大鼠眼鈍挫傷后晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡及Survivin基因?qū)Φ蛲龅挠绊?/h1>
2012-11-13 07:53:44劉建偉趙桂秋杜兆東張麗娜張振華
眼科新進(jìn)展 2012年11期
劉建偉 趙桂秋 杜兆東 張麗娜 張振華
眼鈍挫傷在臨床上很常見，鈍挫傷可導(dǎo)致多種眼部病變，而外傷性白內(nèi)障是眼鈍挫傷后最常見的并發(fā)癥之一，它可以引起視功能的嚴(yán)重?fù)p傷[1]。外傷性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制目前還未明了。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡是除先天性白內(nèi)障以外所有類型白內(nèi)障形成的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)[2-3]。細(xì)胞凋亡是機(jī)體維持自身穩(wěn)定的一種基本生理機(jī)制，機(jī)體通過細(xì)胞凋亡消除損傷、衰老與突變的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞凋亡異常(過高或過低)時(shí)，可導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。已知與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因或蛋白有很多，如Caspase家族[4]、c-fos基因[5]、Bcl-2 基因[6]等。Survivin 基因是一種凋亡抑制基因，具有很強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[7-8]。Survivin基因是否會(huì)對(duì)鈍挫傷引起的細(xì)胞凋亡有影響呢?本文通過建立大鼠眼鈍挫傷模型，研究鈍挫傷后晶狀體細(xì)胞凋亡和Survivin基因表達(dá)的特點(diǎn)，并找到兩者之間的關(guān)聯(lián)，為更好地認(rèn)識(shí)外傷性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制提供幫助。
1 材料與方法
1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康成年Wistar大鼠45只(青島市動(dòng)物中心提供)，體質(zhì)量200～250 g，雌雄兼有，實(shí)驗(yàn)前行裂隙燈顯微鏡檢查無眼前節(jié)病變。所有動(dòng)物的飼養(yǎng)及處死均按照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理及使用指南》進(jìn)行。(2)主要試劑及儀器:MK1020細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(武漢博士德工程有限公司)，DAB顯色試劑盒(武漢博士德工程有限公司)，TRIZOL(Invitrigen life technologies公司)，RNA PCR KitVer.3.0(TaKaRa 公司)，TaqDNA聚合酶(TaKaRa公司)。
1.2 方法
1.2.1 動(dòng)物模型的制備及分組 45只成年Wistar大鼠，隨機(jī)選取5只作為正常對(duì)照組，剩余40只按照隨機(jī)原則分為A組、B組、C組、D組，每組10只，100 g·L－1水合氯醛溶液(3 mL·kg－1)腹腔注射致全身麻醉后，用20 g鋼球從20 cm高度落下連續(xù)擊打大鼠一眼100次，制造眼鈍挫傷模型。A組、B組、C組、D組大鼠分別于模型制備成功后1 h、12 h、24 h、48 h后頸椎脫臼法處死，取出晶狀體，作細(xì)胞凋亡及RT-PCR檢測(cè)。
1.2.2 晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用末端脫氧核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記法(TUNEL)原位檢測(cè)晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，鏡下撕取部分晶狀體前囊膜，剩余部分－70℃保存，備用作RT-PCR。晶狀體前囊膜上皮面朝下，平鋪到3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)處理過的載玻片上，40 g·L－1多聚甲醛固定30 min后，加標(biāo)記緩沖液，終止后加入用抗體稀釋液稀釋的生物素化抗地高辛抗體及SABC，DAB顯色。經(jīng)上述處理后，凋亡細(xì)胞核被染成棕色或褐色，正常細(xì)胞核為藍(lán)色。200倍顯微鏡下觀察，隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)。
1.2.3 Survivin基因表達(dá)的檢測(cè) 采用RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量檢測(cè)Survivin基因的表達(dá)。以大鼠5-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)基因序列作內(nèi)參照物。應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物。引物由上海生工技術(shù)有限公司合成，引物序列如下:Survivin上游引物為 5’-CCCGATCTGGCAGATGTACCT-3’，下游引物為 5’-GGTCAGTTCTTCCACCTGCTTCT-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)271 bp;GAPDH上游引物為5’-GGCTGCCTTCTCTTGTGACAA-3’，下游引物為5’-GGAAGATGGTGATGGGTTTCC-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)173 bp。