邵建蘋 李學(xué)慶 柏琳 孫艷玲

替米沙坦對(duì)大鼠糖尿病腎病中PPARγ途徑的作用

邵建蘋 李學(xué)慶 柏琳 孫艷玲

目的 觀察替米沙坦對(duì)大鼠糖尿病腎病中PPARγ途徑的作用。方法 予替米沙坦治療大鼠糖尿病腎病。結(jié)論 替米沙坦可能通過PPARγ途徑對(duì)糖尿病腎病中腎臟損傷起保護(hù)作用。

替米沙坦;糖尿病腎病;PPARγ途徑

許多研究表明，在糖尿病腎病的狀態(tài)下，腎臟組織中的血管緊張素水平和內(nèi)皮素-1水平明顯升高，這兩種活性物質(zhì)通過許多機(jī)制參與了糖尿病腎病的發(fā)生與進(jìn)展，其中很重要的一個(gè)機(jī)制是激活細(xì)胞中的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號(hào)通路。此外，近年的研究表明，應(yīng)用噻唑烷二酮類藥物(TZDs)激活過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARγ)能夠改善腎臟病變。替米沙坦可高選擇性地作用于血管緊張素AT1受體，它與胰島素增敏劑吡格列酮有類似的結(jié)構(gòu)，有研究證明它可以部分激活PPAR-γ，而且這種作用并不依賴于血管緊張素Ⅱ受體的阻滯作用，在缺乏血管緊張素受體的情況下這些分子仍能在細(xì)胞內(nèi)激活PPARγ，影響PPARγ靶基因的表達(dá)。此外，激活PPARγ可以減少AT1基因的表達(dá)，并能抑制血管緊張素Ⅱ?qū)?xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的影響。我們采用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型，觀察糖尿病狀態(tài)下腎臟中PPARγ途徑的變化，以及替米沙坦對(duì)該途徑的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性SD大鼠20只，體重180～200 g，月齡2～3個(gè)月，由哈爾濱獸研中心提供。適應(yīng)2周后在氯胺酮(50 mg/kg，腹腔內(nèi)注射)麻醉下行右腎切除術(shù)以加速糖尿病腎病模型的形成。2周后予以枸櫞酸緩沖液(10 mmol/L，PH4.5)新鮮配置的鏈脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射造模，第72小時(shí)測(cè)血糖，超過16.7 mmol/L者為造模成功，測(cè)尿蛋白陽性后考慮為糖尿病腎病，隨機(jī)分為模型組及治療組。治療組給子替米沙坦3 mg/(kg·d)灌胃，模型組予以等量生理鹽水灌胃，共12周。第12周末處死大鼠，沿腹中線切開取雙側(cè)腎臟，沿冠狀線將腎臟分成兩半，再沿冠狀面將腎臟繼續(xù)切分。剝離腎臟被膜，去除周圍脂肪組織，迅速置于液氮中速凍，再移入-80℃冰箱保存，進(jìn)行RT― PCR檢測(cè)。

1.2 RT-PCR檢測(cè)

均采用TRIzol試劑一步抽提總RNA，再逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，以適量cDNA為模板，在TagDNA聚合酶(華美公司)催化下行PCR，引物由生物公司設(shè)計(jì)。PPARγ的引物序列為正鏈：5'-TCC GTG ATG GAA GAC CAC TC-3';負(fù)鏈5'-CCC TTG CAT CCT TCA CAA GC-3'。擴(kuò)增條件為95℃3 min 進(jìn)入循環(huán)，94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，32 個(gè)循環(huán)后，72℃延伸5 min，終產(chǎn)物為332bp。以GAPDH作為內(nèi)參照進(jìn)行校正，以目的基因片斷/GAPDH片斷的條帶光密度比值代表目的基因的相對(duì)表達(dá)含量，進(jìn)行半定量PCR分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示。重復(fù)測(cè)量資料采用重復(fù)測(cè)量資料的方差分析(單變量方差分析，univariate ANOVA)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為顯著性差異。

