王曙光，高 敏，趙 遠，李小鳳

（1.云南省中醫(yī)中藥研究院，云南 昆明650223；2.昆明醫(yī)科大學，云南 昆明650500）

在臨床應用中，傳統(tǒng)藥物顯示出一定的治療效果。針對鎮(zhèn)痛發(fā)生的作用及機理，本實驗用相應動物模型實驗來證實受試品的鎮(zhèn)痛作用，從而為挖掘出更多的鎮(zhèn)痛類中藥，充分發(fā)揮豐富的自然資源在臨床中的應用，緩解疼痛患者的病痛尋找新資源。單刀根是傣族民間習用的有鎮(zhèn)痛作用的草藥。為了進一步證實其鎮(zhèn)痛的藥效，本實驗擬通過動物模型來研究其鎮(zhèn)痛作用。

1 材料和方法

1.1 材料 熱板測痛儀GJ－8402型 生產(chǎn)廠家：寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠；UGO BASLE Tail Flick 37360 Model 37360 UGO BASILE S.R.L微量移液器20～200μL生產(chǎn)廠家：大龍醫(yī)療設備（上海）有限公司；單刀根藥材生藥粉、單刀根藥材水提取物、單刀根藥材醇提取物，均由云南省中醫(yī)中藥研究院藥理室提供；己烯雌酚注射液 規(guī)格：1 mL：2 mg產(chǎn)品批號：100504 050608生產(chǎn)廠家：上海通用藥業(yè)股份有限公司；縮宮素注射液 規(guī)格：1 mL：10單位產(chǎn)品批號：100404生產(chǎn)廠家：上海禾豐制藥有限公司；阿司匹林腸溶片 規(guī)格：每片含0.1阿司匹林 產(chǎn)品批號：BJ00981生產(chǎn)企業(yè)：Bayer Healt hcare Manu－facturing s.r.l；嗎啡注射液 規(guī)格：1 mL：10 mg產(chǎn)品批號：950505生產(chǎn)廠家：沈陽第一制藥廠。

1.2 實驗動物 昆明種SPF小鼠級提供單位：昆明醫(yī)學院實驗動物中心許可證號：SCXK 2005－0008雌性135只；雄性90只，體重（20±2）g。

1.3 受試物 DDG藥材小提取物，濃度為2 g生藥／mL；DDG藥材95%乙醇提取物，濃度為2 g生藥／mL，均由云南中醫(yī)中藥研究院藥理室提供。

2 實驗方法

2.1 扭體法［1～3］雄小鼠90只，體重（20±2）g。隨機分為6組，每組15只?？瞻讓φ战M，等體積灌胃給予生理鹽水；單刀根水提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根水提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；阿司匹林組，按小鼠20 mL／kg（78 mg／kg）的劑量灌胃給藥。各受試組連續(xù)灌胃5 d，實驗所得結(jié)果見表1。

2.2 耳腫脹法［4］雄小鼠90只，體重（20± 2）g。隨機分為6組，每組15只。空白對照組，等體積灌胃給予生理鹽水；單刀根水提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根水提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥。阿司匹林組，按小鼠20 mL／kg（78 mg／kg）的劑量灌胃給藥。各受試組連續(xù)灌胃5 d，于最后1次灌胃結(jié)束后，在小鼠右耳的前后兩面涂布0.05 mL／只二甲苯。1 h后，將小鼠麻醉處死，剪下雙耳用8 mm直徑打孔器分別在同一部位打下小鼠圓耳片稱重，記錄數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗所得結(jié)果見表2。

