亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        復合抑菌劑對希瓦氏菌抑制效果的研究

        2012-11-02 07:38:22婁永江
        食品工業(yè)科技 2012年7期
        關鍵詞:聚賴氨酸希瓦抑菌劑

        高 瑩,婁永江

        (寧波大學生命科學與生物工程學院,浙江寧波315211)

        復合抑菌劑對希瓦氏菌抑制效果的研究

        高 瑩,婁永江

        (寧波大學生命科學與生物工程學院,浙江寧波315211)

        在單因素實驗的基礎上,根據(jù)中心旋轉組合設計原理,考察了四種抑菌劑多糖、納米銀、茶多酚與ε-聚賴氨酸對腐敗菌希瓦氏菌 (Shewanella sp.)的抑制作用。結果表明復合抑菌劑最佳配比為0.23%R-多糖、0.83‰納米銀、0.16‰茶多酚與0.43‰ε-聚賴氨酸,在此條件下抑菌率實測可達90%以上,且希瓦氏菌對該復合抑菌劑極度敏感,抑菌圈直徑達到28.36mm。

        希瓦氏菌,抑菌劑,響應面,管蝶法

        水產(chǎn)品原料易于腐敗變質(zhì),且微生物是造成其腐敗變質(zhì)的主要原因之一[1-2]。但是,并非所有微生物均是導致制品發(fā)生變質(zhì)的直接原因,往往只有一種或幾種特定微生物在整個腐敗過程中起著主導作用,該菌即稱之為特定腐敗菌(specific spoilage organism,SSO)。故若加強對SSO的研究與控制,就可較好地降低水產(chǎn)品腐敗速率,提高產(chǎn)品品質(zhì)[3-5]。國內(nèi)外對SSO的研究表明,希瓦氏菌(Shewanella sp.)或假單胞菌(Pseudomonas sp.)是導致溫帶海洋魚類貯藏期間特別是冷藏時腐敗變質(zhì)的主要原因[6-10],但針對這些腐敗菌進行抑制的研究卻較少。本文利用響應面法,研究了幾種抑菌劑對希瓦氏菌生長繁殖的影響,以期為海產(chǎn)品的保鮮提供技術支撐。

        1 材料與方法

        1.1 材料與儀器

        希瓦氏菌ANA-3(Shewanella sp.ANA-3) 分離自腐敗槍烏賊,經(jīng)生理生化及16s RNA鑒定得到,斜面保存于冰箱備用;納米銀溶液 采用化學還原法制得,濃度為200μg/mL,顆粒直徑≤15nm;ε-聚賴氨酸 浙江銀象生物工程有限公司;茶多酚 余姚市惠得隆生物制品有限公司;R-多糖 北京星標智生物技術有限公司。將上述抑菌劑按實驗要求,配制成溶液保存于試劑瓶中備用。并將抑菌液OD420mm與純水OD420mm進行比較,發(fā)現(xiàn)無顯著差異(P>0.05)。說明待測抑菌液對實驗測定結果無顯著性影響。

        分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 菌懸液的制備 取一菌環(huán)希瓦氏菌,接種于300mL營養(yǎng)肉湯,30℃培養(yǎng)18~20h后,血球計數(shù)板計數(shù),根據(jù)實驗要求用滅菌營養(yǎng)肉湯稀釋至適當濃度。

        1.2.2 不同抑菌劑對希瓦氏菌生長影響測定 當希瓦氏菌培養(yǎng)至進入對數(shù)生長期(約3h)時,分別添加不同濃度抑菌劑,在30℃搖床中繼續(xù)培養(yǎng)24h后,測定菌液OD420mm。

        1.2.3 響應面優(yōu)化抑菌劑組合方案 采用Design-Excerpt7.0.0軟件,按照中心旋轉組合設計(CCD)原理,以抑菌率作為響應值,設計四因素二次旋轉組合實驗,優(yōu)化抑菌劑組合方案。實驗安排及抑菌率計算公式如下:

