向明鳳，盧 華，管海燕，謝 紅，盧來春

(1.中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所藥劑科，重慶 400042;2.山東省即墨市中醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 青島 266000)

鹽酸異丙腎上腺素注射液為無色澄明液體，為β受體激動(dòng)劑[1]。其注射劑需在遮光、密閉、陰涼處進(jìn)行保存[2]。近幾年全球頻繁出現(xiàn)核泄漏事件，促使一些地區(qū)的自然環(huán)境發(fā)生了劇烈變化，讓暴露于60Co-γ射線輻照下的生物體受到不可恢復(fù)的損失和破壞的威脅增多，同時(shí)影響常用藥品中有效物質(zhì)的物理性能和化學(xué)組分等穩(wěn)定性因素相應(yīng)增加。因此，考察核輻射環(huán)境下藥品的穩(wěn)定性非常有價(jià)值，特別是針對(duì)一些常備急救藥品的穩(wěn)定性研究[2]。由于目前尚未見考察藥品在核輻射下穩(wěn)定性的相關(guān)報(bào)道。本試驗(yàn)中設(shè)計(jì)以鹽酸異丙腎上腺素注射劑為模型藥物，初步考察其吸收不同輻照劑量后含量變化，為輻照下藥品的存貯提供參考。

1 儀器與試藥

輻照設(shè)備(Allanace型γ輻照裝置，60Co-γ射線，第三軍醫(yī)大學(xué)輻照研究中心提供);Agilent Technologies 1200 series高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);Sartorius BT 124S電子分析天平(德國賽多利斯公司)。鹽酸異丙腎上腺素對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100341-200702，含量99.2%);鹽酸異丙腎上腺素注射劑(上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格為5 mL∶0.1 g，批號(hào)為100807);甲醇(色譜純);庚烷磺酸鈉為離子對(duì)試劑;其他均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定方法

2.1.1 色譜條件[2]與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil Technology C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:0.22%庚烷磺酸鈉溶液(用磷酸調(diào)pH至3.0)-甲醇(55∶45);檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20μL。該色譜條件下，色譜圖如圖1。可見，陰性對(duì)照品溶液對(duì)測(cè)定無影響，主藥鹽酸異丙腎上腺素能與注射劑中的輔料較好分離。

圖1 高效液相色譜圖

2.1.2 溶液制備

精密稱取鹽酸異丙腎上腺素對(duì)照品0.010 0 mg，置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，即得質(zhì)量濃度約為100μg/mL對(duì)照品溶液。精密量取鹽酸異丙腎上腺素注射液1 mL，置100 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，移取1 mL，置100 mL容量瓶中，流動(dòng)相定容，搖勻，即得10μg/mL的注射液溶液。精密量取輻照后的鹽酸異丙腎上腺素注射液1 mL，按上述注射液溶液配制方法配制，即得10μg/mL的供試品溶液。以流動(dòng)相為陰性對(duì)照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取對(duì)照品溶液，配成質(zhì)量濃度為2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 μg/mL 的溶液，分別進(jìn)樣 20 μL。記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)作圖，得回歸方程A=12.412 3C+0.774 6，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸異丙腎上腺素質(zhì)量濃度在2.5～12.5μg/mL的范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

日內(nèi)精密度考察:取對(duì)照品溶液，配成質(zhì)量濃度為 4，5，6μg/mL的溶液各3份。依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。結(jié)果3個(gè)質(zhì)量濃度的溶液的 RSD分別為0.46%，0.06%，0.19%(n=3)，均小于2%，表明方法日內(nèi)精密度較好。

日間精密度與穩(wěn)定性考察:取對(duì)照品溶液，配制成質(zhì)量濃度為4，5，6μg/mL的溶液，密封避光于4℃保存。按2.1項(xiàng)下色譜條件，同一溶液進(jìn)樣測(cè)定5 d，記錄色譜峰面積。結(jié)果3個(gè)質(zhì)量濃度的溶液的 RSD分別為1.02%，0.74%，0.70%(n=3)，均小于2%，表明日間精密度較好，密封避光于4℃保存5 d內(nèi)鹽酸異丙腎上腺素穩(wěn)定性較好。

回收率試驗(yàn):精密移取線性關(guān)系考察項(xiàng)下對(duì)照品溶液(10μg/mL)，移取1，2，3 mL各3份，分別加入2.2項(xiàng)下腎上腺素注射液溶液3 mL，用流動(dòng)相定容至 10 mL，配制成質(zhì)量濃度為 4，5，6μg/mL的溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度平行配制3份，依法進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積。結(jié)果3個(gè)質(zhì)量濃度的溶液的回收率分別為99.21%，95.13%，95.66%，總體平均回收率為96.67%，RSD為2.29%，表明方法準(zhǔn)確度較好。

2.2 輻照處理

以2010年版《中華人民共和國藥典(二部)》藥品常用輻射滅菌吸收劑量25 kGy為最大輻射吸收劑量[3]。取同一批號(hào)鹽酸異丙腎上腺素注射液，分為6組，每組3支，分別在60Co-γ射線放射源中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的輻照劑量后取出，待含量測(cè)定用。