用TRIZOL提取組織總RNA，按照試劑盒步驟進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及DNA的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后用紫外線圖像成像系統(tǒng)觀察，并進(jìn)行半定量分析，每份標(biāo)本均觀察到271 bp的Survivin擴(kuò)增條帶和173 bp的GAPDH基因特異性擴(kuò)增條帶，證實(shí)逆轉(zhuǎn)錄所得的cDNA完整以及PCR反應(yīng)成功。反轉(zhuǎn)錄條件:42℃ 30 min，99℃ 5 min，0～4℃ 5 min。PCR條件:94℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃(內(nèi)參引物)或58℃(Survivin引物)30 s，72 ℃ 1.5 min，共28個(gè)循環(huán)，72 ℃終末延伸10 min。
1.3 凋亡率及Survivin mRNA相對(duì)含量測(cè)定 光鏡下觀察TUNEL染色標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本在200倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野的全部細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，計(jì)算凋亡細(xì)胞所占百分比即為晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率。將5 μL RNA用超純水稀釋至200 μL后，放入紫外分光光度計(jì)的比色杯中，測(cè)定260 nm、280 nm 處吸光度(optical density，OD)值，計(jì)算OD260/OD280的值為Survivin mRNA相對(duì)含量。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，通過t檢驗(yàn)對(duì)凋亡率進(jìn)行分析，用Spearman法進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 凋亡特點(diǎn) 正常對(duì)照組及A組大鼠晶狀體上皮中未見凋亡細(xì)胞。B組、C組、D組檢測(cè)到凋亡細(xì)胞，3組凋亡率分別為(14.54 ±2.98)%、(41.54 ±6.07)%及(25.38±4.72)%，B 組與 C 組、C 組和 D組凋亡率比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.19、6.64，均為P＜0.05)，說明凋亡高峰出現(xiàn)在鈍挫傷后24 h(圖1)。
Figure 1 LEC at 24 hours after eye contusion(×100) 大鼠眼鈍挫傷后24 h晶狀體上皮細(xì)胞(×100)
2.2 Survivin的表達(dá) 大鼠Survivin基因的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為271 bp，GAPDH的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為173 bp。正常對(duì)照組及A組大鼠晶狀體上皮細(xì)胞未檢測(cè)到Survivin的表達(dá)。B組、C組、D組均檢測(cè)到Survivin的表達(dá)(圖2)，相對(duì)表達(dá)量分別為:0.357±0.105、0.582 ±0.131 及0.386 ±0.143。
2.3 Survivin基因與凋亡的關(guān)系 B組、C組、D組中Survivin基因的表達(dá)量均與凋亡率呈顯著負(fù)相關(guān)(r分別為 －0.795、－0.806、－0.832，均為 P ＜0.05)。
Figure 2 PCR electrophoresis photograph of GAPDH and group B，C，D.M:Mark;Line 1，2:GAPDH;3:Group B;4:Group C;5:Group D GAPDH 及B組、C組、D組PCR電泳圖。M為Mark，1、2泳道為內(nèi)參 GAPDH，3、4、5分別為 B 組、C 組、D組
3 討論
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞遵循自身固有程序結(jié)束生命的一種現(xiàn)象，具有獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及能量依賴的生化機(jī)制，對(duì)于維持組織生長(zhǎng)、免疫調(diào)節(jié)、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等起到重要作用，凋亡功能一旦失調(diào)就會(huì)造成疾病的發(fā)生[9-10]。很多原因，如紫外線的照射[11]、重金屬鎘[12]、富勒醇[13]等都可以引起晶狀體上皮細(xì)胞的病理性凋亡，從而導(dǎo)致白內(nèi)障的發(fā)生。眼鈍挫傷不僅可以直接沖擊晶狀體，引起晶狀體上皮細(xì)胞的機(jī)械性損傷，還可以造成眼前節(jié)的急性炎癥，產(chǎn)生一些炎癥介質(zhì)，改變房水的成分[14]，這些因素都可能影響到晶狀體上皮細(xì)胞的代謝從而使其發(fā)生病理性凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過鋼球連續(xù)打擊制造眼鈍挫傷模型，結(jié)果表明，細(xì)胞凋亡在傷后12 h已經(jīng)出現(xiàn)，說明鈍挫傷發(fā)生后的較短時(shí)間內(nèi)，凋亡程序就會(huì)啟動(dòng)。在鈍挫傷發(fā)生24 h時(shí)，凋亡達(dá)到高峰，48 h時(shí)細(xì)胞的凋亡數(shù)量反而減少，這說明晶狀體本身有阻止凋亡繼續(xù)發(fā)生、維護(hù)正常生理結(jié)構(gòu)的功能。當(dāng)然，如果改變本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭锈g挫傷的強(qiáng)度、力度或者是致傷方式，凋亡的特點(diǎn)也有可能改變。