        抑菌率(%)=(OD420對照組-OD420實驗組)/OD420對照組×100%

        表1 四因素響應面分析實驗因素設計表Table 1 Variables and levels in central composite design

        1.2.4 組合抑菌劑敏感性測定 在超凈工作臺內(nèi),于每個培養(yǎng)皿中倒入約15mL營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,待培養(yǎng)基凝固后,移取0.2mL希瓦氏菌菌液均勻涂布,靜置30min后放入牛津杯,并在牛津杯中加入抑菌劑混合液0.2mL,30℃培養(yǎng)12h,測量抑菌圈直徑。并以無菌生理鹽水作陰性對照、1.00%山梨酸鉀作陽性對照[11-12]。每種抑菌劑做3次平行。

        2 結果與分析

        2.1 不同抑菌劑抑制希瓦氏菌效果

        圖1 不同抑菌劑對菌液OD420值的影響Fig.1 OD420nmvalueofShewanellaatdifferentbacteriostaticagents

        由圖1知,當R-多糖、茶多酚、ε-聚賴氨酸以及納米銀的濃度分別小于0.20%、0.15‰、0.4‰、0.8‰時,菌液OD420mm值隨著抑菌劑濃度的增加顯著降低(P<0.05),但當各抑菌劑濃度超過該臨界點時,測定指標雖呈現(xiàn)下降趨勢,但并不顯著(P>0.05)。出于成本考慮,本研究分別以0.20%、0.15‰、0.4‰、0.8‰作為R-多糖、茶多酚、ε-聚賴氨酸及納米銀的實驗控制點。

        2.2 組合抑菌劑配比條件的響應面優(yōu)化

        2.2.1 模型建立與顯著性分析 模型可信性分析顯示(見表3),模型校正決定系數(shù)R2adj=0.9705,說明所建模型可解釋97.05%響應值的變異性;變異系數(shù)C.V=1.42%與精密度A.P=24.037,均在可接受范圍內(nèi),說明該實驗可信度與精密度均較高;此外,該實驗模型擬合檢測高度顯著(P回歸模型<0.01),模型失擬性不顯著(P失擬項>0.05),說明該模型可較好反映實驗自變量對應變量的影響,實驗結果中無異常點,可用來預測實驗響應值的變化。

        邁斯沃克軟件(北京)有限公司(MathWorks)是一家數(shù)學計算軟件的領先軟件供應商。MathWorks的產(chǎn)品除了作為研究和開發(fā)的基礎工具在汽車、航空、通信和電子等領域得到廣泛的應用外,還被應用于金融服務和計算生物學等對建模和仿真有越來越高要求的技術領域;MathWorks軟件可用來輔助許多尖端產(chǎn)品的設計和開發(fā),包括汽車系統(tǒng)、航空、通信和其他電子產(chǎn)品、工業(yè)機械和醫(yī)療器械等。

        表2 響應面實驗設計與結果Table 2 Central composite experimental design matrix and experimental results

        二次回歸模型為:

        其中,二次項的系數(shù)表明所建拋物面開口向下,具有極大值點,可進行最優(yōu)分析。四因素一次項與二次項對抑菌率均有非常顯著的影響(P<0.05),且根據(jù)F值可知,影響性X1>X4>X2>X3;X1X2、X2X3與X2X4的交互作用顯著,而X1X3、X1X4與X3X4的交互作用不顯著(P>0.05)。

        2.2.2 因素作用分析

        2.2.2.1 單因素效應分析 因素X1、X2、X3與X4對Y值均有顯著性影響,故采用降維分析法,對4因素均進行單因子效應分析。單因素效應方程與曲線如表4與圖1所示。

