李世旭，王玉靜，范艷麗，孟祥磊，孟繁鑫

(山東綠葉制藥有限公司，山東煙臺(tái)264003)

娑羅子(Semen Aesculi)為七葉樹(shù)科植物七葉樹(shù)(因每一葉柄長(zhǎng)有七片葉子而得名)Aesculus chinesis Bge.的種子［1］。味甘、性溫，具有理氣寬中，和胃止痛作用。用于胸腹脹悶，胃脘疼痛。娑羅子的提取物七葉皂苷鈉，其主要成分是七葉皂苷A、B、C和D，具有消炎、抗腫作用［2］。我國(guó)天然野生集中連片的七葉樹(shù)生長(zhǎng)區(qū)，主要分布在陜西秦嶺的西南片區(qū)，漢中略陽(yáng)是七葉樹(shù)生長(zhǎng)的最佳適生區(qū)，分布最為密集，其次還有湖北的神農(nóng)架和浙江天目山有少量分布。七葉樹(shù)屬七葉樹(shù)科、落葉喬木，花白色、芳香四溢，每年5月上中旬開(kāi)花，6月份開(kāi)始結(jié)出果實(shí)，9月份果實(shí)開(kāi)始逐步成熟。

為進(jìn)一步研究娑羅子生長(zhǎng)過(guò)程中的成分變化，以指導(dǎo)娑羅子采摘最佳時(shí)間的選擇(其一選擇成熟期果實(shí)用于種子繁殖，因可以用于育苗的種子壽命短，要求成熟且保持有一定的含水量，果皮未開(kāi)裂，對(duì)采摘時(shí)間要求較為嚴(yán)格;其二選擇成熟后的果實(shí)用于生產(chǎn)，利于娑羅子提取物生產(chǎn)的過(guò)程控制，確保其藥用價(jià)值達(dá)到最佳，毒副作用最小，并保證最終產(chǎn)品的批與批間的一致與穩(wěn)定)進(jìn)行了如下研究和實(shí)驗(yàn)工作。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀(二元泵)、AS20500A超聲波清洗器(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。

1.2 試藥 娑羅子:人工種植(山東綠葉制藥有限公司)，人工采摘;乙醇(批號(hào):0905110，藥用級(jí)，湛江博康海洋生物有限公司);甲醇、乙腈(色譜純 Merck Specialities Private Limited);磷酸(批號(hào)030505，分析純，煙臺(tái)三和化學(xué)試劑有限公司)。

2 樣品制備

2.1 對(duì)照 用正常生產(chǎn)的七葉皂苷鈉提取液圖譜作為對(duì)照，以確定七葉皂苷 A、B、C、D、E、F的出峰時(shí)間及位置。

2.2 供試品來(lái)源 人工種植的七葉樹(shù)(山東綠葉制藥有限公司)，從2011年8月份開(kāi)始，每間隔約5 d采摘一次，獲取娑羅子樣品，以采摘日期作為批號(hào)，如20110820代表2011年8月20日采摘得到的娑羅子樣品。

2.3 供試品溶液制備 將娑羅子除去外殼，用錘敲碎成玉米粒大小的顆粒，取娑羅子顆粒約20 g，加入5倍體積的50% 乙醇溶液，浸泡12 ～18 h，搖勻，濾過(guò)，取濾液過(guò)0.22 μm微孔濾膜即得。

3 分析方法

3.1 色譜條件 廣州菲羅門色譜柱:Kinetex C18(4.6 mm×100 mm，2.6 μm);以 0.5%磷酸溶液 － 乙腈(34∶66)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，柱溫30℃;流速為1.0 mL·min－1。理論板數(shù)按七葉皂苷 A峰計(jì)算應(yīng)不低于10 000。

3.2 數(shù)據(jù)處理 基于產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)的主要成分的對(duì)比與趨勢(shì)分析。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1 對(duì)照?qǐng)D譜 見(jiàn)圖1。

圖1 正常生產(chǎn)七葉皂苷鈉提取液

4.2 供試品部分圖譜 見(jiàn)圖2～4。

圖2 20110810

圖3 20110912

圖4 20111016

4.3 從圖2～4中可見(jiàn)七葉皂苷鈉含有20多種組分，色譜圖中的4個(gè)主要色譜峰按出峰順序分別為七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C和七葉皂苷D，且出峰的時(shí)間和位置與對(duì)照樣品相比較是一致的。

4.4 不同時(shí)期樣品的HPLC圖譜數(shù)據(jù)匯總，見(jiàn)表1。

表1 含量百分比結(jié)果

4.5 不同時(shí)期的含量百分比、七葉皂苷A/七葉皂苷B比例數(shù)據(jù)匯總，見(jiàn)圖5、圖6。

5 討論與結(jié)論

5.1 通過(guò)對(duì)娑羅子生長(zhǎng)過(guò)程不同階段成分含量的檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)隨著成熟期的接近，七葉皂苷A含量逐漸增加，B含量逐漸下降，七葉皂苷A/七葉皂苷B比例值呈現(xiàn)出一直不斷增大的趨勢(shì)，七葉皂苷C和D的變化不明顯。

圖5 娑羅子成分變化趨勢(shì)圖

圖6 七葉皂苷鈉A/七葉皂苷鈉B比例

5.2 娑羅子中含量最高的成分是七葉皂苷A、七葉皂苷B，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定七葉皂苷A含量應(yīng)大于七葉皂苷B含量，所以采摘時(shí)娑羅子中含量應(yīng)為七葉皂苷A含量高于七葉皂苷B含量，故用于生產(chǎn)的娑羅子的采摘應(yīng)在其成熟期后期(即10月份)。

5.3 用于育苗的娑羅子，考慮到保持種子水分和營(yíng)養(yǎng)及提高育苗成活率的需要，應(yīng)在9月底之前采摘較好，而不能與入藥的娑羅子同時(shí)采摘。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:275.

［2］薛云麗，侯金玲，王芃，等.不同組成比例的七葉皂苷鈉抗炎作用及急性毒性研究［J］.齊魯藥事，2009，28(5):305－307.