張小平 周洪合

HPLC法測定清肺止咳合劑中黃芩苷的含量

張小平①周洪合②

目的：建立高效液相色譜法測定清肺止咳合劑中黃芩苷的含量。方法：高效液相色譜法：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水-磷酸（47:53:0.2）為流動(dòng)相；檢測波長為280 nm。結(jié)果：在0.2～1 μg范圍內(nèi)黃芩苷峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好，r=0.9999；樣品加樣回收率為100.20%（n=5），RSD 0.71%。結(jié)論：所建立的方法準(zhǔn)確可行，重復(fù)性好，可有效控制清肺止咳合劑的質(zhì)量。

高效液相色譜法； 清肺止咳合劑； 黃芩苷； 含量測定

清肺止咳合劑是由省級(jí)食品藥品監(jiān)管部門批準(zhǔn)的醫(yī)院制劑，由炙麻黃、黃芩、炒杏仁、桑葉、川貝母等十六味藥物組成。具有清熱止咳、化痰平喘功效，用于風(fēng)熱肺熱引起的支氣管炎肺炎見咳嗽痰多等癥，具有較好的臨床療效。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有含量測定，為提高本制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，通過以黃芩苷為指標(biāo)，對(duì)本制劑三批樣品中的黃芩進(jìn)行了含量測定研究，并進(jìn)行了方法學(xué)的系統(tǒng)考察，建立了黃芩苷的含量測定方法，提高了其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津（LC－20A）高效液相色譜儀；Prominence SPD-M20A PDA檢測器。

1.2 試藥 黃芩苷對(duì)照品，批號(hào)：110715-201016，由中國食品藥品檢定研究院提供。試劑為色譜純；清肺止咳合劑，自制，批號(hào)：20120122、20120123、20120126。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，柱溫38 ℃，檢測波長280 nm，流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸（47:53:0.2），流量1 ml/min，進(jìn)樣量10 μl。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，以甲醇為溶劑，制成每1 ml含100 μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取清肺止咳合劑1 ml，置50 ml容量瓶中，加70%乙醇溶液35 ml，超聲處理20 min，放置至室溫，加70%乙醇溶液至刻度，搖勻，靜置，濾過，棄去初濾液，續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 空白對(duì)照溶液的制備 按本制劑的處方量，制備缺黃芩的對(duì)照液，按供試品溶液的制備方法制成空白對(duì)照溶液。

2.5 空白試驗(yàn) 分別取上述黃芩苷對(duì)照品、供試品溶液、陰性空白對(duì)照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見圖1-3）。結(jié)果表明，在黃芩苷峰位置處，空白對(duì)照溶液沒有其他峰呈現(xiàn)，說明空白對(duì)照無干擾，符合測定要求。

圖1 黃芩苷對(duì)照品

圖2 空白對(duì)照樣品

圖3 樣品

2.6 線性關(guān)系考察 精密吸取黃芩苷對(duì)照品2、4、6、8、10 μl，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=0.1306X-0.053，r=0.9998。在0.2～1 μg范圍內(nèi)有良好線性。

2.7 精密度試驗(yàn) 取黃芩苷對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10 μl，按上述色譜條件測定峰面積，RSD=0.41，證明儀器有良好的精密度。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果表明供試品與對(duì)照品在12 h內(nèi)均穩(wěn)定。方法：取對(duì)照品溶液和供試品溶液分別每隔2小時(shí)進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣6次，每次10 μl，記錄色譜圖。RSD分別是0.56，0.63。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：20120122）平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，并計(jì)算含量，結(jié)果表明有良好重復(fù)性，RSD=0.42。

2.10 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的樣品適量，精密量取5份，分別加入一定量的黃芩苷對(duì)照品，制備成供試品溶液，測定峰面積，計(jì)算黃芩苷的回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷的回收率

2.11 樣品測定 取樣品3批，分別制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μl，按上述色譜條件測定峰面積（n=5），計(jì)算樣品中黃芩苷的含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品中黃芩苷含量

3 討論

3.1 檢測波長的選擇，參考《中國藥典》2010年版一部黃芩項(xiàng)下含量測定方法[1]，取上述黃芩苷對(duì)照品溶液，在紫外分光光度計(jì)上于波長200～400 nm處掃描，結(jié)果在（280±2）nm波長處有最大吸收，故以280 nm為檢測波長。

3.2 供試品溶液制備曾將加70%乙醇稀釋后直接測定黃芩苷含量與加70%乙醇超聲處理后測定加以比對(duì)，結(jié)果表明，加70%乙醇超聲處理后黃芩苷含量高于稀釋后直接測定，故本文采用加70%乙醇后超聲處理供試品[2-3]。

[1] 國家藥典委員會(huì).中國藥典.一部[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282.

[2] 宿潔，孫立華，李成果.高效液相色譜法測定利膽排石合劑中黃芩苷的含量[J].山東醫(yī)藥工業(yè)，2002，21（5）：12.

[3] 李卓，危當(dāng)恒.咽喉炎合劑中黃芩苷的穩(wěn)定性考察[J].中國藥房，2008，19（36）：2845.

Determination of Baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC/ZHANG Xiao-ping， ZHOU Hong-he. //Medical Innovation of China，2012，9（33）:149-150

Objective: To establish a method to determine baicalin in Qingfeizhike Mixture by HPLC. Method: Baicalin intablets were separated by HPLC on Cosmosil C18 column with methanol-water-phosphorie acid（47:53:0.2）ad mobile phase and detection wavelength was set at 280 nm. Result: The paeontflorin area and content showed a good linear relationship ym the range of 0.2～1 μg and correlation coefficient was 0.9999. The average recovery of the added sample was 100.20%（n=5）， RSD 0.71%. Conclusion: The method is stable， accurate， and precise for the quality control of Qingfeizhike Mixture.

HPLC； Qingfeizhike Mixture； Baicalin； Determination

Jinan City Chinese Medicine Hospital， Jinan 250012， China

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.33.095

①濟(jì)南市中醫(yī)醫(yī)院 山東 濟(jì)南 250012

②濟(jì)南市第三人民醫(yī)院

張小平

2012-09-13） （本文編輯：王宇）