        表4 單因素效應方程Table 4 Effect equations of single factor

        表3 回歸模型方差分析表Table 3 Analysis of variance for regression model

        圖2可見,4因素對響應值的影響均表現(xiàn)為曲線變化,且抑菌劑濃度發(fā)生相同編碼值變化幅度時,X1對抑菌率的影響效應最大,X3影響效應最小,這與前面的方差分析結果一致。此外,當編碼值達到表4中X分界點時,各個方程對應的響應值達到最大值;當編碼值小于X分界點時,各因素呈現(xiàn)正效應;大于X分界點時,呈現(xiàn)負效應。

        圖2 單因素效應曲線Fig.2 Effect curves of single factor

        2.2.2.2 交互作用分析 實驗所得RSM三維圖以及相應等高線見圖3~圖8。其中,等高線形狀表明不同因素之間交互作用強弱,橢圓表明兩者交互作用顯著,圓形表明交互作用不具有顯著性[13],由此可得X1X2、X2X3與X2X4的交互作用顯著,這與方差分析結果一致。這可能是由于納米銀離子可使細胞膜松散、破壞細胞結構從而形成通道,有利于其它抑菌劑進入細菌細胞內(nèi)從而更加有效的達到抑制微生物生長繁殖的作用[14-15]。因此,只對X1X2、X2X3與X2X4之間的交互作用進行分析。將另兩個因素固定在零水平,得到X1X2、X2X3與X2X4對抑菌率影響的方程如下:

        此外,將方程與等高線結合可知,在所考察范圍內(nèi),抑菌率隨著各抑菌劑濃度的增加先增大,但當抑菌劑濃度達到一定程度后,抑菌率隨各因素變化的幅度趨于平緩。

        圖3 R-多糖與納米銀響應曲面圖Fig.3 Response surface for the interactive effects of R-polysaccharide and nano silver on the bacteriostatic rate

        圖4 R-多糖與茶多酚響應曲面圖Fig.4 Response surface for the interactive effects of R-polysaccharide and tea polyphenol on the bacteriostatic rate

        圖5 R-多糖與ε-聚賴氨酸響應面圖Fig.5 Response surface for the interactive effects of R-polysaccharide and ε-polylysin on the bacteriostatic rate

        圖6 納米銀與茶多酚響應曲面圖Fig.6 Response surface for the interactive effects of nano silver and tea polyphenol on the bacteriostatic rate

        圖7 納米銀與ε-聚賴氨酸響應曲面圖Fig.7 Response surface for the interactive effects of nano silver and ε-polylysin on the bacteriostatic rate

        圖8 茶多酚與ε-聚賴氨酸響應曲面圖Fig.8 Response surface for the interactive effects of tea polyphenol and ε-polylysin on the bacteriostatic rate

        聯(lián)立方程,解得X1=0.534,X2=0.602,X3=0.235,X4=0.561,換算可知當R-多糖、納米銀、茶多酚與ε-聚賴氨酸的濃度分別為0.23%、0.83‰、0.16‰和0.43‰時,抑菌率達到最優(yōu)值91.02%。

        在上述優(yōu)化條件下進行3次驗證實驗,得到的抑菌率為90.48%±0.09%,與預測值91.02%基本一致,說明所擬合模型可靠,優(yōu)化效果顯著,該實驗設計適用于對復合抑菌劑組合方案進行參數(shù)優(yōu)化。

        2.3 抑菌劑敏感性測定

        管蝶法結果如表5所示。表明腐敗菌希瓦氏菌對組合抑菌劑以及山梨酸鉀均表現(xiàn)出敏感性,但對復合抑菌劑更為敏感。

        表5 抑菌劑抑菌效果Table 5 Inhibition results of different bacteriostatic agents

        圖9 希瓦氏菌對不同抑菌劑敏感度測定結果圖Fig.9 The sensitivity results of Shewanella for different bacteriostatic agents

        3 結論

        3.1 通過響應面方法分析R-多糖、納米銀、茶多酚與ε-聚賴氨酸4因素對腐敗菌希瓦氏菌抑制作用的影響,得到相應回歸方程如下:

