陳景彥 陳炳宏 張樹峰 范洪亮 于海榮 任立群 梅愛敏 景文莉

(承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

眾所周知，長期高血壓可導(dǎo)致心、腦、腎靶器官的損害。腎臟既是血壓調(diào)節(jié)的重要器官，同時(shí)又是高血壓損害的主要靶器官之一。高血壓是腎損害的促進(jìn)因素之一〔1〕。由于在腎損害的早期，患者沒有明顯的癥狀，即使發(fā)展到相當(dāng)嚴(yán)重的階段，癥狀也不明顯，單純用血清肌酐和尿素氮來評(píng)估高血壓患者的腎功能易延遲診斷〔2〕。因此，適當(dāng)?shù)目刂蒲獕汉屠妹舾械臋z測(cè)手段檢測(cè)腎功能指標(biāo)是防治腎損害的主要措施之一。本研究旨在觀察澤瀉湯加味方對(duì)高鹽高血壓大鼠的降壓療效及腎功能的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 3周齡雄性Wistar大鼠180只體重為50～60 g，SPF級(jí)，由天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(津)2009-001。

1.2 主要儀器及試劑 BP-6動(dòng)物套尾無創(chuàng)血壓儀(成都泰盟科技有限公司);日立7180全自動(dòng)生化分析儀;FT-630G放免儀(北京核儀器廠);尿β2-MG放射免疫分析藥盒(北京原子高科股份有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物 澤瀉湯加味方：澤瀉21 g、白術(shù)9 g、澤蘭15 g、石菖蒲15 g(購自承德醫(yī)藥集團(tuán)責(zé)任有限公司，批號(hào)0712002，一等);纈沙坦膠囊(商品名：代文，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)X0796)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 高鹽高血壓動(dòng)物模型的制備 在文獻(xiàn)報(bào)道〔3〕的基礎(chǔ)上，我們對(duì)其造模方法加以改進(jìn)，并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)造模結(jié)果，高鹽造成高血壓的周期長，并且成模率低，故用3周齡雄性Wistar大鼠180只，選取尿蛋白和尿紅細(xì)胞均為陰性者作為觀察對(duì)象，預(yù)留10只作為正常對(duì)照組，其余170只通過連續(xù)22 w，8%高鹽飼料自然飼養(yǎng)，并從喂養(yǎng)第8周開始每周一次進(jìn)行血壓測(cè)量。在喂養(yǎng)第18～22周時(shí)進(jìn)行血壓達(dá)標(biāo)(SBP＞130 mmHg)篩選(用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)清醒狀態(tài)下大鼠的血壓)。模型篩選方法：①從血壓已達(dá)標(biāo)的大鼠中隨機(jī)抽出10只取腎組織行病理切片觀察，尚未發(fā)現(xiàn)病理改變者;②在大鼠分組前，3 d測(cè)1次血壓，連測(cè)3次，每次每只大鼠測(cè)3遍，血壓均＞130 mmHg者為造模成功。最后選用40只成模大鼠行8 w干預(yù)措施。

1.4.2 分組方法 從造模成功的大鼠中篩選40只，根據(jù)血壓值隨機(jī)分為模型組、纈沙坦組、澤瀉湯加味方高劑量組、澤瀉湯加味方中劑量組，每組各10只，加上預(yù)留的10只正常組，共5組。

1.4.3 給藥方法 正常組：普通飼料，灌蒸餾水;模型組：灌蒸餾水;纈沙坦組：14.4 mg·kg-1·d－1(研磨，蒸餾水溶解;成人劑量的10倍);澤瀉湯加味方高劑量組：16.2 g·kg－1·d－1(成人劑量的15倍);澤瀉湯加味方中劑量組：10.8 g·kg－1·d－1(成人劑量的10倍)。所有實(shí)驗(yàn)大鼠均灌胃8 w;除正常對(duì)照組外，其余各組大鼠繼續(xù)8%高鹽飼料喂養(yǎng)8 w。

1.4.4 血壓測(cè)量 采用無創(chuàng)性套尾法測(cè)定清醒大鼠收縮壓(SBP)，每次測(cè)量時(shí)記錄3次，取其平均值。給藥前、2、4、8 w末各測(cè)一次血壓，每次服藥后2 h開始測(cè)量。

