全先慶

（臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東臨沂276000）

沂州木瓜種仁油脂體外抗氧化能力研究

全先慶

（臨沂大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東臨沂276000）

通過ABTS+·自由基清除實(shí)驗(yàn)、二苯代苦味?；杂苫宄龑?shí)驗(yàn)、羥基自由基清除實(shí)驗(yàn)以及花生油的抗氧化實(shí)驗(yàn)，測定和對比沂州木瓜種仁油脂（SOYC）、BHT、維生素C和Trolox的抗氧化能力。結(jié)果表明，10%的沂州木瓜種仁油脂對ABTS+·自由基清除能力的TEAC值為65.67μmol/L；沂州木瓜種仁油脂對二苯代苦味酰基自由基和羥基自由基的清除效果比100μg/mL的BHT好，對花生油的抗氧化效果明顯，說明沂州木瓜種仁油脂具有顯著的抗氧化活性。

沂州木瓜種仁油脂（SOYC），體外，抗氧化活性

沂州木瓜（Yizhou Chaenomeles）為薔薇科木瓜屬皺皮木瓜種植物[1]，是我國特有果木之一。沂州木瓜富含齊墩果酸等多種有機(jī)酸、總糖、蛋白質(zhì)、黃酮物質(zhì)、多種氨基酸和礦物質(zhì)元素，超氧化物歧化酶（SOD）含量極高[2]。據(jù)“本草綱目”記載，木瓜具有舒筋絡(luò)、和脾胃、益筋血的藥理作用，特別是治療腰膝疼痛、腳氣水腫功效顯著?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，木瓜能抗菌消炎、舒筋活絡(luò)、軟化血管、抗衰養(yǎng)顏、驅(qū)風(fēng)止痛消腫，并能阻止人體致癌物質(zhì)亞硝胺的合成，是一種營養(yǎng)豐富、有百益而無一害的果中珍品。其中木瓜所含的齊墩果酸成分是一種具有護(hù)肝降酶、抗炎抑菌、降低血脂等功效的化合物；超氧化物歧化酶（SOD）含量極高，是養(yǎng)顏、抗衰老藥物的核心物質(zhì)，具有抗癌、防輻射功能[3-7]。近年來，利用木瓜果實(shí)加工罐頭、果脯、果醬、果酒、果汁等保健食品，每年都有大量的木瓜種仁下腳料沒有得到開發(fā)利用，并污染環(huán)境。本文以沂州木瓜種仁為原料提取油脂并研究其抗氧化活性，為進(jìn)一步綜合開發(fā)沂州木瓜的價(jià)值和提高沂州木瓜種植的經(jīng)濟(jì)效益提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

沂州木瓜種仁 取自臨沂百益木瓜飲料廠（下腳料），清洗后自然干燥，將干燥后的種子破殼取種仁，用粉碎機(jī)粉碎，于50℃干燥8h后，過40目篩，即得沂州木瓜種仁；ABTS+·、二苯代苦味?；杂苫―PPH·）、Trolox、BHT、維生素C等 均購自美國Sigma公司。

DWF-100小型電動粉碎機(jī) 青島大華雙環(huán)機(jī)器有限公司；US-32R冷凍高速離心機(jī) 北京醫(yī)療儀器廠；TU-1800PC型紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；FA1604型分析天平 上海天平儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 沂州木瓜種仁油脂（SOYC）的制備 采用有機(jī)溶劑浸提法，取100g沂州木瓜種仁于1000mL碘量瓶中，加入600mL乙醚，蓋上塞子，置于恒溫振蕩器中，室溫浸提12h，抽濾后置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中回收乙醚后即得SOYC。油樣以7∶3的氯仿和甲醇稀釋至一定倍數(shù)供實(shí)驗(yàn)用。

1.2.2 SOYC對ABTS+·的清除能力分析 參照文獻(xiàn)[8]的方法。取新制備的ABTS+·工作液3mL，分別與不同濃度的SOYC或Trolox樣品1mL混勻，在室溫下反應(yīng)30min后，測定OD734，以不加SOYC的試樣為空白，按下列公式計(jì)算樣品對ABTS+·自由基的清除率：

以Trolox濃度為橫坐標(biāo)，不同濃度的Trolox對ABTS+·的清除率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過計(jì)算得到的SOYC樣品液的清除率，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出其相對應(yīng)的Trolox濃度，換算成Trolox當(dāng)量濃度（μmol/L），即TEAC（Trolox equivalent antioxidant capacity）值[9]。