        Y=88.47+3.02X1+2.75X2+0.81X3+2.94X4+0.61X1X2-0.061X1X3-0.40X1X4+0.68X2X3+0.69X2X4-0.23X3X4-2.95X12-3.01X22-2.25X32-2.75X42

        方差分析顯示,該模型擬合顯著,相關性好,決定系數(shù)R2=0.9848,且失擬性不顯著,說明所建方程可較好地預測抑菌率隨各因素變化情況。

        3.2 響應面優(yōu)化得到的最佳抑菌劑組合方案為:0.23% R-多糖、0.83‰納米銀、0.16‰茶多酚與0.43‰ε-聚賴氨酸,此條件下抑菌率預測達到91.02%。

        3.3 在優(yōu)化條件下,抑菌率實測值為90.48%±0.09%,與預測值一致,說明響應面法的合理性與可行性。且牛津杯實驗表明,希瓦氏菌對復合抑菌劑表現(xiàn)出極高的敏感度,效果顯著優(yōu)于1.00%山梨酸鉀。這可能是由于納米銀具有破壞細胞結構、增加細胞通透性的作用,從而更有益于其它抑菌劑進入細菌體內(nèi)達到更加有效的抑菌效果,但具體抑菌機制仍需進一步的研究與探討。

        [1]楊憲時,許鐘,肖琳琳.水產(chǎn)食品特定腐敗菌與貨架期的預測和延長[J].水產(chǎn)學報,2004,28(1):106-111.

        [2]楊文鴿,孫翠玲,潘云娣,等.水產(chǎn)品中致病微生物的快速檢測方法[J].中國食品學報,2006,6(1):402-406.

        [3]Gram L,Dalgaard P.Fish spoilage bacteria-problems and solutions[J].Current Opinion in Biotechnology,2002,13(1):262-266.

        [4]Mc Meekin T A,Olley J.Predictive microbiology:towards the interface and beyong[J].Food Microbial,2002,73(2):395-407.

        [5]Pin C,Baranyi J.Predictive models as means to quantify the interactions of spoilages organisms[J].Food Microbiology,1998,41(1):59-72.

        [6]Gram L,Huss H H.Microbiological spoilage of fish and products[J].International Journal of Food Microbiology,1996,33(1):121-137.

        [7]Gram L,Dalgaard P.Fish spoilage bacteria-problems and solutions[J].CurrentOpinioninBiotechnologe,2002,13(1):262-266.

        [8]郭全友,許鐘,楊憲時.冷藏養(yǎng)殖大黃魚品質(zhì)變化特征及細菌相分析[J].上海水產(chǎn)大學學報,2006,15(2):216-222.

        [9]王玉婷,邵秀芝,冀國強.大黃魚冷藏過程中品質(zhì)變化及腐敗菌的分析及抑菌研究[J].肉類研究,2010(11):11-15.

        [10]曹榮,薛長湖,許加超,等.太平洋牡蠣細菌菌相分析及-20℃凍藏過程中菌相變化[J].食品工業(yè)科技,2008,29(6):107-110.

        [11]陳曼,李赤,邱逸斯,等.富貴竹黑腐病拮抗菌H5的抑菌機制及相關特性研究[J].微生物學通報,2008,35(4):529-532.

        [12]李建慧,馬會勤,陳尚武.葡萄多酚抑菌效果的研究[J].中國食品學報,2008,8(2):100-107.

        [13]申迎賓,范子劍,麻浩.響應面法優(yōu)化發(fā)芽豇豆積累γ-氨基丁酸工藝條件的研究[J].食品科學,2010,31(2):10-16.

        [14]Richards R,Michael E.Antibacterial action of silver nitrate [J].Biomed Lett,1991,45:183-188.