Survivin屬于凋亡抑制蛋白家族中的一員，在大多數(shù)成年組織中不表達(dá)，但是在大多數(shù)腫瘤組織中表達(dá)，它能夠抑制Caspases并阻止細(xì)胞凋亡，除了具有抑制凋亡、促進(jìn)增生作用外，它還能夠調(diào)控細(xì)胞周期[15-16]。本研究發(fā)現(xiàn)，正常的成年大鼠晶狀體上皮細(xì)胞中未見Survivin的表達(dá)，用鋼球打擊后12 h可見有少量表達(dá)，24 h時(shí)表達(dá)最多。說明鈍挫傷不僅可以引起凋亡的發(fā)生，同時(shí)可以刺激大鼠Survivin基因的表達(dá)，而且，隨著鈍挫傷發(fā)生時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡會(huì)經(jīng)過自身的抗凋亡機(jī)制逐漸修復(fù)，Survivin基因的表達(dá)也逐漸減少，這提示我們Survivin基因可能在凋亡的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用。
通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，B組、C組、D組晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡率與Survivin的表達(dá)量存在負(fù)相關(guān)，從而說明Survivin基因?qū)ρ垅g挫傷引起的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡可能存在的抑制作用。然而，晶狀體上皮細(xì)胞凋亡過程中，可能有很多的基因、蛋白參與，如果能采用基因靜默的手段來阻止Survivin基因的表達(dá)，可能對(duì)結(jié)果的判斷更有說服力。目前對(duì)Survivin的臨床研究多集中在腫瘤治療方面，而對(duì)通過增加Survivin表達(dá)來減少細(xì)胞凋亡的藥物研究很少。王俊萍等[17]發(fā)現(xiàn)，絲裂霉素能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞表達(dá)Survivin基因，如果能夠發(fā)掘到這一類藥物，就可以用于很多像外傷性白內(nèi)障一樣因正常細(xì)胞凋亡過多而引起的疾病，從而為這類疾病的治療提供新的手段。
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劉建偉 趙桂秋 杜兆東 張麗娜 張振華
眼鈍挫傷在臨床上很常見，鈍挫傷可導(dǎo)致多種眼部病變，而外傷性白內(nèi)障是眼鈍挫傷后最常見的并發(fā)癥之一，它可以引起視功能的嚴(yán)重?fù)p傷[1]。外傷性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制目前還未明了。研究表明，晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡是除先天性白內(nèi)障以外所有類型白內(nèi)障形成的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)[2-3]。細(xì)胞凋亡是機(jī)體維持自身穩(wěn)定的一種基本生理機(jī)制，機(jī)體通過細(xì)胞凋亡消除損傷、衰老與突變的細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞凋亡異常(過高或過低)時(shí)，可導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生。已知與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因或蛋白有很多，如Caspase家族[4]、c-fos基因[5]、Bcl-2 基因[6]等。Survivin 基因是一種凋亡抑制基因，具有很強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用[7-8]。Survivin基因是否會(huì)對(duì)鈍挫傷引起的細(xì)胞凋亡有影響呢?本文通過建立大鼠眼鈍挫傷模型，研究鈍挫傷后晶狀體細(xì)胞凋亡和Survivin基因表達(dá)的特點(diǎn)，并找到兩者之間的關(guān)聯(lián)，為更好地認(rèn)識(shí)外傷性白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)制提供幫助。
1 材料與方法
