韓平平，蔡慧明，周美艷，劉亞君，張明陽，戴體俊

(徐州醫(yī)學院1.藥學院，2.麻醉學院，3.麻醉藥理教研室，江蘇 徐州 221002)

全身麻醉的作用包括鎮(zhèn)痛、催眠、意識喪失、認知障礙、肌松和抑制異常應激反應等諸多方面，其中催眠鎮(zhèn)痛最為重要，但到目前為止其作用機制仍不甚清楚。以往研究表明，GABA-A受體［1］、甘氨酸受體［2］、N-甲基-D-天冬氨酸受體［3］和煙堿受體［4］與全麻藥催眠和鎮(zhèn)痛有關。這些靶位主要是配體門控離子通道。5-羥色胺(血清素)3受體(serotonin 3 receptor，5-HT3)受體也是一種配體門控離子通道［5］。已有研究表明吸入麻醉藥對5-HT3受體有調(diào)控作用［6－7］?，F(xiàn)有研究表明5-HT3受體可能對乳化七氟烷的催眠、鎮(zhèn)痛有調(diào)制作用［8］。曾有研究表明5-HT3受體在睡眠中起到重要的調(diào)節(jié)作用［9］，大鼠ip給予5-HT3受體阻滯劑昂丹司瓊能夠減少覺醒、增加慢波睡眠和快眼動相睡眠［10］。動物實驗已證明全身應用昂丹司瓊對慢性神經(jīng)病理性疼痛有很好的療效［11］，同時減輕丙泊酚注射引起的疼痛［12］，對炎癥刺激有效［13］等。異氟烷為臨床常用的吸入全麻藥，因其毒性低，代謝率低，理化性質(zhì)接近理想，有一定的鎮(zhèn)痛作用［14］，注射給藥也能達到麻醉作用［15］。昂丹司瓊常用于異氟烷麻醉手術后的止吐，但是昂丹司瓊能否影響異氟烷的催眠、鎮(zhèn)痛作用則未見報道。因此，本實驗觀察兩藥合用時，對異氟烷的催眠和鎮(zhèn)痛作用的影響，并探討異氟烷的催眠、鎮(zhèn)痛作用與5-HT3受體的關系。

1 材料與方法

1.1 藥品及動物

異氟烷購自山東魯南貝特制藥有限公司，批號060902;昂丹司瓊購自湖北賽博化工有限公司，批號100706。

昆明種小鼠雌雄兼用，體質(zhì)量18～22 g，清潔級，由徐州醫(yī)學院實驗動物中心提供。實驗前2 d使小鼠熟悉實驗室環(huán)境，自由攝食飲水，為避免小鼠各時間段可能出現(xiàn)行為差異對研究結(jié)果的影響，實驗于每日同一時間段進行。

1.2 檢測昂丹司瓊對異氟烷催眠的作用

1.2.1 催醒實驗

昆明種小鼠40只，♀♂兼用，分為正常對照(ip給生理鹽水)和昂丹司瓊 1，2和4 mg·kg－14組，15 min 后 ip 異氟烷1.0 ml·kg－1，記錄從翻正反射消失到翻正反射恢復翻正反射持續(xù)時間。

1.2.2 測定催眠ED50

采用序貫法［16］給藥進行實驗。30只昆明小鼠分為2組，每組15只。小鼠分別ip給予生理鹽水或昂丹司瓊2 mg·kg－1，15 min 后 ip 異氟烷 1.12，0.90，0.72，0.58 和0.46 ml·kg－1(按1∶0.8等比劑量)。以小鼠翻正反射消失10 s為睡眠指標。若小鼠翻正反射消失，下一只小鼠異氟烷減低一個劑量級;若翻正反射未消失，下一只小鼠異氟烷增加一個劑量級。采用 Dixon-Mood 法［15］計算 ED50。

1.3 檢測昂丹司瓊對異氟烷鎮(zhèn)痛的作用

1.3.1 扭體法［17］

昆明種小鼠80只，♀♂各半，隨機分為正常對照組，昂丹司瓊 1，2 和 4 mg·kg－1，異 氟烷1.0 ml·kg－1，昂丹司瓊 1，2 和 4 mg·kg－1+ 異氟烷組。小鼠先ip給予生理鹽水或昂丹司瓊，10 min后，合用組 sc 給予異氟烷 1.0 ml·kg－1，5 min 后均再 ip 0.6%冰醋酸溶液0.01 ml·g－1，記錄 15 min 內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。

