王海波

(河南省食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鄭州450003)

芥子為常用中藥，始載于梁代《名醫(yī)別錄》，以后歷代本草中均有記載，自1953 年以來被我國(guó)歷版藥典收載。2010 版《中國(guó)藥典》在芥子項(xiàng)下同時(shí)收載了2 個(gè)藥材基源，即十字花科植物白芥Sinapis albaL.或黃芥Brassica juncea(L.)Czern. et Coss.的干燥成熟種子，前者習(xí)稱白芥子，后者習(xí)稱黃芥子［1］。兩種芥子的臨床功效基本一致，但白芥子的祛痰平喘作用強(qiáng)于黃芥子，黃芥子的毒性大于白芥子，因此白芥子的市場(chǎng)需求量較大。由于兩者的外觀性狀相似，有不法商家把黃芥子用硫黃熏烤，冒充白芥子銷售，嚴(yán)重影響了臨床用藥的安全有效性。芥子中含有大量的芥子堿類成分。芥子堿類成分為一類季銨鹽生物堿，廣泛存在于十字花科植物中，代表性分是芥子堿。芥子堿多以硫氰酸鹽形式存在，具有抗輻射、抗氧化、抗衰老、抗雄激素、降血壓等多種生物活性［2-3］。芥子堿的含量測(cè)定方法多為高效液相色譜法［4］，此外還見有毛細(xì)管電泳法［5］和紫外分光光度法［6］的報(bào)道。本文以芥子中的主要有效成分芥子堿硫氰酸鹽作為指標(biāo)成分，以高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地的白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量，并比較白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量差異，以控制藥材質(zhì)量。此方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，分析快速準(zhǔn)確。

1 藥品、試劑與儀器

白芥子和黃芥子購(gòu)于內(nèi)蒙古和河北兩地。芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品(批號(hào)111721-200501，供含量測(cè)定用)，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙腈，色譜純，德國(guó)MERCK 公司產(chǎn)品;水為超純水，臨用新制;其余試劑均為分析純。Waters 2695 液相色譜儀，四元泵，在線脫氣器，二極管陣列檢測(cè)器，Empower 色譜工作站，美國(guó)沃特世科技有限公司產(chǎn)品;XR-205SM-DR 電子分析天平，瑞士Precisa 公司產(chǎn)品;KQ-300 型超聲波提取器，40 kHz，300 W，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱為Phenomenex Luna C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈－0.08 moL/L 磷酸二氫鉀(10 ∶90，體積比)，流速1. 0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)326 nm，進(jìn)樣量10 μL，理論塔板數(shù)按芥子堿硫氰酸鹽峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品適量，精密稱定，用流動(dòng)相溶解并制成每mL 中含0.2 mg 的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品細(xì)粉約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理20 min(功率250 W，頻率20 kHz)，濾過。濾渣再用甲醇同法提取3 次，濾液合并，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)考察

對(duì)芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品和芥子藥材供試品中芥子堿硫氰酸鹽色譜峰進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，結(jié)果均在326 nm 處有最大吸收，且對(duì)照品和供試品色譜中芥子堿硫氰酸鹽色譜峰的紫外吸收光譜基本一致，峰純度較好。見圖1。

圖1 對(duì)照品與供試品的色譜圖、光譜圖

2.4.2 線性關(guān)系的考察

取不同濃度芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品溶液，濃度分別為0. 205 20，0. 145 00，0. 102 60，0. 051 30，0.020 52 g/L，精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果:芥子堿硫氰酸鹽在0.205 2～2.052 0 μg 間線性良好，回歸方程Y=1.977 ×106X－2 726(r=0.999 96)。見表1。

表1 芥子堿硫氰酸鹽線性關(guān)系考察

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6 次，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積計(jì)算，RSD=0.30%。見表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以芥子堿硫氰酸鹽峰面積計(jì)算，RSD=0.21%。結(jié)果表明供試品溶液在12 h 內(nèi)基本穩(wěn)定，見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批次樣品制備6 份供試品，測(cè)定芥子堿硫氰酸鹽平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.733%，RSD=2.00%，表明重復(fù)性良好。見表4。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.4.6 加樣回收率試驗(yàn)

取已知樣品(芥子堿硫氰酸鹽的質(zhì)量濃度為6.99 mg/g)6 份，每份0.5 g，精密加入芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品的甲醇溶液(76.48 mg/L)50 mL，按照2.3 項(xiàng)下方法操作，制備加樣供試品溶液，測(cè)定芥子堿硫氰酸鹽的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表5。

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.7 樣品測(cè)定

將收集的不同來源的白芥子和黃芥子樣品按2.3 項(xiàng)下的方法制成供試品溶液，取供試品溶液及2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液各10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表6。

表6 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討 論

3.1 供試品溶液的制備方法

在實(shí)驗(yàn)中，選擇比較了水浴加熱回流和超聲提取兩種提取方法，結(jié)果測(cè)得的芥子堿硫氰酸鹽含量無明顯差別。因?yàn)槌曁崛∈褂梅奖?，可操作性?qiáng)，所以選用超聲提取作為提取方法。

3.2 流動(dòng)相的選擇

原2005 版《中國(guó)藥典》一部中采用梯度洗脫法測(cè)定芥子中芥子堿硫氰酸鹽含量，試驗(yàn)表明對(duì)照品保留時(shí)間過短，分離度較差。筆者結(jié)合參考文獻(xiàn)，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈－0.08 moL/L磷酸二氫鉀(10∶90，體積比)為流動(dòng)相，以芥子中的主要有效成分芥子堿硫氰酸鹽作為指標(biāo)成分，建立了高效液相色譜法測(cè)定本品中芥子堿硫氰酸鹽的含量，以控制藥材及飲片質(zhì)量。此方法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，分析快速準(zhǔn)確。

3.3 白芥子和黃芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量

由樣品測(cè)定結(jié)果可知，芥子中芥子堿硫氰酸鹽的含量均符合2010 版《中國(guó)藥典》一部芥子堿硫氰酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)不得低于0.50%的限度規(guī)定，且不同產(chǎn)地的白芥子含量差異較大。目前由于條件所限，收集到的白芥子和黃芥子樣品較少，尚不能根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷兩種的芥子堿硫氰酸鹽含量有無顯著性差異。在今后的研究中，可繼續(xù)積累實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，比較白芥子和黃芥子的芥子堿硫氰酸鹽的含量規(guī)律。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典:一部［M］. 北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:149.

［2］歐敏銳，吳國(guó)欣，林躍鑫.中藥白芥子研究概述［J］.海峽藥學(xué)，2001，13(2):1－3.

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［4］劉麗芳，王宇新，劉雪芳，等.HPLC 法測(cè)定白芥子藥材中芥子堿硫氰酸鹽的含量［J］. 中國(guó)野生植物資源，2001，20(5):49－50.

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［6］楊雪萍，王惠國(guó)，馮保民，等. 芥子中總芥子堿類成分的含量測(cè)定［J］.大連大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30(6):53－55.