吳朝暉 ，李 根 ，周 靜

(1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，福建 福州 350004;2.四川省成都市婦幼保健院，四川 成都 610041;3.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041)

長春西汀屬吲哚類生物堿，為腦血管擴張藥，能抑制磷酸二酯酶活性，增加血管平滑肌松弛信使CGMP的作用而選擇性地增加腦血流量，還能抑制血小板凝集，降低人體血液黏度，增加紅細(xì)胞變形力，改善血液流動性和微循環(huán)，促進腦組織攝取葡萄糖，增加腦耗氧量，改善腦代謝等[1]。其注射液為單方制劑(2 mL∶10 mg)，高效液相色譜含量測定方法一般以甲醇-碳酸銨-乙醚體系為流動相，分離效果不十分理想[2]。本研究中，筆者建立以甲醇-碳酸銨-四氫呋喃體系為流動相的反相高效液相色譜(RP-HPLC)法，測定長春西汀注射液中長春西汀的含量，分離效果更佳，重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、紫外檢測器(美國安捷倫公司);電子天平(瑞士Mettler Toledo公司)。長春西汀注射液(市售品，批號110301，110302，110303);長春西汀對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為RS31/031，純度為99.7%);黃體酮(內(nèi)標(biāo)，中國藥品生物制品檢定所，批號為200307);甲醇、四氫呋喃為色譜純(Merck)，水為Milli-Q去離子水;碳酸銨(天津博迪化工，分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);柱溫:25℃;流動相:甲醇-13 mmol/L碳酸銨水溶液-四氫呋喃(100∶16∶5);流速:1.0 mL/min;檢測波長:274 nm;進樣量:20μL。按上述色譜條件試驗，色譜圖見圖1。長春西汀保留時間7.23 min，內(nèi)標(biāo)保留時間11.31 min;長春西汀與內(nèi)標(biāo)分離度大于1.5，分離效果良好，理論板數(shù)按長春西汀計算為6 580。

2.2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

精密量取本品2 mL，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用流動相稀釋制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得供試品溶液。稱取40℃真空干燥至恒重的長春西汀對照品約20 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并用流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。取黃體酮約80 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并用流動相稀釋至刻度，作為內(nèi)標(biāo)溶液。稱取處方中不含長春西汀的輔料粉末，按對照品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:分別取對照品溶液 1.0，1.5，2.5，3.5，5.0 mL，置50 mL容量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)液2 mL，用流動相稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液20μL，按上述條件進樣。以進樣量 Y(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積 X為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程 Y=2.045 1X+3.720 6，r=0.999 1(n=5)。結(jié)果表明，長春西汀質(zhì)量濃度在0.2～1.0 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取對照品溶液20μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD=0.6%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取樣品(批號為110302)6份，按含量測定項下方法測定。以百分含量計算，長春西汀的 RSD為0.9%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗:取重復(fù)性試驗項下的其中一份供試品溶液，放置 0，1，2，3，4，5，8 h，分別按擬訂定的色譜條件測定。結(jié)果峰面積基本不變，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗:精密稱取長春西汀對照品適量，按高、中、低3種質(zhì)量濃度分別制成回收樣品9份，按擬訂的色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 長春西汀加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

取3批長春西汀注射液，分別精密量取2 mL，置25 mL量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2 mL，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣20μL，每樣進樣3次，測定峰面積，按內(nèi)標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號分為110301，110302，110303的樣品中長春西汀含量分別為99.67%，100.27%，99.81%。

3 討論

文獻報道的長春西汀含量測定方法有高氯酸滴定法和高效液相色譜法[3-4]。高氯酸滴定法較為煩瑣，準(zhǔn)確度較差。而之前報道的高效液相色譜法一般選用甲醇-碳酸銨-乙醚體系為流動相，分離效果不是十分理想，主峰保留時間較長，而且與部分雜質(zhì)無法實現(xiàn)基線分離。本試驗在總結(jié)文獻報道方法的基礎(chǔ)上進行優(yōu)化和創(chuàng)新，采用甲醇-碳酸銨-四氫呋喃流動相體系測定長春西汀注射液中長春西汀的含量，通過調(diào)整四氫呋喃比例將主峰保留時間控制在合適的位置，而且實現(xiàn)了主峰與雜質(zhì)的完全分離。

對長春西汀對照品溶液在200～300 nm波長范圍內(nèi)進行紫外光譜掃描。結(jié)果表明，長春西汀在274 nm波長處有最大吸收，故選擇274 nm為檢測波長。本法簡便、準(zhǔn)確、快速、專屬性強、是長春西汀注射液含量測定的較好方法。

[1]盛華明，向左娟，葉君婷，等.新型胺烷基酯類取代的順式反式長春西汀衍生物的合成[J].中國天然藥物，2011，9(1):51-57.

[2]戚 穎.HPLC法測定長春西汀注射液的含量[J].適宜診療技術(shù)，2002，20(6):2-3.

[3]于曼娜.HPLC法測定注射用長春西汀苯甲醇的含量[J].海峽藥學(xué)，2008，20(7):74.

[4]王 祥.高效液相色譜法測定長春西汀(片)的含量及其有關(guān)物質(zhì)的研究[J].藥物分析雜志，1995，15(4):23-25.