1.2.3 SOYC對DPPH·自由基的清除能力分析 參照Larrauri[10]的方法。向3.5mL濃度為5.0×10-5mol/L的DPPH·溶液中加入樣品溶液或溶劑，使總體積達(dá)到4mL，混勻，室溫下靜止30min，測定OD517，以維生素C、BHT和Trolox為對照（濃度均為100μg/mL），每組3個(gè)重復(fù)，計(jì)算清除率。清除率越大，抗氧化能力越強(qiáng)。

式中：A0：3.5mL DPPH·溶液+0.5mL溶劑的吸光度值；A1：3.5mL DPPH·溶液+0.5mL樣品溶液的吸光度值；A2：3.5mL溶劑+0.5mL樣品溶液的吸光度值。

1.2.4 SOYC對羥自由基（·OH）清除能力分析 參照Bao[11]的方法。向1mL不同濃度的樣液中加入1mL番紅花溶液（40mg/L）及2mL磷酸鹽緩沖液（0.15mol/L，pH7.4），然后加入0.5mL FeSO4溶液（0.02mol/L，溶于4mmol/L EDTA-Na2中），最后加入0.5mL H2O2啟動反應(yīng)，漩渦混勻，37℃水浴30min后，在700nm處測定反應(yīng)液的吸光值，以維生素C、BHT和Trolox為對照（濃度均為100μg/mL），每組3個(gè)重復(fù)，按照下式計(jì)算·OH的清除率：

式中：A0：溶劑對照，不加入試樣和FeSO4吸光度值；A2：試樣吸光度；A1：樣品本底吸光度。

1.2.5 SOYC對花生油抗氧化能力分析 將SOYC分別以油脂質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%、5%、10%的添加量加入到40g新榨取的花生油中，同時(shí)以不添加SOYC的花生油作為空白組，以添加0.01%BHT的花生油作為對照組，充分混勻后封口，置于50℃恒溫箱內(nèi)，每隔24h取樣測定其過氧化值（peroxide value，POV），分析在貯藏過程中POV的變化趨勢。每組設(shè)3個(gè)重復(fù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 沂州木瓜種仁油脂的含量

100g沂州木瓜種仁用乙醚提取后，經(jīng)抽濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醚后得油脂51.6g。由此可知，沂州木瓜種仁中油脂含量較高，高達(dá)51.6%。

2.2 SOYC對ABTS+·的清除能力

Trolox對ABTS+·清除率的Trolox當(dāng)量標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1（y=0.6714x+4.4286，R2=0.9868），將樣品對ABTS+·清除率換成Trolox當(dāng)量濃度（TEAC值），結(jié)果見圖2。由圖2可見，SOYC對ABTS+·具有顯著的清除能力，并且SOYC濃度越大，對ABTS+·的清除能力越顯著，10%的SOYC對ABTS+·清除能力的TEAC值達(dá)65.67μmol/L。

圖1 Trolox對ABTS+·的清除曲線Fig.1 The elimination curve of Trolox on ABTS+·free radical

圖2 SOYC對ABTS+·的清除能力Fig.2 The elimination ability of SOYC on ABTS+·free radical

2.3 SOYC對DPPH·的清除能力

圖3 SOYC對DPPH·的清除能力Fig.3 The elimination ability of SOYC on DPPH·free radical

樣品對DPPH·清除能力的大小可反映該樣品的抗氧化能力。從圖3可見，SOYC對DPPH·具有較強(qiáng)的清除能力，5%和10.0%的SOYC清除DPPH·的能力顯著高于100μg/mL的BHT，10.0%SOYC清除DPPH·的能力高于100μg/mL的維生素C，但低于100μg/mL的Trolox。

2.4 SOYC對羥基自由基（·OH）的清除能力

由圖4可見，SOYC對羥基自由基具有極強(qiáng)的清除能力，其清除羥基自由基的能力隨SOYC濃度的增大而顯著增加。10.0%SOYC清除羥基自由基的能力顯著高于100μg/mL的BHT和維生素C，與100μg/mL的Trolox能力相當(dāng)。

2.5 SOYC對花生油的抗氧化能力

油脂在儲藏過程中，不飽和脂肪酸易發(fā)生自動氧化和分解，降低其營養(yǎng)價(jià)值，產(chǎn)生有害物質(zhì)，并引起過氧化值（POV）的升高，國內(nèi)外常用過氧化值來衡量食用油脂氧化的指標(biāo)。從圖5可見，50℃時(shí)在花生油中加入1%的SOYC，可延緩花生油POV值的升高，提高花生油的穩(wěn)定性，且SOYC的添加量越大，對花生油的抗氧化效果越好；當(dāng)SOYC添加量為10%時(shí)，抗氧化效果接近于0.01%的BHT。

