖類蛋白質(zhì)，后因經(jīng)免疫組化證實(shí)PAPP-A定位于絨毛細(xì)胞的滋養(yǎng)細(xì)胞層。因此，血清中PAPP-A的水平可反映滋養(yǎng)細(xì)胞的具體功能［1］。而且人們也早已認(rèn)識(shí)到妊娠期高血壓這種疾病總是與胎盤相互共存，即使是孕婦所懷的根本無胎兒存在的葡萄胎，也可發(fā)病，并且隨著妊娠的終止，胎盤祛除，病情可自然緩解，因此，妊娠期高血壓疾病亦被稱為胎盤性疾病。而對(duì)于妊娠期高血壓疾病病因，目前比較公認(rèn)的看法是:滋養(yǎng)細(xì)胞生理功能的改變可能是導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病胎盤生理性血管重鑄障礙(淺植入)，最終導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)［2］。但這種說法在學(xué)術(shù)界仍然存在著許多爭(zhēng)議，依舊需要探討和商榷。

同時(shí)，有國外學(xué)者通過具體研究，發(fā)現(xiàn)患有妊娠期高血壓一病的孕婦的血清中PAPP-A的濃度會(huì)升高，尤其是先兆子癇患者出現(xiàn)任何明顯癥狀前，在其他蛋白質(zhì)未受影響時(shí)就可測(cè)出PAPP-A值明顯升高，且其增高幅度與病情輕重呈正相關(guān)。Bersinger等［3］將妊娠期高血壓疾病患者(實(shí)驗(yàn)組)與正常孕婦(對(duì)照組)的胎盤組織進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的PAPPA的濃度明顯高于對(duì)照組。認(rèn)為PAPP-A可作為了解妊娠期高血壓疾病患者胎盤功能的個(gè)指標(biāo)。Bersinger等［4］的研究表明妊娠期高血壓疾病患者血清中的PAPP-A水平與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生存在著相關(guān)性同時(shí)，根據(jù)有關(guān)資料顯示:PAPP-A主要是由由胎盤和蛻膜產(chǎn)生的大分子糖蛋白，在懷孕期間，PAPP-A由蛻膜大量產(chǎn)生并釋放到母血循環(huán)中。母血中PAPP-A濃度隨著孕期的增加而不斷升高直到分娩。但是在DS綜合征和18染色體三體患者的母血中PAPP-A濃度卻明顯降低［5］

本研究發(fā)現(xiàn)妊娠期高血壓疾病孕婦血清PAPP-A水平明顯高于正常孕婦(P＜0.05;P＜0.01和P＜0.001)，且與病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［6］。PAPP-A升高的原因可能是由于妊娠期高血壓疾病時(shí)，胎盤淺著床，滋養(yǎng)細(xì)胞缺血缺氧而大量增殖，PAPP-A反應(yīng)性分泌增多，并且是敏感的指標(biāo)，在妊娠期高血壓階段即升高，進(jìn)一步證實(shí)妊娠期高血壓疾病與胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞功能有關(guān)。

綜上所述，PAPP-A在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中起重要作用，可用于對(duì)妊娠期高血壓臨床的檢測(cè)和評(píng)估，通過對(duì)患者血清中PAPP-A的水平變化，即可分析出患者的病情階段及其變化情況，PAPP-A在婦產(chǎn)科妊娠期高血壓疾病發(fā)病中具有極高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

［1］Bersinger NA，Groome N，Mut Tukrishna S.Pregnancy associated and placental proteins in the placental tissue of normal pregnant women and patients with preeclampsia at term.Eur J Endocrinol，2002，147(6):785-793.

［2］Bersinger NA，Smarason AK，Mut Tukrishna S，et al.Women with preeclampsia have increased serum levels of pregnancy associated plasma protein A(PAPP-A)，inhibin A，activin A and soluble E2 selectin.Hypertens Pregnancy，2006，22(1):45-55.

［3］Wilczynski JR，Glowacka E，Nowak M，et al.Serum concentration of soluble vascular-cellular adhesion molecule-1(VCAM-1)and expression of its receptor VLA-4 on the surface of peripheral blood and decidual lymphocytes of preeclamptic women.Ginekol Pol，2008，74(10):1335-1342.

［4］Hey LW.The role of soluble adhesion molecules in evaluating chdothelial cell activation in preeclampsia.Am J Obstet Gynecol，1999，180(11):68-72.

［5］Stein A.Labor-associated expression of intercellulas adhesion molecule-1 in placental endothelial cells indicates participation of immunological process in parturition.Placenta，1999，20(7):567-573.

［6］林明懷.子癇前期、子癇病因及發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展.中國實(shí)用婦 科與產(chǎn)科雜志，2008，20(10):577-579.