徐秀榮 陳宗靜 潘琦雯 黃迪海 張從敬 劉霞 張?jiān)佥x 張華 秦卓明③* （山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟(jì)南 250100 ②濟(jì)南市生物藥品工程技術(shù)中心 ③山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所 濟(jì)南）

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高效液相外標(biāo)法測(cè)定長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的效果分析

徐秀榮①②陳宗靜①潘琦雯①黃迪海①②張從敬①②劉霞①②張?jiān)佥x①②張華①②秦卓明①②③*（①山東省健牧生物藥業(yè)有限公司 濟(jì)南 250100 ②濟(jì)南市生物藥品工程技術(shù)中心 ③山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所 濟(jì)南）

本研究以Inertsil ODS-3C18為色譜柱，乙腈-0.025mol/L磷酸溶液(13:87)(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1)為流動(dòng)相，277nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，利用峰面積，建立外標(biāo)法定量檢測(cè)乳酸環(huán)丙沙星的含量。結(jié)果顯示：測(cè)得長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星的線(xiàn)性范圍為10~60μg/ml(r=0.9995)，平均回收率為99.43%，RSD為0.21%(n=9)。說(shuō)明高效液相外標(biāo)法操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。

乳酸環(huán)丙沙星 高效液相色譜 外標(biāo)法

乳酸環(huán)丙沙星是第三代喹諾酮類(lèi)抗菌藥物，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性、革蘭氏陰性菌均有良好的抗菌作用，抗菌譜廣，抗菌力強(qiáng)，已廣泛用于畜禽及小動(dòng)物的各種感染性疾病的治療。為進(jìn)一步提高藥用效果，結(jié)合藥物緩釋技術(shù)，成功研制出長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液。目的是促使乳酸環(huán)丙沙星緩慢地釋放入動(dòng)物體內(nèi)，確保血藥濃度“峰谷”在一定時(shí)期保持在有效濃度范圍之內(nèi)，且有效避免藥物短時(shí)間內(nèi)濃度過(guò)高，超過(guò)治療血藥濃度范圍，產(chǎn)生毒副作用，進(jìn)而達(dá)到毒副作用小、治療效果好、減少用藥次數(shù)，大大提高經(jīng)濟(jì)效益。

采用高效液相色譜法內(nèi)標(biāo)法測(cè)定乳酸環(huán)丙沙星注射液含量在農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版[1]和其他文獻(xiàn)[3]中已有明確規(guī)定，但此法在檢測(cè)中需要配置對(duì)照品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，且成本較高。本文在參照《中國(guó)藥典》2005年版二部[3]及其他文獻(xiàn)[4]的基礎(chǔ)上，建立了一種新的高效液相色譜法外標(biāo)法，只需配置對(duì)照品溶液，具有操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)。

1 儀器和試劑

（1）P1000高效液相色譜儀，SPD-UV100紫外檢測(cè)器，購(gòu)自美國(guó)熱電儀器集團(tuán)TSP公司。BP211D十萬(wàn)分之一電子天平購(gòu)自北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。（2）環(huán)丙沙星對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量為84.9%，批號(hào)為130451-200802，裝量為0.1g。緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液中試產(chǎn)品，規(guī)格為10ml：0.4g，批號(hào)為20111101、20111102和20111103；乳酸環(huán)丙沙星注射液，規(guī)格為10ml：0.2g，批號(hào)為20111101、20111102和20111 103；上述產(chǎn)品均由山東省健牧生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。乙腈為色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。其它試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 測(cè)定條件及方法

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-3C18柱；5μm，4.6×250mm。購(gòu)自美國(guó)熱電儀器集團(tuán)TSP公司。流動(dòng)相：0.025mol/L磷酸溶液-乙腈(87:13)(用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.0±0.1)，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm，流速為1.0ml/min，進(jìn)樣量：10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的配制 精密稱(chēng)取環(huán)丙沙星對(duì)照品20mg，置200ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密量取對(duì)照品溶液4.0ml，置10ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算，校正因子。

2.3 供試品溶液的制備和測(cè)定 精密量取樣品2.0ml(約相當(dāng)于環(huán)丙沙星80mg)，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液5.0ml，置100ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見(jiàn)圖1，環(huán)丙沙星保留時(shí)間是11.3min。