2 結(jié)果

模型組表達(dá)增多，治療組表達(dá)與模型組相比明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1

3 討論

過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)是一類配體激活的核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子，近年來發(fā)現(xiàn)它參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長分化及凋亡、炎癥反應(yīng)、脂肪酸及脂類代謝等，并且與許多疾病，如2型糖尿病、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、腫瘤等密切相關(guān)，因而成為研究的熱點(diǎn)。其亞型PPARγ與腎臟病的關(guān)系最為密切，它可通過抑制炎癥因子、改善脂類代謝及胰島素抵抗、影響血流動(dòng)力學(xué)等方面保護(hù)腎臟。

替米沙坦是一種新型的非肽類ARB類藥物，可高選擇性地作用于血管緊張素AT1受體，對(duì)AT1受體的作用強(qiáng)度較之AT2強(qiáng)約20000倍，選擇性高于同類產(chǎn)品，其作用較氯沙坦強(qiáng)6倍。它是目前臨床上所應(yīng)用的半衰期最長、分布容積最大、經(jīng)腎臟排泄最少的ARB類藥物。

目前有研究證明替米沙坦可以部分激活PPARγ，而且這種作用并不依賴于血管緊張素Ⅱ受體的阻滯作用，在缺乏血管緊張素受體的情況下這些分子仍然能在細(xì)胞內(nèi)激活PPARγ，影響PPARγ靶基因的表達(dá)。而其他ARB類藥物沒有此種作用。通過對(duì)PPARγ RT-PCR的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其在治療組的表達(dá)與模型組相比明顯減少，由此推測(cè)，替米沙坦除了有拮抗血管緊張素Ⅱ(ATⅡ)的作用外，還有可能通過PPARγ途徑對(duì)糖尿病腎病中腎臟損傷起保護(hù)作用。在損傷狀態(tài)下PPARγ表達(dá)增強(qiáng)可能是機(jī)體保護(hù)性的代償反應(yīng)，使之易于被內(nèi)源性的配體活化，對(duì)抗細(xì)胞增殖及炎癥反應(yīng)。然而PPARγ表達(dá)上調(diào)可被替米沙坦抑制，可能由于PPARγ的過度應(yīng)激有可能導(dǎo)致腎臟固有細(xì)胞過度凋亡，對(duì)機(jī)體損傷的恢復(fù)不利，因此配體對(duì)受體的反饋抑制作用也可能是機(jī)體適應(yīng)性的調(diào)節(jié)反應(yīng)，而其機(jī)制等方面的探討則需進(jìn)一步研究加以證明。

［1］馬旭，甘華.PPAR-γ與腎臟疾病.國外醫(yī)學(xué)泌尿系統(tǒng)分冊(cè)，2003，23：709-712.

［2］林沁，馬驥，顧勇，等.單側(cè)輸尿管梗阻后大鼠過氧化物酶體增殖物激活劑受體-γ的表達(dá)及其意義.腎臟病與透析腎移植雜志，2003，12：126-131.

［3］袁曙光，劉瑞洪，夏運(yùn)成，等.血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑對(duì)5/6腎切除鼠的腎臟保護(hù)作用.中華腎臟病雜志，2001，17(1)：41-45.

［4］劉峰，陳佳韻，王偉銘，等.過氧化物酶體增殖物活化受體γ激動(dòng)劑對(duì)人腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞增殖及凋亡的影響.中華腎臟病雜志，2004，20：43-47.

［5］王鴻燕，林朱森，鄒大進(jìn).脂聯(lián)素與PPARγ關(guān)系的研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè)，2004，24(3)：181-183.

［6］熊祖應(yīng)，黃海長，李驚子.過氧化脂質(zhì)體增殖物激活受體-γ對(duì)系膜細(xì)胞炎癥的調(diào)控作用.中華醫(yī)學(xué)雜志，2002，82(19)：1351-1354.

［7］孫正達(dá)，陳靖，等.羅格列酮對(duì)糖尿病大鼠腎保護(hù)機(jī)制的研究.Chin J Nephrol，2004，20(2)：109-103.

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