圖4 SOYC對羥基自由基（·OH）的清除能力Fig.4 The elimination ability of SOYC on·OH free radical

圖5 SOYC對花生油的抗氧化活性Fig.5 The antioxidant activity of SOYC on peanut oil

3 結(jié)論與討論

自由基引起的氧化作用與人類的疾病和衰老密切相關(guān)，因此對食品特別是油脂的抗氧化活性研究越來越受到重視。為了明確沂州木瓜種仁油脂的抗氧化活性，本實(shí)驗(yàn)通過測定SOYC對ABTS+·、DPPH·和·OH等的清除能力，以及SOYC對花生油的抗氧化能力實(shí)驗(yàn)，來綜合評價(jià)SOYC的抗氧化活性。結(jié)果表明，10%的木瓜種仁油脂對ABTS+·清除能力的TEAC值為65.67μmol/L；沂州木瓜種仁油脂對二苯代苦味?；杂苫土u基自由基的清除能力比100μg/mL的BHT好，對花生油的抗氧化效果明顯，說明沂州木瓜種仁油脂具有顯著的抗氧化活性，且沂州木瓜種仁中油脂含量高達(dá)51.6%。因此，沂州木瓜種仁經(jīng)過適當(dāng)處理后可以作為功能油脂加以開發(fā)和利用。

[1]鄭萬鈞.中國樹木志[M].北京:中國林業(yè)出版社，1989：1027-1030.

[2]王紹美，何照范，郁建平.木瓜營養(yǎng)成分分析[J].營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2000，20（2）:190-192.

[3]唐志宇.沂洲木瓜飲料的開發(fā)研究[J].食品科學(xué)，1996，17（4）:74-75.

[4]劉美蘭，王晶，吳松吉.不同產(chǎn)地的女貞子中齊墩果酸含量比較[J].中草藥，1990，21（6）:20-22.

[5]唐春紅，葉志義.木瓜營養(yǎng)保健作用研究動態(tài)[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2000，12（4）:97-100.

[6]王嘉祥.沂州木瓜功能成分分析及主要加工產(chǎn)品研發(fā)[J].食品科學(xué)，2005，26（8）:208-210.

[7]王漢屏，王立志.木瓜齊墩果酸的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2007，28（10）:621-623.

[8]李瑞，夏秋瑜，趙松林，等.原生態(tài)椰子油體外抗氧化活性[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2009，30（9）:1369-1372.

[9]Mariken J T J，Sebastiaan D J，Hans-Peter V.A critical appraisal of the use of the antioxidant capacity（TEAC）assay in defining optimal antioxidant structures[J].Food Chemistry，2003，80:409-414.

[10]Larrauri JA，Sanchez-Moreno C，Saura-Calixto F.Effect of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels[J].J Agric Food Chem，1998，46（7）:2694-2697.

[11]Bao JW，Zhang JL，Xu XH.Effects of different processing on content of baicalin from root of Scutellaria baicalensis and its antioxidation[J].Chinese Pharmaceutical Journal，2002，37（9）: 661-663.

Evaluation of the antioxidant activity in vitro of seed oil of Yizhou Chaenomeles

QUAN Xian-qing
（College of Life Sciences，Linyi University，Linyi 276000，China）

The antioxidant activity of seed oil of Yizhou Chaenomeles（SOYC），BHT，Vitamin C and Trolox were compared on the base of the elimination tests of ABTS+·free radical，elimination tests of DPPH·free radical and hydroxide free radical as well as the oxidation resistance test of peanut oil.The total TEAC value of scavenging rate to ABTS+·free radical of 10%SOYC was 65.67μmol/L.Compared with BHT，SOYC had a better effect on the elimination of DPPH·free radical and hydroxide free radical.It had a better antioxidant activity on peanut oil.The results showed that SOYC had notable antioxidant activity.

seed oil of Yizhou Chaenomeles（SOYC）；in vitro；antioxidant activity

TS201.2

A

1002-0306（2012）01-0066-03

2011－09－06

全先慶（1968-），男，博士，副教授，主要從事分子生物學(xué)與食品化學(xué)方向的研究。

山東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（Y2007D56）。