1.3.2 熱板法［17］

雌性昆明小鼠置于恒溫熱板 (55±0.5)℃，記錄從其足部接觸熱板到開始添后足的時間(s)作為熱板法痛閾值(pain threshold in hot plate test，HPPT)。給藥前每只小鼠測2次HPPT，間隔5 min，選基礎痛閾在5～30 s小鼠。給藥后，限定停留時間不超過60 s，超過者，其HPPT記為60 s。實驗分組同扭體法。8組小鼠先ip給予生理鹽水或昂丹司瓊，昂丹司瓊+異氟烷組10 min后ip給予異氟烷0.4 ml·kg－1。觀察各組小鼠末次給藥后 5，10，15，20和25 min的HPPT變化。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 昂丹司瓊對異氟烷催眠作用的影響

2.1.1 催醒實驗

表1結(jié)果顯示，昂丹司瓊對異氟烷的催眠作用無影響，翻正反射持續(xù)時間無顯著差異。

Tab.1 Effect of ondansetron on righting reflex disappearance time in isoflurane given mice

2.1.2 昂丹司瓊對異氟烷催眠ED50的影響

昂丹司瓊+異氟烷組和單獨異氟烷組催眠ED50分別為 0.84(0.69 ～ 1.02)ml·kg－1和 0.64(0.48 ～0.86)ml·kg－1，兩者無統(tǒng)計學差異。

2.2 昂丹司瓊對異氟烷鎮(zhèn)痛作用的影響

2.2.1 扭體法

表2結(jié)果顯示，與正常對照組比較，昂丹司瓊4 mg·kg－1和異氟烷 1.0 ml·kg－1顯著降低正常清醒小鼠的扭體次數(shù)(P＜0.01)。給予昂丹司瓊后再給予異氟烷1.0 ml·kg－1，小鼠扭體次數(shù)進一步減少，但與異氟烷 1.0 ml·kg－1麻醉組無顯著差異。

Tab.2 Effect of ondansetron on writhing times in conscious and isoflurance given mice

2.2.2 熱板法

表3結(jié)果顯示，昂丹司瓊對正常清醒小鼠HPPT無明顯影響。小鼠ip給予異氟烷后，引起HPPT增加(P＜0.01);與異氟烷麻醉組比，昂丹司瓊+異氟烷兩藥合用組HPPT差異無統(tǒng)計學意義。

Tab.3 Effect of ondansetron on hot-plate pain threshold(HPPT)in conscious and isoflurane given mice

3 討論

本實驗表明，昂丹司瓊對異氟烷催眠小鼠翻正反射消失的持續(xù)時間、異氟烷催眠ED50、扭體次數(shù)和熱板法HTTP均無明顯影響。催醒和催眠ED50實驗結(jié)果表明，昂丹司瓊對異氟烷的催眠作用無明顯影響，提示5-HT3受體可能不是異氟烷的催眠作用靶點。

為了避免動物出現(xiàn)明顯的中樞抑制而影響實驗結(jié)果，本實驗選擇了異氟烷的亞麻醉劑量建立鎮(zhèn)痛模型。此模型異氟烷的鎮(zhèn)痛作用明顯，對小鼠正?；顒佑绊戄p微，小鼠的翻正反射并不消失。扭體實驗中，為了避免腹腔同時注射異氟烷和醋酸溶液可能發(fā)生理化相互作用，因此采用sc給予異氟烷。

在熱板實驗中，昂丹司瓊對異氟烷小鼠HPPT無明顯影響，提示5-HT3受體可能不是異氟烷抗熱刺激傷害作用的靶位。馬濤等［18］曾采用鞘內(nèi)注射另一種5-HT3受體阻斷劑托烷司瓊，發(fā)現(xiàn)其不能拮抗異氟烷的抗熱刺激傷害作用。本實驗結(jié)果與其一致。醋酸注入小鼠腹腔內(nèi)，會刺激臟層和壁層腹膜，引起較大面積較長的炎性疼痛。昂丹司瓊能夠減少小鼠的扭體次數(shù)，這可能是由于昂丹司瓊拮抗了受化學刺激的組織釋放的致痛物質(zhì)5-HT對5-HT3受體的激活作用。

綜上所述，昂丹司瓊用于異氟烷麻醉后止吐時，對異氟烷的催眠、鎮(zhèn)痛作用無顯著影響;由于昂丹司瓊是5-HT3受體阻滯劑，提示5-HT3受體可能不是異氟烷催眠和鎮(zhèn)痛作用的靶位。

［1］Yan M，Dai TJ.The relationship between the analgesic and hypnotic effects of volatile anesthetic and GABAAreceptor［J］.Chin Pharmacol Bull(中國藥理學通報)，2004，20(5):521-523.

