劉 微 秦海翔 黃曉東 常 影 范紅艷 王艷春 顧饒勝 任 曠

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥理教研室，吉林 吉林 132012)

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)為杜仲科、杜仲屬植物，又名思仙、思仲、絲綿樹、木棉等〔1〕，常以其樹皮干燥后入藥，為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，具有降低血壓、血脂、抗疲勞、抗老化及安胎等功效〔2，3〕。杜仲木質(zhì)素為杜仲的有效成分之一，具有較顯著的降低血壓的作用〔4〕。本實(shí)驗(yàn)觀察杜仲木質(zhì)素對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHRsp)腦卒中的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SHRsp由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，120只，雌雄各半，體重(160±20)g。雌雄分籠喂養(yǎng)，每籠10只，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物與試劑 杜仲木質(zhì)素提取物，吉林大學(xué)中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供;陽性藥物：尼莫地平注射液，德國(guó)拜耳公司生產(chǎn)(批號(hào)：BH20110495);陰性對(duì)照：5%碳酸氫鈉注射液，河南雙鶴華利藥業(yè)生產(chǎn)(批號(hào)：H41021681);NaCl，安徽華源生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：11092302)。

1.1.3 儀器設(shè)備 BP-600A型全自動(dòng)大鼠無創(chuàng)血壓測(cè)量?jī)x，成都泰盟有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 腦卒中模型制造方法 7周齡SHRsp自由飲用高濃度鹽水(0.9%氯化鈉溶液)連續(xù)2個(gè)月后給予1%氯化鈉溶液，大鼠陸續(xù)出現(xiàn)輕重不等的腦卒中癥狀。腦卒中發(fā)作判斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)單肢或前雙肢或全身抽動(dòng);(2)出現(xiàn)偏癱或全身癱瘓，腹部貼地不能站立;(3)較重者為全身細(xì)小震顫，最后爬伏，軟癱，甚至死亡。以上各項(xiàng)中有些動(dòng)物伴有激惹現(xiàn)象(跳或躥)，凡出現(xiàn)以上一項(xiàng)癥狀者，評(píng)定為腦卒中發(fā)作〔5〕。

1.2.2 分組及給藥 先隨機(jī)取出20只大鼠，作為空白組(5%碳酸氫鈉)，喂給普通飲用水。對(duì)其他大鼠進(jìn)行造模，造模完成后，將動(dòng)物按隨機(jī)分組原則分成5組：模型組(5%碳酸氫鈉)、杜仲木質(zhì)素低(1 mg/kg)、中(2 mg/kg)、高(3 mg/kg)劑量組、陽性藥尼莫地平組(900 μg/kg)，每組20只，其中空白組喂給普通飲用水，其他各組喂給1%的生理鹽水。

用5%碳酸氫鈉溶液配制成相應(yīng)的濃度，使給藥劑量均為0.2 ml/100 g大鼠。每天給藥一次，肌肉注射。模型組和空白組大鼠肌肉注射同等劑量的5%碳酸氫鈉溶液。

1.2.3 觀察指標(biāo)

1.2.3.1 腦卒中行為學(xué)評(píng)分 自開始給藥起，每隔2 d觀察大鼠行為學(xué)變化，對(duì)每只大鼠進(jìn)行腦卒中行為學(xué)評(píng)分，評(píng)分參考日本評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)〔6〕。

1.2.3.2 動(dòng)脈收縮壓(SAP)、心率(HR)開始給藥前及給藥42 d后用全自動(dòng)大鼠無創(chuàng)血壓測(cè)量?jī)x測(cè)定所有大鼠SAP、HR各一次。

1.2.3.3 存活時(shí)間及死亡率 每天對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行觀測(cè)，如出現(xiàn)死亡，記錄其組號(hào)、編號(hào)、死亡時(shí)間。比較觀察各組的存活時(shí)間和死亡率的差別。

