丁麗娜劉亮陳東林高玉瓊劉建華曾富佳

1．遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，貴州 遵義 563002;2．貴州省生物基地，貴州 貴陽 550002

短柄南蛇藤不同部位的總黃酮含量測定

丁麗娜1劉亮1陳東林1高玉瓊2劉建華2曾富佳1

1．遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，貴州 遵義 563002;2．貴州省生物基地，貴州 貴陽 550002

目的:建立短柄南蛇藤總黃酮含量測定的方法，對(duì)短柄南蛇藤各部位總黃酮含量進(jìn)行對(duì)比研究。方法:以蘆丁為對(duì)照品，超聲波提取和三氯化鋁法顯色，采用紫外分光光度法在417nm處測定短柄南蛇藤不同部位的總黃酮含量。結(jié)果:蘆丁的線性范圍為2.40～25.16μg/mL，回歸方程A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(n=6);平均加樣回收率為101.2%，RSD=2.22%。不同部位總黃酮含量由高至低依次為:種子＞葉＞根皮＞果殼＞假種皮＞莖。結(jié)論:該文首次測定短柄南蛇藤總黃酮含量，并對(duì)不同部位總黃酮含量進(jìn)行對(duì)比研究。

短柄南蛇藤;總黃酮;含量測定;紫外分光光度法

短柄南蛇藤(Celastrus rosthornianus Loes)為衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物，分布于我國大部分地區(qū)，其根、莖葉、果實(shí)等均可入藥，根及莖葉可治療治風(fēng)濕疼痛，跌打損傷，疝氣痛，瘡瘍腫毒，帶狀皰疹，濕疹，毒蛇咬傷;果實(shí)可寧心安神，主治失眠多夢(mèng)［1］。該植物主要有倍半萜、三萜及其衍生物、生物堿、黃酮類化合物等，黃酮化合物主要存在于南蛇藤屬植物的葉、翅中，是抗炎、抗氧化活性成分［2－6］。目前關(guān)于短柄南蛇藤總黃酮含量測定未見報(bào)道。根據(jù)文獻(xiàn)資料，短柄南蛇藤分不同的部位入藥，其不同部位的功效、劑量、毒性都有一定的差別。本文采用紫外分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品對(duì)短柄南蛇藤中總黃酮的含量測定進(jìn)行了方法學(xué)的考察，并對(duì)不同部位的總黃酮含量進(jìn)行對(duì)比研究，為短柄南蛇藤的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考數(shù)據(jù)，充分發(fā)揮該植物的藥用潛力。

1 儀器和試藥

SYFM－8Ⅱ型微粉碎機(jī)(濟(jì)南松岳機(jī)器有限責(zé)任公司);202－00臺(tái)式電熱恒溫干燥箱(中國天津泰斯特儀器有限公司);AL－204型電子天平(上海梅特勒－托得多儀器有限公司);KQ－500DE型醫(yī)用超聲波清洗機(jī)(昆山超聲儀器有限公司);TU－1810紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

短柄南蛇藤(采自貴州鎮(zhèn)遠(yuǎn)地區(qū)，經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院孫慶文老師鑒定為衛(wèi)矛科南蛇藤屬植物短柄南蛇藤Celastrus rosthornianus Loes)。樣品按不同部位分離，得到根皮、莖、葉、果殼、假種皮、種子六個(gè)部位，自然晾干，粉碎過80目篩，得到短柄南蛇藤不同部位的粉末，干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩ＬJ丁對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，100080－200306)，實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑均為國產(chǎn)分析純?cè)噭?，重蒸水為本?shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

分別精密稱取短柄南蛇藤不同部位的干燥粉末2g，置于錐形瓶中，加入30mL60%乙醇溶液，浸潤后，超聲提取60分鐘，過濾，濾液置100mL容量瓶中，用60%的乙醇定容，搖勻，得供試品溶液，備用。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取在105℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.0150g于50mL容量瓶中，用30%乙醇溶解定容至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液(每1mL含蘆丁0.3mg)。

2.3 檢測波長的選擇

分別精密量取供試品溶液、對(duì)照品溶液各5mL分別置于25mL容量瓶中，加入1ml 0.5mol/L的三氯化鋁溶液，搖勻，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液定容，搖勻，超聲處理5min。在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描吸收曲線(以不加黃酮樣品的試劑空白做參比)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液、供試品溶液顯色后都在417nm處有最大吸收，故以417nm波長為測定波長。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［7］

