黃富宏 ，王 健，茅 淵，梁顯揚，盧小蘭

(1.江蘇省揚州市第一人民醫(yī)院，江蘇 揚州 225000;2.江蘇省揚州市食品藥品檢驗所，江蘇 揚州 225000;3.江蘇省揚州市蘇北人民醫(yī)院，江蘇 揚州 225000)

小青龍顆粒為傳統(tǒng)的中藥制劑，主要由麻黃、桂枝、白芍、干姜、細辛、炙甘草、法半夏、五味子組成。具有解表化飲、止咳平喘功效，用于風寒水飲、惡寒發(fā)熱、無汗、喘咳痰稀等[1]。高效液相色譜法測定甘草酸銨含量有文獻報道，但對小青龍顆粒中甘草酸銨進行含量測定尚無文獻報道。筆者采用高效液相色譜法對小青龍顆粒中主要成分之一甘草酸銨進行含量測定，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1200型液相色譜儀;Sartorius CP225D型電子分析天平;KH-500B型超聲波清洗器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。甘草酸銨對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110731-201013);甲醇(色譜純);水(重蒸餾水);小青龍顆粒(湖北紐蘭藥業(yè)有限公司，批號為20091101;廣東在田藥業(yè)有限公司，批號為10107001;吉林羅邦藥業(yè)有限公司，批號為20081202)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Alltima C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm);流動相:水-乙腈-冰醋酸(65∶35∶2.5);流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:254 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取甘草酸銨對照品0.019 02 g，置50 mL容量瓶中，加甲醇-磷酸(13∶7)制成每1 mL含0.380 4 mg的溶液，作為對照品溶液。取樣品約2.4 g(2份)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，超聲處理20 min。過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)過濾，即得供試品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:按處方中藥味的比例，配制不含甘草的群藥，按其工藝制成陰性對照樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液并測定。結(jié)果在甘草酸銨對照品相同保留時間處未顯色譜峰。高效液相色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，7.5 mL對照品溶液，置25 mL容量瓶中，再加甲醇-磷酸(13∶7)稀釋至刻度，搖勻，在上述的色譜條件下，進樣2次，每次10μL。將峰面積和質(zhì)量濃度進行回歸處理，得回歸方程為 Y=0.128 7 X+0.202 5，r=1.0(n=6)，線 性 范 圍 為15.2～114.1μg/mL。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續(xù)進樣5次，測定峰面積。結(jié)果峰面積的 RSD為0.98%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:按供試品溶液的制備方法制得供試品溶液，每隔2h進樣1次，共測12h。結(jié)果的 RSD為1.0%，表明峰面積基本無變化，說明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:取約1.2 g小青龍顆粒樣品，共6份，分別加入0.053 3 g/L的對照品溶液3，5，7 mL，依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 甘草酸銨加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

通過對照品溶液標準曲線計算，樣品平均質(zhì)量濃度為0.584 mg/g。稱取小青龍顆粒約2.4 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中。精密量取甲醇-磷酸(13∶7)25 mL，稱重，超聲20 min。放冷，補重，過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)過濾，作為供試品溶液。依法測定含量，結(jié)果見表2。

表2 不同廠家樣品的含量測定結(jié)果

3 討論

文獻報道的甘草酸銨檢測波長有238，250 nm不等[2-3]。本試驗中應(yīng)用紫外分光光度計測定甘草酸銨的紫外吸收光譜圖，結(jié)果在254 nm處有最大吸收，故選擇254 nm為檢測波長。試用了甲醇-水、乙腈-磷酸、乙腈-磷酸二氫鉀等多種流動相體系，結(jié)果表明，乙腈-0.017 mol/L磷酸(35∶65)最佳，各成分能得到基線分離，且保留時間適中?？疾旒状?、乙醇和甲醇-磷酸(13∶7)對樣品中甘草酸銨提取的影響。結(jié)果表明，甲醇-磷酸(13∶7)能夠更好地提取樣品中的甘草酸銨，所以采用甲醇-磷酸(13∶7)作為樣品的提取溶劑?？疾炝顺?0，20，30 min對甘草酸銨的含量影響。結(jié)果10 min提取量為20 min的90%，而提取30 min的甘草酸銨含量與提取20 min的基本相同，所以選擇提取時間為20 min。

小青龍顆粒收載于2010年版《中國藥典(一部)》[3]，3廠家的成分，性狀，功能主治一樣，成分為麻黃，桂枝、白芍、干姜、細辛、甘草、法半夏、五味子、輔料為蔗糖。不同廠家、不同批次樣品之間的含量差異較大，可能與投料所用的甘草流浸膏有關(guān)。對小青龍顆粒的質(zhì)量，特別是對甘草流浸膏的質(zhì)量進行控制很有必要，有關(guān)工作還有待于進一步研究。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版杜，2010:505.

[2]劉 源.高效液相色譜法測定利肺片中甘草酸含量[J].中國藥業(yè)，2012，1(21):27-28.

[3]張 克.HPLC法測定蓋艾康膠囊中甘草酸含量[J].中醫(yī)研究，2011，4(24):20.