1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康成年Wistar大鼠45只(青島市動(dòng)物中心提供)，體質(zhì)量200～250 g，雌雄兼有，實(shí)驗(yàn)前行裂隙燈顯微鏡檢查無眼前節(jié)病變。所有動(dòng)物的飼養(yǎng)及處死均按照美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(NIH)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理及使用指南》進(jìn)行。(2)主要試劑及儀器:MK1020細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(武漢博士德工程有限公司)，DAB顯色試劑盒(武漢博士德工程有限公司)，TRIZOL(Invitrigen life technologies公司)，RNA PCR KitVer.3.0(TaKaRa 公司)，TaqDNA聚合酶(TaKaRa公司)。
1.2 方法
1.2.1 動(dòng)物模型的制備及分組 45只成年Wistar大鼠，隨機(jī)選取5只作為正常對(duì)照組，剩余40只按照隨機(jī)原則分為A組、B組、C組、D組，每組10只，100 g·L－1水合氯醛溶液(3 mL·kg－1)腹腔注射致全身麻醉后，用20 g鋼球從20 cm高度落下連續(xù)擊打大鼠一眼100次，制造眼鈍挫傷模型。A組、B組、C組、D組大鼠分別于模型制備成功后1 h、12 h、24 h、48 h后頸椎脫臼法處死，取出晶狀體，作細(xì)胞凋亡及RT-PCR檢測(cè)。
1.2.2 晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的檢測(cè) 采用末端脫氧核酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記法(TUNEL)原位檢測(cè)晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡，鏡下撕取部分晶狀體前囊膜，剩余部分－70℃保存，備用作RT-PCR。晶狀體前囊膜上皮面朝下，平鋪到3-氨丙基三乙氧基硅烷(APES)處理過的載玻片上，40 g·L－1多聚甲醛固定30 min后，加標(biāo)記緩沖液，終止后加入用抗體稀釋液稀釋的生物素化抗地高辛抗體及SABC，DAB顯色。經(jīng)上述處理后，凋亡細(xì)胞核被染成棕色或褐色，正常細(xì)胞核為藍(lán)色。200倍顯微鏡下觀察，隨機(jī)選取5個(gè)視野計(jì)數(shù)。
1.2.3 Survivin基因表達(dá)的檢測(cè) 采用RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)半定量檢測(cè)Survivin基因的表達(dá)。以大鼠5-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)基因序列作內(nèi)參照物。應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物。引物由上海生工技術(shù)有限公司合成，引物序列如下:Survivin上游引物為 5’-CCCGATCTGGCAGATGTACCT-3’，下游引物為 5’-GGTCAGTTCTTCCACCTGCTTCT-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)271 bp;GAPDH上游引物為5’-GGCTGCCTTCTCTTGTGACAA-3’，下游引物為5’-GGAAGATGGTGATGGGTTTCC-3’，擴(kuò)增片段長(zhǎng)173 bp。用TRIZOL提取組織總RNA，按照試劑盒步驟進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及DNA的擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物電泳后用紫外線圖像成像系統(tǒng)觀察，并進(jìn)行半定量分析，每份標(biāo)本均觀察到271 bp的Survivin擴(kuò)增條帶和173 bp的GAPDH基因特異性擴(kuò)增條帶，證實(shí)逆轉(zhuǎn)錄所得的cDNA完整以及PCR反應(yīng)成功。反轉(zhuǎn)錄條件:42℃ 30 min，99℃ 5 min，0～4℃ 5 min。PCR條件:94℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃(內(nèi)參引物)或58℃(Survivin引物)30 s，72 ℃ 1.5 min，共28個(gè)循環(huán)，72 ℃終末延伸10 min。
1.3 凋亡率及Survivin mRNA相對(duì)含量測(cè)定 光鏡下觀察TUNEL染色標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本在200倍顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野的全部細(xì)胞數(shù)和凋亡細(xì)胞數(shù)，計(jì)算凋亡細(xì)胞所占百分比即為晶狀體上皮細(xì)胞凋亡率。將5 μL RNA用超純水稀釋至200 μL后，放入紫外分光光度計(jì)的比色杯中，測(cè)定260 nm、280 nm 處吸光度(optical density，OD)值，計(jì)算OD260/OD280的值為Survivin mRNA相對(duì)含量。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，通過t檢驗(yàn)對(duì)凋亡率進(jìn)行分析，用Spearman法進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 凋亡特點(diǎn) 正常對(duì)照組及A組大鼠晶狀體上皮中未見凋亡細(xì)胞。B組、C組、D組檢測(cè)到凋亡細(xì)胞，3組凋亡率分別為(14.54 ±2.98)%、(41.54 ±6.07)%及(25.38±4.72)%，B 組與 C 組、C 組和 D組凋亡率比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.19、6.64，均為P＜0.05)，說明凋亡高峰出現(xiàn)在鈍挫傷后24 h(圖1)。
