阿依努爾·阿木提 司馬義江·阿布都熱西提

新疆喀什地區(qū)藥品檢驗所，新疆 喀什 844000

HPLC法測定維吾爾藥制劑清澀比黑馬爾江散中沒食子酸的含量

阿依努爾·阿木提 司馬義江·阿布都熱西提

新疆喀什地區(qū)藥品檢驗所，新疆 喀什 844000

目的:高效液相色譜法測定清澀比黑馬爾江散中沒食子酸的含量。方法:甲醇一0.025%磷酸溶液(4:96);流速lmL/min;檢測波長270 nm柱溫:25℃;進樣量:l0μL;分析方法:外標法。結(jié)果:沒食子酸在10.6～106.0μg范圍內(nèi)線性良好(r=0.9996)，方法精密度為RSD為0.42%(n=5)，平均回收率為99.0%，RSD為1.3%(n=6)。結(jié)論:該方法簡便、準確、測得結(jié)果穩(wěn)定重現(xiàn)性好，可作為該制劑中沒食子酸的含量測定方法。

HPLC;沒食子酸;清澀比黑馬爾江散

清澀比黑馬爾江散由新疆維吾爾族習用藥材歐菝葜跟、馬錢子、沒食子、黑種草籽、珊瑚、芫荽子等8味藥材組成，屬部頒標準一維吾爾藥分冊收錄品種，具有清楚異常粘液質(zhì)，調(diào)節(jié)鼻腔氣質(zhì)，清腔通氣，消炎止痛，收劍固澀之功效。臨床上用于咽喉腫痛、鼻塞、流涕、流血不止、瘙癢等的治療。部頒標準僅采用定性鑒別試驗來控制該制劑的質(zhì)量。沒食子酸是清澀比黑馬爾江散的主要有效成分之一，研究該成分的含量測定方法可以更好的反映和控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。

1 儀器和試藥

島津高效液相色譜系統(tǒng):包括LC 20AT型雙泵，SIL 20AC型自動進樣器，SPD-M 20A型PDA檢測器;島津uv－2450紫外可見分光光度計;BP211D型分析天平(德國Sartorius公司);沒食子酸對照品(0831—9501):中國藥品生物制品鑒定所;樣品:新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院(批號:20101019，20101123，20101207);甲醇:色譜純(美國TEDIA試劑公司);磷酸:分析純(天津市永大化學試劑開發(fā)中心);所有色譜用試劑均用O.45gm微孔濾膜過濾;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱島津VP－ODS 250×4.6mm 5μm;流動相:甲醇一0.025%磷酸溶液(4:96);流速lmL/min;檢測波長270 nm柱溫:25℃;進樣量:l0μL;分析方法:外標法。

2.2 系統(tǒng)適應性試驗

分別按照2.5、2.6項下方法制備對照品溶液及供試品溶液，按2.1項下色譜條件，各進樣10μl，同時采集270nm光譜數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，供試品溶液相應色譜峰的光譜與對照品沒食子酸一致。沒食子酸對照品保留時間為16.2min，理論塔板數(shù)大于5000。

2.3 對照品溶液的配制

精密稱取沒食子酸對照品，加流動相溶解制成0.1060mg/mL的溶液，作為對照品溶液儲備液。精密量取對照品溶液儲備液5mL置50mL量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的配制

精密稱取樣品(批號:20101123)1.0040g，置50mL容量瓶中，加甲醇30mL超聲處理1個小時、加甲醇稀釋至刻度搖勻、濾過，取續(xù)濾液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇即得。微孔濾膜濾過，備用。

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取對照品儲備液(0.1060mg/mL)1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按“2.1”色譜條件下操作，以6次測定的峰面積平均值考察線性范圍。

線性方程為:Y=2.4×104X－1.4×103，r=0.9996。

結(jié)果表明，沒食子酸在:10.6～106.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實驗

精密量取對照品溶液儲備液(0.1060mg/mL)5mL置50mL量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復進樣5次，以峰面積計算RSD(n=5)為O.42%。證明本法有較高的精密度。

2.7 穩(wěn)定性實驗

取同一批號本品(20101123)，按“2.6”方法配制溶液，分別于O、1、2、4、6h進樣，進樣量為10μL，測定沒食子酸的峰面積，RSD為1.24%。

2.8 重復性實驗

取同一批號本品(20101123)，平行制備5份樣品，按樣品測定法測定，并對所得數(shù)據(jù)進行處理，結(jié)果測得沒食子酸含量的RSD為0.89%。

2.9 加樣回收率實驗

精密量取已知含量的樣品(批號為20101123，含量4.11mg/g)6分各1g，分別精密加入一定量的沒食子酸對照品，按供試品溶液的制備方法操作，在上述色譜條件下進行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果(n=6)

2.10 樣品測定

取樣品按“2.4”方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件下測定，按外標法計算沒食子酸含量。結(jié)果見表2。對照品和供試品色譜圖見圖1

表2 清澀比黑馬爾江散中沒食子酸含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

取沒食子酸對照品適量，用流動相溶解并稀釋成0.1mg.mL－1溶液，用紫外可見分光光度計于200～400nm處進行掃描，從其紫外圖譜中可見其在220nm、270 nm處有最大吸收，但在220nm檢測波長下，流動相中甲醇及樣品中其他物質(zhì)的紫外吸收干擾較大，基線不穩(wěn)，故選擇270 nm為檢測波長。

3.2 流動相的選擇

報道的方法試驗，流動相用甲醇一水(5∶95)，水一乙酸(98∶2)，甲醇一0.5%冰醋酸(15∶85)，在該制劑中沒食子酸的分離效果均不佳，考慮到?jīng)]食子酸顯酸性，故流動相的pH值對沒食子酸的分離影響較大，通過不斷改變甲醇與磷酸水溶液的比例及流速，選定甲醇一0.025%磷酸水溶液(4:96)及流速lmL/min比較合適，分離度好且保留時間適宜。

本實驗測定了不同批號的清澀比黑馬爾江散，結(jié)果均能檢出沒食子酸，但含量有所差異。本篇通過實驗研究，建立了清澀比黑馬爾江散中沒食子酸含量的HPLC測定法。本法取樣量少，方法簡單，重現(xiàn)性好，結(jié)果準確，可作為質(zhì)量控制分析方法，為沒食子酸的含量測定提供了有效的方法。

參考文獻

［1］ 國家藥典委員會．衛(wèi)生部藥品標準［S］．維吾爾藥分冊，1998:123．

［2］ 徐小平．王曙HPLC測定4種藏藥中沒食子酸的含量［J］．華西藥學雜志，2003，18(6):448．

Determination of Uygur medicine preparation Qingse bi hei ma er jiang powder rinse solution of gallic acid by high performance liquid chromatography Ayinuer·Amuti，Simayijiang·Abudurexiti

Kashi Institute for Drug Control，Kashi 844000，China

Objective:Determination of Qing Se Bi Hei Ma er jiang powder in gallic acid．Methods:a 0.025%methanol，phosphoric acid(four ninety－six);flow lmL．min－1;detection wavelength 270 nm column temperature:25℃;injection volume:l0μL;analysis methods external standard method．results:gallic acid in 10.6～106.0μg．range of good linearity(r=0.9996)，method precision was RSD=0.42%(n=5)，the average recovery was 99.0%，RSD was 1.3%(n=6)．Conclusion:The method is simple，accurate and measured results are stable and reproducible and can be used in the preparation of gallic acid method．

HPLC;gallic acid;Bi Hei Ma er jiang powder

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0011－02

2012.02.24)