2.3 熱板法［1，5］雌小鼠90只，體重（20± 2）g。把小鼠放于溫度為（50±5）℃的熱板儀上，記錄各小鼠從接觸熱板儀到舔后足的時間。每組小鼠測定2次，測量完畢后，算出兩次測量時間平均值作為基礎痛閾值。挑選時間為5～30 s內(nèi)舔足小鼠為合格小鼠。把合格小鼠隨機分為6組，每組15只?？瞻讓φ战M，等體積灌胃給予生理鹽水，連續(xù)給藥10 d；單刀根水提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根水提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；各受試組連續(xù)灌胃給藥3 d。各灌胃組小鼠，于最后一次灌胃30 min后，置于熱板儀上測定舔足時間，時間間隔30 min，共重復4次。嗎啡組，按小鼠10 mL／kg（1.95 mg／kg）的劑量給予小鼠皮下注射嗎啡即刻置于熱板儀上，按間隔30 min，重復測定4次舔足時間。實驗所得結(jié)果，見表3。

2.4 單刀根藥物誘導的痛經(jīng)實驗［6～7］雌小鼠105只，體重（20±2）g。隨機分為7組，每組15只?？瞻讓φ战M，等體積灌胃給予生理鹽水，連續(xù)灌胃12天；各受試組，按小鼠2 mg／kg（0.4 mg／mL，5 mL／kg）的劑量給小鼠肌肉注射乙烯雌酚，連續(xù)注射12 d；模型組只給乙烯雌酚，不給予受試藥。在注射乙烯雌酚第8 d起，單刀根水提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根水提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液大劑量組，按小鼠10 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；單刀根醇提液小劑量組，按小鼠5 mL／kg的劑量（每mL含生藥量2 g）灌胃給藥；各受試組連續(xù)灌胃給藥5 d。嗎啡組，在注射乙烯雌酚第12 d，按小鼠10 mL／kg（1.95 mg／kg）的劑量給予小鼠注射嗎啡。所有實驗組，于第12天給藥結(jié)束30 min后，按小鼠20 u／kg（2u／mL，10 mL／kg）的劑量，給小鼠腹腔注射縮宮素。并觀察小鼠在注射完催產(chǎn)素30 min內(nèi)的扭體次數(shù)，并記錄數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。實驗所得結(jié)果，見表4。

2.5 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)均進行統(tǒng)計分析，均采用t檢驗。

3 實驗結(jié)果

表1 單刀根對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（扭體法）（－x±s）

表2 單刀根對小鼠的抗炎作用（耳腫脹法）（－x±s）

表4 單刀根對小鼠痛經(jīng)模型的作用（－x±s）

表3 單刀根對小鼠的鎮(zhèn)痛作用（熱板法）（－x±s）

3.1 實驗結(jié)果小結(jié) 經(jīng)統(tǒng)計學分析，扭體實驗各受試組與空白組相比，P＜0.05，有顯著性差異；鼠耳腫脹實驗各受試組P＞0.05，無顯著性差異；熱板法實驗除單刀根水提液大劑量組，給藥30、60、90、120 min后，P＞0.05無顯著性差異，單刀根水提液小劑量組，給藥90 min后，P＜0.05有顯著性差異。單刀根醇提液大劑量組，給藥30、90、120 min后，P＜0.05有顯著性差異。單刀根醇提液小劑量組，給藥30、60、90 min后，P＜0.05有顯著性差異。嗎啡組給藥30 min后，P＜0.05有顯著性差異。痛經(jīng)實驗受試組與空白組相比，經(jīng)統(tǒng)計學分析，各受試組P＜0.05，有顯著性差異。

4 討論

本研究可選方法均為傳統(tǒng)、經(jīng)典鎮(zhèn)痛實驗方法，成熟、可靠，能不同程度反映受試品的鎮(zhèn)痛作用。痛經(jīng)模型能較好地表現(xiàn)動物疼痛狀態(tài)，模型組均顯100%的疼痛反應。單刀根生藥受試品不同程度反映出鎮(zhèn)痛作用。單刀根不同溶媒提取物在痛經(jīng)實驗中，結(jié)果均與陽性藥物數(shù)據(jù)反映一致，均呈現(xiàn)有鎮(zhèn)痛作用。并顯一定的量效、時效相關性。對單刀根的鎮(zhèn)痛機理和有效部位，還需進一步研究證實，為開發(fā)本品做好基礎。

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