2.3 輻照處理后樣品外觀、澄明度考察

吸收不同強(qiáng)度輻照劑量與未接受輻照處理的鹽酸異丙腎上腺素注射液外觀如圖2。吸收不同輻照劑量后鹽酸異丙腎上腺素注射液經(jīng)燈檢，其注射液澄明度沒有變化，無沉淀產(chǎn)生;由圖2可知，注射液顏色隨吸收劑量增加而加深，但4 kGy以下時(shí)注射液顏色變化不明顯。

圖2 不同強(qiáng)度輻照后鹽酸異丙腎上腺素注射液

2.4 不同強(qiáng)度輻照后樣品含量測(cè)定

取輻照前及輻照后的樣品，以流動(dòng)相配制理論質(zhì)量濃度約為10μg/mL的待測(cè)溶液。分別按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表1?？梢?，隨著輻照強(qiáng)度的增加，含量有逐漸降低的趨勢(shì)，一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 輻照劑量后含量下降為未輻照前的98.64%，95.59%，95.40%，92.80%，86.03%，79.52%;8 kGy輻照后放置4個(gè)月，含量未見下降。

表1 輻照后鹽酸異丙腎上腺素含量(μg/mL，n=3)

將表 1 中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的輻照劑量的數(shù)據(jù)，以輻照強(qiáng)度(X)為橫坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(Y)為縱坐標(biāo)擬合回歸方程，得回歸方程 Y=-0.078X+9.89，r=0.991 0(n=6)。結(jié)果表明，樣品輻照后質(zhì)量濃度變化呈一定的線性關(guān)系。

3 討論

與2010年版《中國藥典(二部)》鹽酸異丙腎上腺素含量測(cè)定方法中使用0.22%庚烷磺酸鈉溶液-甲醇=55∶45(用磷酸調(diào)pH至3.0)為流動(dòng)相比較，本試驗(yàn)含量測(cè)定方法中，僅在流動(dòng)相pH調(diào)整順序上進(jìn)行了改進(jìn)，將藥典中調(diào)整流動(dòng)相pH改為調(diào)整緩沖液pH，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，此方法能使鹽酸異丙腎上腺素與注射劑中其余輔料成分較好分離，方法精密度、準(zhǔn)確度均較好，且減少檢測(cè)步驟及節(jié)省試劑，可有效提高效率、降低檢測(cè)成本。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，鹽酸異丙腎上腺素注射液吸收不同強(qiáng)度的輻照劑量后，主藥含量隨吸收輻照劑量的增加而下降，且下降趨勢(shì)具有一定的線性特征;SPSS統(tǒng)計(jì)可知，輻照1 kGy對(duì)含量具有顯著影響，2，4，8，16，25 kGy 對(duì)含量影響極顯著，但吸收 8 kGy 輻照劑量以下的藥物含量下降幅度未至10%，在標(biāo)示量的85%～110%之內(nèi)[3]。試驗(yàn)結(jié)果雖然在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，但注射劑質(zhì)量在合格范圍之內(nèi)，因此初步認(rèn)為，吸收小于8 kGy的輻照劑量對(duì)鹽酸異丙腎上腺素注射液含量沒有顯著影響。鹽酸異丙腎上腺素注射液在吸收8 kGy輻照劑量后外觀變化不明顯，但含量下降至近標(biāo)示量的85%，吸收大于8 kGy的輻照劑量后含量變化更顯著。因此，在吸收大于或等于8 kGy輻照劑量鹽酸異丙腎上腺素極度不穩(wěn)定，應(yīng)注意累積吸收在此輻照劑量之上對(duì)鹽酸異丙腎上腺素注射液進(jìn)行防輻射貯存。

8 kGy輻照處理后放置4個(gè)月，與8 kGy輻照處理后立即測(cè)定含量比較，雖然統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示含量變化具有顯著性差異，但放置后含量沒有下降趨勢(shì)，反而為放置前含量的100.99%。因此，初步認(rèn)為一次性吸收一定輻照劑量后，鹽酸異丙腎上腺素注射液放置過程中的含量沒有變化，但還需進(jìn)一步考察長(zhǎng)期放置影響，以進(jìn)一步探究一次性吸收一定輻照劑量后其放置過程中的含量變化情況。

鹽酸異丙腎上腺素注射液經(jīng)輻照后顏色發(fā)生了變化，根據(jù)圖1C中以及測(cè)定輻照1～25 kGy后藥物含量數(shù)據(jù)可知，自2 kGy輻照處理后主藥含量下降，注射劑顏色加深，說明因射線的能量使鹽酸異丙腎上腺素分解、組合成了某種物質(zhì)，而導(dǎo)致了注射液顏色的變化，對(duì)此的研究還有待進(jìn)一步深入。

[1]段 霖，王峰偉，黃海生.微量泵靜脈注射異丙腎上腺素?fù)尵劝?斯綜合征臨床觀察[J].臨床誤診誤治，2007，20(5):18.

[2]徐 靖，盧 華，管海燕，等.輻照對(duì)呋塞米注射液含量的影響考察[J]. 中國藥房，2012，2(5):440-442.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:701-702，附錄191.