分別精密量取0.3mg/mL蘆丁對(duì)照品溶液0.2mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL于25mL容量瓶中，分別加入1mL0.5mol/L的AlCl3溶液，搖勻，放置15min，用PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液定容，搖勻，超聲振蕩5min后以PH=5.8的NaAc－HAc緩沖溶液為參比，于417nm處測定吸光度。結(jié)果如圖1，蘆丁回歸方程為A=0.0263C+0.0384，r=0.9996(其中C為蘆丁濃度μg/mL;A為吸光度)，在2.40～25.16μg/mL濃度范圍內(nèi)呈線性。

圖1 三氯化鋁顯色后蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液5mL，按“2.4”項(xiàng)下操作測定吸光度，每隔5分鐘測一次，共6次，RSD為1.61%，在30min內(nèi)樣品溶液的穩(wěn)定性較好，時(shí)間延長，樣品吸收度下降較多，故選擇測定時(shí)間在30min以內(nèi)。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密量取樣品液5mL6份于25mL容量瓶中，按“2.4”項(xiàng)下操作測定吸光度，總黃酮含量RSD為1.21%，表明該法的精密度較好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同批果殼粉末2.0g，平行6份，按照“2.1”項(xiàng)下制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下操作測定吸光度，總黃酮含量RSD為2.35%，證明該方法的重現(xiàn)性較好。

2.8 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

精密稱取短柄南蛇藤果殼粉末2.0g，平行9份，按“2.1”項(xiàng)下處理，精密量取5mL的樣品溶液，分別加入新配置不同量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(0.3mg/mL)(每個(gè)加標(biāo)量級(jí)別3個(gè)平行樣)，搖勻，按“2.4”項(xiàng)下操作測定吸光度，總黃酮含量平均回收率為101.2%，RSD為2.22%，測得結(jié)果均在95%～105%之間，說明總黃酮的提取和檢測方法可行。

表1 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品的含量測定

按“2.4”項(xiàng)下對(duì)“2.1”項(xiàng)下制備的各部位供試品溶液進(jìn)行測定，計(jì)算總黃酮含量，結(jié)果見表2。不同部位總黃酮含量由高至低依次為:種子＞葉＞根皮＞果殼＞種皮＞莖。

表2 不同部位總黃酮含量測定結(jié)果(mg/g，X=∑Xi/n，n=3)

3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)以蘆丁為對(duì)照品，采用超聲波提取和三氯化鋁法顯色，對(duì)短柄南蛇藤中總黃酮的含量測定進(jìn)行了方法學(xué)考察，實(shí)驗(yàn)過程中嚴(yán)格控制時(shí)間，顯色后30min內(nèi)測定。本法操作簡單，精密度高，重復(fù)性和回收率效果較好，測得的總黃酮含量也較為合理，為短柄南蛇藤的質(zhì)量控制提供了新的有效手段。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，短柄南蛇藤六個(gè)不同部位所含的總黃酮不同，種子中的總黃酮含量最高，其次是葉、根皮、果殼、種皮，莖中含量較少，為該藥材的深度開發(fā)和利用提供了參考依據(jù)。

［1］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草編委會(huì)》．中華本草［M］．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999，5:175～176．

［2］ Kui－wu Wang，Cui－rong Sun，Xiao－dan Wu．Novel bioactive dammarane caffeoyl esters from Celastrus rosthornianus［J］．Planta Med，2006 Mar，72(4):370－2．

［3］ 張艦，劉延慶．南蛇藤屬植物的化學(xué)成分與藥理作用［J］．國外醫(yī)藥(植物藥分冊(cè))，2005，20(5):197－199．

［4］ Kui－wu Wang．A new fatty acid ester of triterpenoid from Celastrus rosthornianus with anti－tumor activitives［J］．Nat Prod Res，2007 Jun，21(7):669－74．

［5］ Kui－wu Wang．A new tritepenoidal ester from Celastrus rosthornianus［J］．Fitoterapia，2008，2:9．

［6］ 高玉瓊，丁麗娜，趙德剛等．短柄南蛇藤葉微粉與普通粉揮發(fā)油化學(xué)組成的對(duì)比研究［J］．中山大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2009，(48)2:45－47．［7］陳叢瑾，黃克瀛，李德良等．AlCl3顯色分光光度法測定香椿葉中總黃酮［J］．分析實(shí)驗(yàn)室，2006，25(12):91－94．

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0056－02

丁麗娜(1981)，女，漢族，碩士學(xué)位，主要從事天然藥物化學(xué)成分及質(zhì)量研究。

曾富佳(1986－)，女，漢族，碩士學(xué)位，主要從事天然藥物生物活性研究。

2012.05.18)