1.2.3.4 體重變化 記錄造模前、給藥前及給藥1個(gè)月后所有大鼠的體重。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以s表示，采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 腦卒中行為學(xué)評(píng)分結(jié)果 5組喂給高濃度鹽水的SHRsp不斷發(fā)生腦卒中，表現(xiàn)為激惹、陣發(fā)性抽搐、癱瘓、頭大、進(jìn)食少、尿失禁、豎毛、消瘦等癥狀?？瞻捉M腦卒中行為學(xué)評(píng)分顯著低于模型組(P＜0.01)，表明腦卒中模型建立成功。從給藥開始，杜仲木質(zhì)素給藥組行為學(xué)評(píng)分呈逐漸下降趨勢(shì)，其中以中、高劑量組下降趨勢(shì)尤為明顯(P＜0.05)，說明這兩個(gè)劑量均可顯著改善腦卒中神經(jīng)行為學(xué)功能，低劑量組與模型組比較也有一定抑制趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

2.2 SAP和HR的變化 隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，SHRSR血壓均有所上升。給藥42 d后模型組大鼠的SAP與空白組比較有顯著差異(P＜0.01)。中劑量和高劑量組給藥后SAP有一定的降低趨勢(shì)，與模型組比較具有顯著差異(P＜0.05)。尼莫地平組給藥后有較強(qiáng)的降低血壓的趨勢(shì)，與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)。給藥前后，大鼠HR均無明顯變化。見表2。

表1 各組SHRsp腦卒中行為學(xué)評(píng)分( s ，n=20)

表1 各組SHRsp腦卒中行為學(xué)評(píng)分( s ，n=20)

與模型組比較：1)P ＜0.05，2)P ＜0.01;下表同

6±0.24低劑量組 2.53±0.44 2.66±0.39 2.68±0.42 2.72±0.41 2.78±0.10中劑量組 2.54±0.37 2.53±0.47 2.57±0.51 2.44±0.0.281)2.66±0.341)高劑量組 2.58±0.18 2.71±0.24 2.49±0.50 2.15±0.501)1.85±0.611)陽性藥組 2.49±0.39 2.35±0.51 2.26±0.251)1.83±0.382)1.47±0.472)空白組 0.41±0.212)0.57±0.182)0.91±0.122)1.03±0.182)1.37±0.201)1～10 d 11～21 d 22～31 d 32～42 d模型組 2.49±0.48 2.58±0.55 2.79±0.36 2.86±0.27 2.9組別 給藥前

表2 給藥前后大鼠SAP和HR變化(n=20，s)

表2 給藥前后大鼠SAP和HR變化(n=20，s)

組別 存活動(dòng)物SAP給藥前 42 d后HR給藥前 42 d后14 26.60±1.25 31.85±1.93 356±51 354±69低劑量組 15 26.66±1.62 29.79±0.65 384±31 369±57中劑量組 17 25.61±2.34 27.83±1.921) 354±51 364±52高劑量組 18 26.85±2.51 27.07±2.741) 373±34 388±49尼莫地平組 20 25.18±2.17 26.35±2.262) 366±33 367±32空白組 20 23.54±1.212) 25.63±2.152)模型組364±32 354±377

2.3 存活時(shí)間和死亡率結(jié)果 與模型組比較，中、高劑量和尼莫地平可以明顯延長(zhǎng)動(dòng)物的平均存活時(shí)間，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。尼莫地平對(duì)大鼠死亡率也有明顯降低作用，低、中、高劑量對(duì)大鼠死亡率呈梯度降低。見表3。

表3 大鼠死亡情況和死亡率( s ，n=20)

表3 大鼠死亡情況和死亡率( s ，n=20)

)〕模型組 37.2±12.3 6(30)組別 平均存活時(shí)間(d)死亡〔n(%低劑量組 37.8±14.9 5(25)中劑量組 39.7±8.3 3(15)高劑量組 40.3±2.0 2(10)尼莫地平 42.0±10.7 0(0)空白組 42.0±0.0 0(0)