1.4.5 血中指標(biāo)檢測(cè) 治療8 w后，用10%水合氯醛腹腔內(nèi)給藥麻醉，目內(nèi)眥取血約 3 ml，放入肝素鈉管中，離心(4 000 r/min，5 min)取血漿，放置 －80℃冰箱備用。用日立7180全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)BUN、Scr。

1.4.6 尿中指標(biāo)檢測(cè) 在治療8 w后，將每只大鼠分別置于代謝籠中，收集24 h尿量(自由飲水、禁食)。24 h尿ALB定量用全自動(dòng)生化分析儀;尿β2-MG用放射免疫法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)計(jì)量資料用s表示，多組間比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組實(shí)驗(yàn)大鼠不同時(shí)間段收縮壓的變化 表1示，給藥前，與正常組比較，模型組、澤瀉湯加味方高、中劑量組和纈沙坦組大鼠的收縮壓明顯增高(P＜0.01)。2、4和8 w末，與模型組比較，正常組、纈沙坦組、澤瀉湯加味方高、中劑量組大鼠的收縮壓明顯降低(P＜0.01)。

2.2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)8 w后BUN、Scr的變化 表2示，與正常組比較，纈沙坦組、澤瀉湯加味方高、中劑量組、模型組血BUN升高(P＜0.01)。與正常組比較，纈沙坦組、澤瀉湯加味方高、中劑量組、模型組Scr無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)各時(shí)間段大鼠收縮壓的變化(s，mmHg，n=10)

表1 實(shí)驗(yàn)各時(shí)間段大鼠收縮壓的變化(s，mmHg，n=10)

與正常組比較：1)P＜0.01;與模型組比較：2)P＜0.01

2 w 4 w 8 w正常組 118.87±10.00 118.87±10.002) 114.87±9.702) 111.60±8.512)組別 給藥前模型組 145.94±11.531) 151.43±8.67 145.57±12.11 142.33±9.49纈沙坦組 145.78±9.871) 123.57±5.992) 131.13±10.712) 122.40±4.602)澤瀉湯加味方高劑量組 144.64±7.421) 126.80±7.912) 122.70±11.192) 126.40±14.802)澤瀉湯加味方中劑量組 144.93±6.611) 135.86±6.882) 126.87±6.742) 124.20±7.682)

表2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，BUN、Scr的變化( s ，n=10)

表2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后，BUN、Scr的變化( s ，n=10)

與正常組比較：1)P＜0.01

組別 BUN(mmol/L)Scr(μmol/L)7.614 0±1.129 28 36.800 0±10.379 47模型組 12.407 0±1.718 761) 35.300 0±5.271 52纈沙坦組 11.972 0±3.108 551) 32.600 0±7.574 81澤瀉湯加味方高劑量組11.989 0±2.465 441) 32.000 0±4.737 56澤瀉湯加味方中劑量組11.754 0±1.692 441)正常組35.000 0±6.599 66

表3 實(shí)驗(yàn)各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后尿ALB、尿 β2-MG的變化( s ，n=10)

表3 實(shí)驗(yàn)各組大鼠相應(yīng)干預(yù)8 w后尿ALB、尿 β2-MG的變化( s ，n=10)

與模型組比較：1)P ＜0.01，2)P ＜0.05

組別 24 h ALB(g/24 h)β2-MG(mg/L)正常組 0.101±0.071) 0.116 ±0.1032)模型組 0.272±0.08 0.226±0.164纈沙坦組 0.192±0.08 0.153±0.113澤瀉湯加味方高劑量組 0.145±0.111) 0.154±0.095澤瀉湯加味方中劑量組 0.178±0.112) 0.119±0.1042)

2.3 各組實(shí)驗(yàn)大鼠干預(yù)8 w后尿ALB、尿β2-MG的變化 表3示，與模型組比，澤瀉湯加味方高劑量組的24 h尿ALB明顯降低(P＜0.01);澤瀉湯加味方中劑量組的尿ALB降低(P＜0.05)。與模型組比，正常組和澤瀉湯加味方中劑量組的尿β2-MG降低(P＜0.05)。

