高 輝，徐麗華

(山東省食品藥品檢驗(yàn)所，山東濟(jì)南250101)

肛安栓是由地榆炭、五倍子、鹽酸小檗堿、人工麝香、冰片等5味中藥組成的復(fù)方制劑，具有涼血止血，清熱解毒，燥濕斂瘡，消腫止痛功效，臨床上用于濕熱下注所致的內(nèi)痔、混合痔以及炎性外痔。本品是煙臺(tái)榮昌制藥有限公司獨(dú)家生產(chǎn)的品種，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS3－129(Z－129)－2001(Z)。冰片是肛安栓中的主要有效成分之一，具有清熱止痛的作用，且冰片在制備、儲(chǔ)存的過(guò)程中易揮發(fā)損失。為更好的控制肛安栓的內(nèi)在質(zhì)量，研究建立冰片的GC的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N氣相色譜儀(Agilent公司，美國(guó))，Sartorius CP225D電子天平(Sartorius公司，德國(guó));冰片由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，含量測(cè)定用，批號(hào)為110743－200504;樣品和陰性對(duì)照均由煙臺(tái)榮昌制藥有限公司提供，樣品批號(hào)為090501、090502、100101。乙酸乙酯為分析純。

2 方法與結(jié)果［1～4］

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent HP－FFAP石英毛細(xì)管柱(0.25 mm ×30.0 m，0.25 μm)，柱溫 130 ℃，進(jìn)樣口溫度 180℃;檢測(cè)器溫度230℃;氫離子火焰檢測(cè)器;恒流;分流比40∶1。冰片出峰后采用程序升溫，以減少其他雜質(zhì)在色譜柱中的殘留。

表1 程序升溫

2.2 溶液的制備 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取冰片對(duì)照品11.60 mg，加乙酸乙酯溶解并稀釋至10 mL，作為對(duì)照品溶液(濃度為:1.16 mg·mL－1)。

供試品溶液的制備:取重量差異項(xiàng)下的本品，切細(xì)，取約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯25 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10 min，搖勻，濾過(guò)，濾液于4℃的冷藏室中放置3 h，取出，迅速濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液(C對(duì)為0.29 mg·mL－1)0.2、1、2、3、4、5 μL，注入氣相色譜儀，分別測(cè)定峰面積。以冰片對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)X，龍腦峰、異龍腦峰面積之和為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=389.101X+16.285，相關(guān)系數(shù) r=0.999 97。表明冰片進(jìn)樣量在0.058～1.450 0 μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 儀器精密度試驗(yàn) 精密吸取冰片對(duì)照品溶液(C對(duì)為0.58 mg·mL－1)1 μL，注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，測(cè)定龍腦、異龍腦的峰面積之和，RSD為0.25%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn) 取2.2項(xiàng)下的供試品溶液，精密吸取1 μL，注入氣相色譜儀，每隔2 h進(jìn)樣一次，測(cè)定龍腦、異龍腦的峰面積之和，共考察10 h，RSD為0.28%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取肛安栓(山東榮昌制藥股份有限公司，批號(hào)090502)約2 g，照2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，平行制備6份樣品，按上述方法和條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果平均含量為6.16 mg/粒，RSD為1.70%，表明本品含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知含量的本品(山東榮昌制藥股份有限公司，批號(hào)為090502，含量6.16 mg/粒，平均粒重1.004 6 g)約1 g，精密稱定，共取6份，置具塞錐形瓶中，各分別精密加入冰片對(duì)照品5 mg，精密加入乙酸乙酯25 mL，超聲處理(功率500 W，頻率40 kHz)10 min，搖勻，濾過(guò)，濾液于4℃的冷藏室中放置3 h，取出，迅速濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。按上述條件進(jìn)行測(cè)定，分別計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 專屬性試驗(yàn) 取處方中除去冰片的其他藥味，按處方比例制成缺冰片的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品約2 g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各1 μL，注入氣相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜保留時(shí)間相同的位置上，有相應(yīng)色譜峰，而陰性對(duì)照無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

2.9 樣品測(cè)定 按供試品溶液的制備方法及上述色譜條件對(duì)3批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果分別為 6.0 mg/粒、6.2 mg/粒、6.0 mg/粒。

3 討論

3.1 供試品溶液的制備 過(guò)程中考察了不同提取溶劑(環(huán)乙烷、乙酸乙酯和甲醇)，結(jié)果表明，乙酸乙酯提取冷藏后，基質(zhì)凝固均勻，易除去，測(cè)得含量較高。故最終確定提取溶劑為乙酸乙酯。

圖1 冰片對(duì)照品的GC色譜圖

圖2 供試品的GC色譜圖

3.2 實(shí)驗(yàn)中考察了不同提取方式(超聲后直接冷藏3 h、超聲后濾過(guò)，－7℃冷凍30 min及超聲后濾過(guò)，分別冷藏2 h、3 h和過(guò)夜)。結(jié)果表明，冷藏3 h基質(zhì)凝固均勻，易濾過(guò)除去，且測(cè)得含量略高，故選之。

3.3 考察不同取樣量(1.0、2.0、3.0 g)，結(jié)果表明，取1.0 g、2.0 g測(cè)得含量結(jié)果無(wú)顯著性差異，3.0 g測(cè)得含量略低。結(jié)合溶液含冰片的濃度及考慮樣品的均一性，確定取樣量為2.0 g。

3.4 實(shí)驗(yàn)考察了兩種色譜柱 Agilent HP－FFAP(0.25 mm×30.0 m，0.25 μm)鍵合和改性的交聯(lián)聚乙二醇毛細(xì)管柱;Agilent INNOWAX(0.25 mm ×30.0 m，0.25 μm)鍵合/交聯(lián)聚乙二醇固定相毛細(xì)管柱。按上述確定的方法和條件進(jìn)行測(cè)定，兩種色譜柱的測(cè)定結(jié)果表明用該色譜條件測(cè)定冰片，對(duì)稱因子、分離度和理論板數(shù)等均能基本符合2010年版《中國(guó)藥典》對(duì)氣相色譜分析的有關(guān)要求，選擇該色譜條件測(cè)定冰片，對(duì)色譜柱選擇性不強(qiáng)，適用范圍廣。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄38.

［2］蔡鋁鋁，潘金火，金芝蘭.GC測(cè)定鎮(zhèn)江巴布膏中冰片、薄荷腦、樟腦和水楊酸甲酯的含量［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25(1):54 －57.

［3］秦臻，彭紹忠，陳海明.抗流感滴丸中新莪術(shù)二酮的含量測(cè)定［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(2):43－45.

［4］張淼，袁浩，馮麗.GC法測(cè)定撥云散眼藥中龍腦、異龍腦的含量［J］.中國(guó)藥事，2011，25(1):79－80.