［2］Chen Y，Dai TJ，Zeng YM.Strychnine-sensitive glycine receptors mediate analgesia induced by emulsified inhalation anaesthetics in thermal nociception but not in chemical nociception［J］.Basic Clin Pharmacol Toxicol，2007，100(3):165-169.

［3］Hang LH， Dai TJ， Zeng YM. Relationship between NMDA receptors and the hypnotic and analgesic effects of inhalation anesthetics in mice［J］.Chin J Anesthesiol(中華麻醉學雜志)，2006，26(3):269-271.

［4］Gong CZ，Li HP，Dai TJ，Zeng YM.Influence of intracerebroventricular or intrathecal injection of nicotine on hypnotic and analgesia effect of enflurane［J］.Chin J Pharmacol Toxicol(中國藥理學與毒理學雜志)，2007，21(5):399-403.

［5］Faerber L，Drechsler S，Ladenburger S，Gschaidmeier H，F(xiàn)ischer W.The neuronal 5-HT3receptor network after 20 years of research-evolving concepts in management of pain and inflammation［J］.Eur J Pharmacol，2007，560(1):1-8.

［6］Stevens RJ，Rüsch D，Davies PA，Raines DE.Molecular properties important for inhaled anesthetic action on human 5-HT3A receptors［J］.Anesth Analg，2005，100(6):1696-1703.

［7］Stevens R，Rüsch D，Solt K，Raines DE，Davies PA.Modulation of human 5-hydroxytryptamine type 3AB receptors by volatile anesthetics and n-alcohols［J］.J Pharmacol Exp Ther，2005，314(1):338-345.

［8］Hang LH，Shao DH，Wang H，Yang JP.Involvement of 5-hydroxytryptamine type 3 receptors in sevoflurane-induced hypnotic and analgesic effects in mice［J］.Pharmacol Rep，2010，62(4):621-626.

［9］Staner L，Linker T，Toussaint M，Danjou P，Roegel JC，Luthringer R，et al.Effects of the selective activation of 5-HT3receptors on sleep:a polysomnographic study in healthy volunteers［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2001，11(4):301-305.

［10］Adrien J， Tissier MH， Lanfumey L，Haj-Dahmane S，Jolas T，F(xiàn)ranc B，et al.Central action of 5-HT3receptor ligands in the regulation of sleep-wakefulness and raphe neuronal activity in the rat［J］.Neuropharmacology，1992，31(6):519-529.

［11］Liu F，Ge HJ，Zhou R.Effect of ondansetron on thermal pain threshold in rats with experimental neuropathic pain［J］.Acta Acad Med Mil Tert(第三軍醫(yī)大學學報)，2007，29(22):1271-1273.

［12］Reddy MS，Chen FG，Ng HP.Effect of ondansetron pretreatment on pain after rocuronium and propofol injection:a randomised，double-blind controlled comparison with lidocaine［J］.Anaesthesia，2001，56(9):902-905.

［13］Farber L，Haus U，Spath M，Drechsler S.Physiology and pathophysiology of the 5-HT3receptor［J］.Scand J Rheumatol Suppl，2004，119:2-8.

［14］Wu WF.Isoflurane［M］∥Dai TJ，Yu T.Anesthetic Pharmacology(麻醉藥理學)，2rd ed.Beijing:People's Medical Publishing House，2011:70-72.

［15］Dai TJ，Ye M，F(xiàn)u Y.Effects of volatile anesthetics injection in animals［J］.J Clin Anesthesiol(臨床麻醉學雜志)，1997，13(5):262-263.

［16］Tai TJ. Determination of ketamine-induced hypnotic ED50and LD50［M］∥Dai TJ.Anesthetic Founctional Experiment(麻醉機能實驗學).Beijing:Science Publishing House，2009:207-209.

［17］Song BW，Xu SY，Ma CG.Experiment method of analgestic drugs［M］∥Xu SY，Bian RL，Chen X.Methodology of Pharmacological(藥理實驗方法學).3rd ed.Beijing:People's Medical Publishing House，2002:882-887.

［18］Ma T，Ni J，Wang Q，Chen J，Xia JH，Dai TJ.Effect of tropisetron on analgesic action of isoflurane［J］.Acta Acad Med Xuzhou(徐州醫(yī)學院學報)，2008，28(9):623-625.