3 討論

中醫(yī)學(xué)雖無高血壓腎損害這一病名，但按其不同的病理階段和主要臨床表現(xiàn)大致屬于“眩暈”、“頭痛”、“腰痛”、“水腫”、“尿濁”等范疇。我們依據(jù)中醫(yī)“久病不愈，非痰則瘀”及“水能病血，血能病水”的理論，提出了具有“利水為主，利水活血化痰”之功的澤瀉湯加味方。澤瀉湯加味方由《金匱要略》澤瀉湯加澤蘭、石菖蒲組成。澤瀉：甘淡，寒。歸腎、膀胱經(jīng);能利水滲濕，清濕熱?，F(xiàn)代藥理研究認(rèn)為，澤瀉有利尿作用，能促使尿素和氯化物的排泄，還可降血壓。白術(shù)：苦、甘，溫。歸脾、胃經(jīng);能健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎?！稖罕静荨氛J(rèn)為：白術(shù)入少陰經(jīng)，利腰臍間血，通水道，上而皮毛，中而心胃，下而腰臍，在氣主氣，在血主血。澤蘭：苦、辛，微溫。歸肝、脾經(jīng);能活血祛瘀，利水消腫。曹賽霞等〔4〕研究認(rèn)為，適宜劑量的澤蘭對(duì)大鼠慢性腎衰竭有改善作用;其機(jī)制與澤蘭糾正腎衰竭時(shí)的貧血、低鈣高磷現(xiàn)象、氮質(zhì)血癥，減少腫瘤壞死因子對(duì)腎臟的纖維化損害有關(guān)。石菖蒲：辛、溫。歸心、胃經(jīng);能祛痰開竅，化濕開胃，寧神益智。研究證明，石菖蒲對(duì)小鼠具有抗氧化作用和提高機(jī)體的免疫功能〔5〕。

研究認(rèn)為，以血壓＜120/80 mmHg為參照，血壓為130～139/85～89 mmHg、140～159/90～99 mmHg時(shí)的終末期腎臟病變相對(duì)危險(xiǎn)度分別為1.9和11.2，而血壓為210/120 mmHg時(shí)其危險(xiǎn)度高達(dá)22.1〔6〕。高血壓是腎損害的促進(jìn)因素之一，適當(dāng)控制血壓是延緩腎臟病進(jìn)展的重要措施之一〔1〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：澤瀉湯加味方高劑量組和纈沙坦組降壓療效相當(dāng);在某種程度上澤瀉湯加味方在降壓方面存在一定的量效關(guān)系。

高血壓腎損害的早期也就是良性小動(dòng)脈硬化出現(xiàn)臨床癥狀前，常規(guī)的血液及尿液檢查都正常，但用敏感的檢查手段仍能發(fā)現(xiàn)異常，如尿ALB、尿β2-MG的排出增加均可視為原發(fā)性高血壓早期腎損害的存在〔7〕。尿ALB是反映腎小球功能的主要指標(biāo)，正常情況下腎小球?yàn)V過膜存在電荷選擇性屏障，絕大部分尿ALB不能通過濾過膜。當(dāng)尿ALB含量升高時(shí)，就標(biāo)志著腎小球?yàn)V過膜電荷選擇性屏障損傷〔8〕。β2-MG是低分子蛋白，由腎小球自由濾過，99.9%以上再由近端腎小管重吸收，尿中排出甚少。尿β2-MG是目前公認(rèn)的測(cè)定腎小球?yàn)V過率和近端腎小管重吸收功能的敏感指標(biāo)〔8〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高鹽飲食可導(dǎo)致大鼠血BUN升高;澤瀉湯加味方在高鹽高血壓大鼠早期腎功能的損害方面具有保護(hù)作用。

綜述所述，澤瀉湯加味方可以降低高鹽高血壓大鼠的血壓，并且其對(duì)腎功能具有一定的保護(hù)作用。另外，關(guān)于澤瀉湯加味方對(duì)高鹽高血壓大鼠的降壓起效時(shí)間和最佳降壓時(shí)間及血壓值與腎功能指標(biāo)的相關(guān)性分析有待研究。

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7 王海燕.腎臟病學(xué)〔M〕.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1995：1150-1.

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