圖1 緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的HPLC色譜圖

3 結(jié)果

3.1 線(xiàn)性范圍 精密量取對(duì)照品溶液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，分別置10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μl注入液相色譜儀，記錄各濃度的色譜峰面積，以環(huán)丙沙星的峰面積為縱坐標(biāo)，環(huán)丙沙星濃度為橫坐標(biāo)，根據(jù)色譜結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(圖2)，并對(duì)峰面積進(jìn)行回歸，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程。環(huán)丙沙星濃度在10~60μg/ml呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，其線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)為：y=83091.7x+34799.4，r=0.9995 (n=6)。

圖2 緩釋長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

3.2 精密度試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別精密量取環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中10、20、30μg/ml三種濃度的對(duì)照品溶液，依法測(cè)定峰面積，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果證實(shí)方法精密度良好，RSD分別為0.6%，0.8%，0.9%，n=6。

3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密量取制備好的同一份供試品溶液分別在0、2、4、8和24h依法進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果峰面積基本不變，RSD為0.6%，n=5。

3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按供試品溶液制備方法制備同一批號(hào)環(huán)丙沙星供試品溶液5份，依法測(cè)定，記錄峰面積，結(jié)果證明重復(fù)性良好，RSD為0.9%，n=5。

3.5 回收率試驗(yàn) 用已知含量的原料按處方配制成樣品含環(huán)丙沙星相當(dāng)于標(biāo)示量的80%，100%，120%，按2測(cè)定條件及方法項(xiàng)下的方法制備對(duì)照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，以峰面積計(jì)算含量，計(jì)算得平均回收率為99.43%，RSD為0.21%，n=9。

回收率試驗(yàn)的結(jié)果可以看出此方法測(cè)定長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液中的環(huán)丙沙星是可行的，其所得數(shù)據(jù)是可靠的，該方法定量準(zhǔn)確，回收率高。

3.6 樣品測(cè)定 精密量取不同批次的長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液及普通乳酸環(huán)丙沙星注射液樣品，按上述供試品制備方法制得供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算；與農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中乳酸環(huán)丙沙星注射液的內(nèi)標(biāo)法對(duì)比，經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，二者沒(méi)有差異。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)附表。

附表 樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=2) (%)

產(chǎn)品長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液普通乳酸環(huán)丙沙星注射液 批號(hào)201010012010100220101003201010012010100220101003 外標(biāo)法99.299.599.798.699.298.3 內(nèi)標(biāo)法99.199.3100.198.799.198.5 相對(duì)偏差0.10.10.20.10.10.1

4 小結(jié)與討論

（1）本文對(duì)不同批次的長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液采用高效液相色譜法外標(biāo)法對(duì)環(huán)丙沙星的含量進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)對(duì)線(xiàn)性范圍的考察、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)對(duì)測(cè)定方法經(jīng)過(guò)了驗(yàn)證。結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確，符合測(cè)試要求，可用于長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液中環(huán)丙沙星的含量測(cè)定。又用普通乳酸環(huán)丙沙星注射液作了相應(yīng)的對(duì)比，得出高效液相色譜法外標(biāo)法同樣適用于普通劑型。（2）乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量測(cè)定在農(nóng)業(yè)部《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版[1]及其他文獻(xiàn)[3]中均采用高效液相色譜法內(nèi)標(biāo)法，此法在檢測(cè)中需要配置對(duì)照品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液，浪費(fèi)試劑、操作繁瑣。而高效液相色譜法外標(biāo)法，只需配置對(duì)照品溶液，其操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。（3）本文的色譜條件同樣適用于長(zhǎng)效乳酸環(huán)丙沙星注射液的有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

[1] 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部．獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2003年版[S]. 2003: 75.

[2] 中華人民共和國(guó)藥典2005年版二部[S]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 附錄28.

[3] 羅亞虹, 伍軍, 盧丹等. 高效液相色譜法測(cè)定乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量[J]. 中國(guó)藥事, 2002, 16(2): 106-107.

[4] 鐘玉蓮, 楊穎, 劉麗芳等. 反相高效液相色譜法測(cè)定乳酸環(huán)丙沙星注射液的含量[J]. 中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn), 2000, 1(1): 42-43.

（2012–05–18）

S859.79+7

A

1007-1733(2012)09-0014-02