宋彥會(huì)，杜中海，于 鵬，任傳杰，袁洪雨

(山東齊都藥業(yè)有限公司，山東淄博255400)

羥乙基淀粉(Hydroxythyl starch，HES)是玉米支鏈淀粉經(jīng)酸水解，然后在堿性條件下經(jīng)羥乙基化而成，是目前較受關(guān)注的一類膠體性血容量擴(kuò)充劑，主要用于大出血、大面積燒傷、重癥監(jiān)護(hù)或手術(shù)病人，用以擴(kuò)充血容量，改善微循環(huán)［1，2］。目前臨床上常用的是新一代的 HES130/0.4氯化鈉注射液［3］。

在有關(guān)控制羥乙基淀粉質(zhì)量的指標(biāo)中，羥乙基化程度對(duì)藥物體內(nèi)保留時(shí)間有決定性作用，而羥乙基淀粉的擴(kuò)容強(qiáng)度主要取決于重均分子量及分子量分布［4］。

目前多用尺寸排阻色譜法(SEC)測(cè)定羥乙基淀粉重均分子量及分子量分布，其原理是高聚物溶液流過(guò)凝膠柱時(shí)分子按體積大小順序流出，重均分子量(Mw)的對(duì)數(shù)值與保留時(shí)間(TR)呈線性關(guān)系。通過(guò)測(cè)定不同分子量對(duì)照品，可得重均分子量(Mw)的對(duì)數(shù)值與保留時(shí)間的線性回歸方程lgMw=a+bTR。通過(guò)測(cè)定待測(cè)樣品的保留時(shí)間，可據(jù)此回歸方程計(jì)算出待測(cè)樣品的相對(duì)重均分子量(Mw)。該方法屬于間接測(cè)定方法，需使用不同分子量羥乙基淀粉對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，誤差較大。

激光光散射法是測(cè)定高分子物質(zhì)重均分子量的直接方法。高分子溶液可視為不均勻介質(zhì)，當(dāng)光通過(guò)它時(shí)，入射光的電磁波誘導(dǎo)高分子成為振蕩偶極子，并產(chǎn)生強(qiáng)迫振動(dòng)作為二次光源發(fā)出散射光。高分子溶液的散射光強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其溶劑，并且強(qiáng)烈依賴于高分子的分子量、鏈形態(tài)、溶液濃度、散射光角度和折光指數(shù)增量(dn/dc值)等基本參數(shù)，從而得到高分子物質(zhì)的絕對(duì)分子量。當(dāng)激光光散射儀與分子排阻色譜聯(lián)用時(shí)，分子排阻色譜實(shí)現(xiàn)不同分子量高聚物分子的分離，分子按大小順序依次進(jìn)入十八角度激光光散射儀確定分子量，繪制出分子量分布圖，直接測(cè)定出絕對(duì)重均分子量及分子量分布，不需要同結(jié)構(gòu)對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，完全不依賴未知樣品與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性，能快速、準(zhǔn)確地測(cè)定物質(zhì)的重均、數(shù)均和Z均分子量及分子量分布［5］。該法操作簡(jiǎn)便，誤差小。

本文對(duì)SEC－MALLS法進(jìn)行了方法學(xué)研究，并用此法測(cè)定了本公司連續(xù)生產(chǎn)三批羥乙基淀粉130/0.4的重均分子量及分子量分布，結(jié)果證明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于羥乙基淀粉的重均分子量及分子量分布檢測(cè)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Wyatt DAWN HELEOS－Ⅱ十八角度激光光散射儀(美國(guó)懷雅特公司);Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);BS110S電子天平(d=0.1 mg，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 試藥 中分子量羥乙基淀粉對(duì)照品(歐洲藥典委員會(huì)，Code:Y0001277，Mw:130 100);純化水，羥乙基淀粉 130/0.4(山東齊都藥業(yè)有限公司，批號(hào):110601、110602、110603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:預(yù)柱TSKgel Guard column pwxl(4 cm×6 mm)，分離柱 TSKgel G4000 pwxl(30 cm ×7.8 mm)2根串聯(lián);檢測(cè)器:十八角度激光光散射檢測(cè)器和示差折光檢測(cè)器在相同溫度聯(lián)用;流動(dòng)相:取醋酸鈉18.7 g，加疊氮鈉1.72 g，加水4 000 mL 溶解，加冰乙酸34.5 mL，加水至5 000 mL;流速:0.5 mL·min－1;柱溫:35 ℃;進(jìn)樣體積:50 μL;流動(dòng)相折光指數(shù):1.334;dn/dc:0.135 mL·g－1;二次維里系數(shù)A2:10－4mol·mL·g－1。

2.2 測(cè)定法 照如下方法測(cè)定。本品重均分子量應(yīng)為110 000～150 000，10%大分子重均分子量不得大于380 000，10%小分子重均分子量不得小于15 000。

測(cè)定法:取本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL中約含20 mg的溶液，搖勻，經(jīng) 0.2 μm 過(guò)濾，取 50 μL 續(xù)濾液注入液相色譜儀，記錄結(jié)果，計(jì)算，即得。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 取中分子量羥乙基淀粉適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含20 mg的溶液，搖勻，經(jīng) 0.2 μm 過(guò)濾，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL約含20 mg的溶液，搖勻，經(jīng)0.2 μm過(guò)濾，即得。

2.4 SEC－MALLS方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察 精密量取對(duì)照品溶液、供試品溶液(批號(hào):110601)及流動(dòng)相各50 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明流動(dòng)相對(duì)供試品無(wú)干擾，該方法專屬性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖 1、2。

圖1 空白溶劑

圖2 羥乙基淀粉130/0.4(批號(hào):110601)供試品

2.4.2 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取中分子量羥乙基淀粉對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并分別稀釋制成每1 mL中約含16 mg、20 mg、24 mg的溶液，每個(gè)濃度各分別制備3份溶液，搖勻，經(jīng)0.2 μm過(guò)濾，精密量取50 μL續(xù)濾液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)得中分子量羥乙基淀粉對(duì)照品重均分子量(Mw)平均值為130 078，RSD為0.14%，平均值與標(biāo)稱值之差為22，相對(duì)誤差為0.02%，小于5%，可見(jiàn)，該方法準(zhǔn)確度高，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液(批號(hào):110601)，室溫放置0、12、24、36 h后分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果表明本品在36 h內(nèi)穩(wěn)定性好，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品(批號(hào):110601)適量，加流動(dòng)相溶解并分別稀釋制成每1 mL中約含16 mg、20 mg、24 mg的溶液，每個(gè)濃度各分別制備3份溶液，搖勻，經(jīng)0.2 μm過(guò)濾，精密量取50 μL續(xù)濾液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，RSD為0.15%，表明該方法重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

2.5 重均分子量及分子量分布的測(cè)定 取供試品溶液(批號(hào):110601、110602、110603)，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，三批供試品重均分子量均在110 000～150 000，10%大分子部分重均分子量均小于380 000，10%小分子部分重均分子量均大于15 000，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

通過(guò)上述方法學(xué)驗(yàn)證，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好，完全不依賴未知樣品與標(biāo)樣結(jié)構(gòu)及性質(zhì)的相似性，能快速、準(zhǔn)確地測(cè)定物質(zhì)的重均、數(shù)均和Z均分子量及分子量分布，適合羥乙基淀粉130/0.4重均分子量及分子量分布檢測(cè)。

表4 羥乙基淀粉200/0.5重均分子量及分子量分布測(cè)定結(jié)果

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