2.4 體重變化 造模前，各組動(dòng)物體重?zé)o組間差異。至給藥前，大鼠體重均有所增高，但組間仍無差異。模型組和低劑量組給藥一段時(shí)間后，平均體重基本維持不變。其余4組動(dòng)物體重都略有升高。杜仲木質(zhì)素中、高劑量組、尼莫地平組及空白組與模型組比較差異顯著(P＜0.05;P＜0.01)。見表4。

表4 存活大鼠體重變化( s ，n=20，g)

表4 存活大鼠體重變化( s ，n=20，g)

14 162.4±14.7 209.6±28.9 207.7±19.9低劑量組 15 162.6±15.4 208.0±47.2 210.5±38.0中劑量組 17 159.2±16.6 204.2±31.6 227.4±34.61)高劑量組 18 161.5±18.2 205.0±35.1 236.8±37.71)尼莫地平 20 164.4±12.6 203.4±31.2 248.6±28.41)空白組 20 158.5±18.5 207.8±22.3 257.3±22.42)個(gè)月模型組組別 存活動(dòng)物 造模前 給藥前 給藥1

3 討論

腦卒中的發(fā)病原因與血壓的驟然波動(dòng)有關(guān)。隨著我國(guó)逐漸進(jìn)入老齡化社會(huì)，以高血壓為主的心血管疾病呈逐年上升態(tài)勢(shì)，腦卒中的發(fā)病率也在逐年上升。高血壓是導(dǎo)致腦卒中發(fā)生的首要因素，收縮壓和舒張壓均與腦卒中呈正相關(guān)。

SHRsp為遺傳性高血壓動(dòng)物模型，100%發(fā)生高血壓，持續(xù)給予高濃度鹽水會(huì)導(dǎo)致高血壓并發(fā)癥，80%會(huì)發(fā)生腦卒中，常用于心腦血管病藥物的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。該動(dòng)物高血壓癥狀嚴(yán)重，腦內(nèi)血流速度低，小動(dòng)脈壞死，血管壁損傷嚴(yán)重，產(chǎn)生血栓或腦出血而導(dǎo)致腦卒中。另外，SHRsp動(dòng)物模型腦卒中發(fā)作后，神經(jīng)功能也與局部或全腦性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ陀忻黠@差別〔5〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，杜仲木質(zhì)素對(duì)SHRsp腦卒中具有一定的控制和治療作用，并且這種作用呈劑量依賴性。相關(guān)研究表明，杜仲木質(zhì)素可能通過影響Ka+通道活性，使動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜電位去極化或超極化，發(fā)揮舒張血管的作用，從而降低血壓，實(shí)現(xiàn)對(duì)腦卒中的治療作用〔7，8〕。

1 劉 慧，劉仲華，張 盛.杜仲中活性成分的研究進(jìn)展〔J〕.農(nóng)產(chǎn)品加工學(xué)刊，2011;8：12-8.

2 徐珞珊，徐國(guó)均.中國(guó)藥材學(xué)〔M〕.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1996.

3 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(2010版)〔M〕.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

4 羅麗芳，吳衛(wèi)華，歐陽冬生，等.杜仲的降壓成分及降壓機(jī)制〔J〕.中草藥，2006;37(1)：150-2.

5 張麗英，馮亦璞.丁基苯酞對(duì)腦卒中型自發(fā)性高血壓大鼠壽命及卒中后神經(jīng)癥狀的影響〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1996;31(1)：18-23.

6 Nagaoka A，Kakihana M，F(xiàn)ujiwara K.Effects of idebenone on neurological dificitis following cerebrovascular lesions in SHRsp stroke-prone spontaneously hypertensive rats〔J〕.Arch Gerontol Geriatr，1989;8(3)：203-12.

7 宋 研，許激揚(yáng).杜仲木脂素化合物降壓藥效學(xué)研究與機(jī)制初探〔J〕. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2006;24(10)：1934-6.

8 許激揚(yáng)，宋 妍，季 暉.杜仲木脂素化合物舒張血管作用機(jī)制〔J〕.中國(guó)中藥雜志，2006;31(23)：1976-8.