        [15]張杰,張宇.銀離子消毒劑的殺菌作用、機制、影響因素及應用[J].中國感染控制雜志,2007,6(3):214-216.

        [16]劉健,王海雁,趙淑江.牛津杯法測定五倍子對大黃魚病原弧菌的體外抑菌活力[J].海洋科學,2009,33(11):44-47.

        Study on antimicrobial effect of different bacteriostatic agents on Shewanella sp.

        GAO Ying,LOU Yong-jiang
        (Faculty of Life Science and Biotechnology of Ningbo University,Ningbo 315211,China)

        On the basis of single-factor experiments,bacteriostasis effects of four bacteriostatic agents(polysaccharide,nano silver,tea polyphenol and ε-polylysin)on Shewanella sp.were studied by using the principle of central composite design.Results showed that the optimal amounts of R-polysaccharide,nano silver,tea polyphenol and ε-polylysin was 0.23%,0.83‰,0.16‰ and 0.43‰,respectively.With this compound bacteriostatic agents,the bacteriostatic rate was more than 90%.And the diameter of inhibition zone was 28.36mm,which indicated Shewanella sp.was sensitive for this complex preservative.

        Shewanella sp.;bacteriostatic agent;response surface methodology;cylinder-plate method

        TS202.3

        A

        1002-0306(2012)07-0088-05

        2011-07-08

        高瑩(1987-),女,碩士,研究方向:食品科學。

        浙江省“十一五”科技興海重大科技項目(2009C03017-3);寧波市農(nóng)業(yè)重大攻關招標項目(2006C11001)

        猜你喜歡
        聚賴氨酸希瓦抑菌劑
        希瓦古城模型為何成中國國禮
        華聲文萃(2022年11期)2022-06-10 05:13:44
        希瓦古城模型為何成中國國禮
        海藻希瓦菌相關性感染的研究進展
        眼用制劑中抑菌劑的使用
        藥品評價(2020年1期)2020-12-17 10:19:15
        白色鏈霉菌ε-聚賴氨酸合酶的異源表達及重組菌全細胞合成ε-聚賴氨酸的條件優(yōu)化
        眼氨肽滴眼液中抑菌劑的含量測定及活性炭對抑菌劑的吸附性研究
        香蕉枯萎病菌快速檢測技術
        淺談ε-聚賴氨酸在食品中的應用
        聚賴氨酸/多壁碳納米管修飾電極測定大米中的鉛
        微生物學
        99精品久久精品一区二区| 免费啪啪av人妻一区二区 | 青青草国产精品一区二区| 国产无套护士在线观看| 久久精品亚洲精品毛片| 自拍情爱视频在线观看| 第一次处破女18分钟高清| 欧美日韩一区二区综合| 久久国产热精品波多野结衣av| 大岛优香中文av在线字幕| 亚洲一区二区三区四区精品在线| 国产莉萝无码av在线播放| 国产三级精品三级国产| 自拍偷拍一区二区三区四区| 视频在线国产一区二区| 无码福利写真片视频在线播放| 无码一级视频在线| 日本一本二本三本道久久久| av一区二区三区在线| 久久久久久久岛国免费观看| 日韩欧美第一区二区三区| 亚洲国产日韩综合天堂| 久久精品国产99久久无毒不卡| 人妻丰满熟妇av无码处处不卡| 久久国产A∨一二三| 亚洲中文字幕高清av| 99精品人妻无码专区在线视频区 | 无码的精品免费不卡在线| 在线视频日韩精品三区| 尤物yw午夜国产精品视频| 国产97色在线 | 亚洲| 国产成人av在线影院无毒| 一级内射免费观看视频| 日韩精品视频一区二区三区 | 国产无卡视频在线观看| 少妇熟女天堂网av| 亚洲成人中文| 91国内偷拍一区二区三区| 视频一区视频二区制服丝袜| 国产精品va在线播放我和闺蜜| 日本视频精品一区二区|