周 霖

深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院外科，廣東深圳 518106

nm23-H1基因與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

周 霖

深圳市光明新區(qū)人民醫(yī)院外科，廣東深圳 518106

目的探討nm23-H1基因表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法選擇筆者所在醫(yī)院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手術(shù)患者46例，應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC方法對(duì)46例NSCLC組織標(biāo)本進(jìn)行nm23-H1表達(dá)的檢測(cè)。結(jié)果46例NSCLC中nm23-H1過(guò)度表達(dá)為50%（23/46），其中鱗癌nm23-H1過(guò)度表達(dá)為47.62%（10/21），腺癌為58.33%（7/12），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；nm23-H1的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論nm23-H1可作為預(yù)測(cè)NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

非小細(xì)胞肺癌；nm23-H1；免疫組織化學(xué)；轉(zhuǎn)移

nm23基因是目前研究較多的轉(zhuǎn)移抑制基因，包括nm23-H1和nm23-H2。nm23編碼的產(chǎn)物具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能，nm23在分化良好的腫瘤中成高水平表達(dá)，且nm23基因表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移成負(fù)相關(guān)，與無(wú)病生存期、整個(gè)生存期呈正相關(guān)。所以臨床檢測(cè)nm23基因表達(dá)高低可作為判斷有無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要目標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

選取筆者所在醫(yī)院2006年2月～2011年10月收治的肺癌手術(shù)標(biāo)本、臨床及隨訪資料齊備的患者46例，其中，男34例，女12例；年齡33～84歲，平均（62.5±3.2）歲；其中鱗癌21例，腺癌12例，大細(xì)胞癌5例，小細(xì)胞癌8例。標(biāo)本以10%福爾馬林固定，石蠟包埋，肺癌組織學(xué)類(lèi)型按WHO標(biāo)準(zhǔn)分類(lèi)[1]，組織病理學(xué)分級(jí)按國(guó)際抗癌聯(lián)合會(huì)（UICC）標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2 PCR引物

根據(jù) Gen Bank Database（ACCESSION X75598）提供的nm23-H1基因全序列，組織DNA根據(jù)常規(guī)的方法進(jìn)行提取并有所改進(jìn)。參考Duenas等[3]的方案，設(shè)計(jì)擴(kuò)增nm23-H1基因5個(gè)外顯子的引物。見(jiàn)表1。

表1 擴(kuò)增nm23-H1基因外顯子的PCR引物

1.3 PCR擴(kuò)增

PCR反應(yīng)系統(tǒng)組成為：5 μL 10×反應(yīng)緩沖液，5 μL 2 mmol/L 4×dNTP（Sigma產(chǎn)品），2 μL 2 mmol/L 上游及下游引物，100 ng模板DNA，2.5 UTaq酶（華美生物工程公司），加超純水至50 μL。循環(huán)條件為：94℃變性1 min，60～64℃退火1 min，72℃延伸1 min，循環(huán)30次。

2 結(jié)果

2.1 nm23-H1基因缺失與肺癌病理生理的關(guān)系

46例肺癌組織標(biāo)本中14例占30.43%，存在nm23-H1等位基因缺失，均為雜合性缺失，未見(jiàn)純合性缺失。14例中12例為EcoRⅠ和BglⅡ酶切雜交帶均有缺失，2例僅有BglⅡ酶切雜交帶缺失，46例癌旁肺組織標(biāo)本未檢測(cè)到nm23-H1基因缺失。nm23-H1陽(yáng)性顆粒主要位于胞漿中。見(jiàn)圖1。

46例NSCLC中nm23-H1過(guò)度表達(dá)為50%（23/46），其中鱗癌nm23-H1過(guò)度表達(dá)為47.62%（10/21），腺癌為58.33%（7/12），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在SCLC中未見(jiàn)有nm23-H1表達(dá)。本研究中nm23-H1等位基因缺失與肺癌原發(fā)腫瘤大小、部位、病理類(lèi)型、細(xì)胞分化程度、TNM分期以及患者性別和年齡均無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05）。nm23-H1等位基因缺失與肺癌病理生理特征的關(guān)系見(jiàn)表2。

圖1 nm23-H1在肺中分化腺癌胞漿、核膜中呈陽(yáng)性表達(dá)（ABC×200）

2.2 nm23-H1等位基因缺失與肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

46例中16例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中10例占62.5%存在nm23-H1等位基因缺失；不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的30例中，僅4例占13.3%存在等位基因缺失。兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表3。

表2 nm23-H1基因缺失與肺癌病理生理的關(guān)系

表3 nm23-H1基因缺失與肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討論

nm23-H1等位基因缺失在不同的腫瘤存在較大差異。相關(guān)報(bào)道[4]在人乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）、腎癌和大腸癌中nm23-H1等位基因缺失率為33.3%、25%、8%和12.5%。本研究中46例NSCLC癌中14例檢測(cè)出nm23-H1等位基因缺失，缺失率為30.43%，略高于Leone等的報(bào)道。這可能是經(jīng)兩種酶切后檢測(cè)到的nm23-H1等位基因缺失率較用一種酶切的缺失率高的結(jié)果。nm23-H1常由于等位基因缺失，低表達(dá)及突變而失活，功能或（和）結(jié)構(gòu)異常的nm23-H1基因常與腫瘤的轉(zhuǎn)移表型有關(guān)，如乳腺癌、肝癌、胃癌、黑色素瘤和卵巢癌等[5]。筆者檢測(cè)46例NSCLC標(biāo)本，共檢測(cè)到14例占30.43%存在nm23-H1等位基因缺失，觀察到nm23-H1等位基因缺失與肺癌轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。

[1]洪雷，崔雅靜，姜達(dá)，等.胸苷酸合成酶多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌易感性及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)性研究[J].河北醫(yī)藥，2011，33（24）：3744-3746.

[2]鄭海霞，申?yáng)|蘭，周清華，等.nm23-H1基因逆轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型的功能鑒定 [J].北京大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2005，V37（3）：335-336.

[3]Duenas Gonzalez A，Abad Hernandez MM，Garria Mata J，et al.Analysis of nm23-H1 expression in breast cancer. Correlation with p53 expression and clinicopathologic findings[J].Cancer Lett，1996，101（2）：137-142.

[4]黃宗海，蘇國(guó)強(qiáng)，毛乾國(guó)，等.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與nm23-H1基因在青年女性乳腺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后之間的關(guān)系[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，24（12）：1398-1401.

[5]梅同華，李長(zhǎng)毅，黃愛(ài)龍.非小細(xì)胞肺癌nm23-H1等位基因缺失與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，6（12）：1266-1268.

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2095-0616（2012）12-36-02

2012-04-17）