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        濃縮對(duì)禽流感(H9N1型)病毒液中滅活劑甲醛含量的影響

        2012-11-20 10:29:30劉紅娟齊魯動(dòng)物保健品有限公司山東濟(jì)南250100
        山東畜牧獸醫(yī) 2012年9期
        關(guān)鍵詞:中空分子量醋酸

        劉紅娟 (齊魯動(dòng)物保健品有限公司 山東 濟(jì)南 250100)

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        濃縮對(duì)禽流感(H9N1型)病毒液中滅活劑甲醛含量的影響

        劉紅娟 (齊魯動(dòng)物保健品有限公司 山東 濟(jì)南 250100)

        采用UV法測(cè)定了不同甲醛濃度滅活后禽流感(H9N1)病毒液濃縮前、中、后的甲醛含量。結(jié)果表明:濃縮對(duì)病毒液中甲醛含量影響不大。

        甲醛是生物制品研究與制造中最主要的滅活劑,適當(dāng)濃度的甲醛可使微生物喪失增殖力或毒性,保持抗原性和免疫原性。濃縮是疫苗生產(chǎn)中提高病毒含量通常采用的方法。尤其是多聯(lián)滅活疫苗的研制成功,更使得濃縮成為不可缺少的生產(chǎn)步驟。甲醛已經(jīng)被WHO定為致癌和致畸物質(zhì),必須對(duì)制品中甲醛含量進(jìn)行限制。《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2010年版)第三部中規(guī)定禽用滅活疫苗中甲醛含量應(yīng)不超過(guò)0.2%(含40%甲醛)。為了確定濃縮對(duì)病毒液中甲醛含量的影響,為生產(chǎn)提供可靠的技術(shù)支持,本文以禽流感(H9N1)病毒液為例,按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》(2010年版)第三部中甲醛殘留量測(cè)定方法對(duì)濃縮前后病毒液中甲醛含量進(jìn)行了測(cè)定。

        1 材料與方法

        1.1 試藥與儀器 甲醛(含量36.0%);醋酸、醋酸銨、乙酰丙酮、無(wú)水乙醇、UV2501分光光度計(jì)(島津公司)。中空纖維超濾膜截留分子量10KD(北京旭邦膜設(shè)備有限責(zé)任公司)。

        1.2 樣品 禽流感(H9N1)病毒液三批:20110203、20110204、20110205,分別加0.1%、0.2%、0.3%病毒液滅活后,用北京旭邦截留分子量為10KD的中空纖維超濾膜進(jìn)行4倍濃縮,取濃縮前、濃縮中、濃縮后、流出液前段、流出液中、流出液后共18個(gè)樣品。

        2 試驗(yàn)方法

        (1)試驗(yàn)原理:甲醛與乙酰丙酮及氨作用,生成黃色化合物二乙?;溥拎ず?,410nm下進(jìn)行分光光度比色定量。(2)供試品溶液:用5.0ml移液管取供試品5.0ml,置50ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得。

        對(duì)照品溶液:準(zhǔn)確稱(chēng)取含量為35.9%的甲醛溶液0.2786g置100ml容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得。(3)測(cè)定法:精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各0.5ml,分別加醋酸-醋酸銨緩沖液10ml,置60℃恒溫水浴15min,冷水冷卻5min,放置20min后,在410nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,按照下式計(jì)算:

        3 試驗(yàn)結(jié)果

        見(jiàn)附表。

        附表 H9N1病毒液中滅活劑 (%)

        批號(hào)濃縮前濃縮中濃縮后流出液前流出液中流出液后 201000160.110.130.120.140.110.12 201000170.190.210.220.210.230.20 201000180.300.320.310.290.310.31

        4 討論

        中空纖維超濾膜是超濾技術(shù)中最為成熟與先進(jìn)的一種技術(shù)??讖揭阅芙亓粑镔|(zhì)的分子量表達(dá),截留分子量可達(dá)幾千至幾十萬(wàn)。被過(guò)濾液在中空纖維外側(cè)或內(nèi)腔加壓流動(dòng),分別構(gòu)成外壓式與內(nèi)壓式。超濾是動(dòng)態(tài)過(guò)濾過(guò)程,被截留物質(zhì)可隨濃縮排除,不致堵塞膜表面,可長(zhǎng)期連續(xù)運(yùn)行。廣泛用于凈水、溶液分離和濃縮等領(lǐng)域。

        甲醛分子量為30,和水分子量相差不多,均屬于小分子物質(zhì),遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于10KD的截留分子量,和水分子一樣在溶液中呈隨機(jī)分布:一部分留在濃縮液中,一部分隨流出液排出。因此濃縮前后甲醛含量差異不大。

        5 結(jié)論

        濃縮前后病毒液中甲醛含量基本不變。濃縮不會(huì)造成病毒液中甲醛含量大幅上升,對(duì)于高倍濃縮疫苗或多聯(lián)苗的制備有很好的指導(dǎo)意義。

        [1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典編委會(huì). 中華人民共和國(guó)獸藥典[M]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010.

        (2012–05–24)

        S852.65

        A

        1007-1733(2012)09-0021-01

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