Figure 1 LEC at 24 hours after eye contusion(×100) 大鼠眼鈍挫傷后24 h晶狀體上皮細(xì)胞(×100)
2.2 Survivin的表達(dá) 大鼠Survivin基因的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為271 bp，GAPDH的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為173 bp。正常對(duì)照組及A組大鼠晶狀體上皮細(xì)胞未檢測(cè)到Survivin的表達(dá)。B組、C組、D組均檢測(cè)到Survivin的表達(dá)(圖2)，相對(duì)表達(dá)量分別為:0.357±0.105、0.582 ±0.131 及0.386 ±0.143。
2.3 Survivin基因與凋亡的關(guān)系 B組、C組、D組中Survivin基因的表達(dá)量均與凋亡率呈顯著負(fù)相關(guān)(r分別為 －0.795、－0.806、－0.832，均為 P ＜0.05)。
Figure 2 PCR electrophoresis photograph of GAPDH and group B，C，D.M:Mark;Line 1，2:GAPDH;3:Group B;4:Group C;5:Group D GAPDH 及B組、C組、D組PCR電泳圖。M為Mark，1、2泳道為內(nèi)參 GAPDH，3、4、5分別為 B 組、C 組、D組
3 討論
細(xì)胞凋亡是細(xì)胞遵循自身固有程序結(jié)束生命的一種現(xiàn)象，具有獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)及能量依賴的生化機(jī)制，對(duì)于維持組織生長(zhǎng)、免疫調(diào)節(jié)、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定等起到重要作用，凋亡功能一旦失調(diào)就會(huì)造成疾病的發(fā)生[9-10]。很多原因，如紫外線的照射[11]、重金屬鎘[12]、富勒醇[13]等都可以引起晶狀體上皮細(xì)胞的病理性凋亡，從而導(dǎo)致白內(nèi)障的發(fā)生。眼鈍挫傷不僅可以直接沖擊晶狀體，引起晶狀體上皮細(xì)胞的機(jī)械性損傷，還可以造成眼前節(jié)的急性炎癥，產(chǎn)生一些炎癥介質(zhì)，改變房水的成分[14]，這些因素都可能影響到晶狀體上皮細(xì)胞的代謝從而使其發(fā)生病理性凋亡。本實(shí)驗(yàn)通過鋼球連續(xù)打擊制造眼鈍挫傷模型，結(jié)果表明，細(xì)胞凋亡在傷后12 h已經(jīng)出現(xiàn)，說明鈍挫傷發(fā)生后的較短時(shí)間內(nèi)，凋亡程序就會(huì)啟動(dòng)。在鈍挫傷發(fā)生24 h時(shí)，凋亡達(dá)到高峰，48 h時(shí)細(xì)胞的凋亡數(shù)量反而減少，這說明晶狀體本身有阻止凋亡繼續(xù)發(fā)生、維護(hù)正常生理結(jié)構(gòu)的功能。當(dāng)然，如果改變本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭锈g挫傷的強(qiáng)度、力度或者是致傷方式，凋亡的特點(diǎn)也有可能改變。
Survivin屬于凋亡抑制蛋白家族中的一員，在大多數(shù)成年組織中不表達(dá)，但是在大多數(shù)腫瘤組織中表達(dá)，它能夠抑制Caspases并阻止細(xì)胞凋亡，除了具有抑制凋亡、促進(jìn)增生作用外，它還能夠調(diào)控細(xì)胞周期[15-16]。本研究發(fā)現(xiàn)，正常的成年大鼠晶狀體上皮細(xì)胞中未見Survivin的表達(dá)，用鋼球打擊后12 h可見有少量表達(dá)，24 h時(shí)表達(dá)最多。說明鈍挫傷不僅可以引起凋亡的發(fā)生，同時(shí)可以刺激大鼠Survivin基因的表達(dá)，而且，隨著鈍挫傷發(fā)生時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡會(huì)經(jīng)過自身的抗凋亡機(jī)制逐漸修復(fù)，Survivin基因的表達(dá)也逐漸減少，這提示我們Survivin基因可能在凋亡的發(fā)生、發(fā)展中起到了重要作用。
通過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，B組、C組、D組晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡率與Survivin的表達(dá)量存在負(fù)相關(guān)，從而說明Survivin基因?qū)ρ垅g挫傷引起的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡可能存在的抑制作用。然而，晶狀體上皮細(xì)胞凋亡過程中，可能有很多的基因、蛋白參與，如果能采用基因靜默的手段來阻止Survivin基因的表達(dá)，可能對(duì)結(jié)果的判斷更有說服力。目前對(duì)Survivin的臨床研究多集中在腫瘤治療方面，而對(duì)通過增加Survivin表達(dá)來減少細(xì)胞凋亡的藥物研究很少。王俊萍等[17]發(fā)現(xiàn)，絲裂霉素能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞表達(dá)Survivin基因，如果能夠發(fā)掘到這一類藥物，就可以用于很多像外傷性白內(nèi)障一樣因正常細(xì)胞凋亡過多而引起的疾病，從而為這類疾病的治療提供新的手段。
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