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        瑞香狼毒水提取物對人膀胱癌T24細胞Survivin表達的影響

        2012-10-17 03:28:42李建文張雁鋼
        中國醫(yī)藥導報 2012年10期
        關鍵詞:瑞香狼毒膀胱癌

        申 彥 李建文 張雁鋼

        1.山西醫(yī)科大學,山西太原 030001;2.山西醫(yī)學科學院山西大醫(yī)院泌尿外科,山西太原 030001

        膀胱腫瘤是泌尿系腫瘤中最常見的腫瘤,多數(shù)為移行上皮細胞癌,國外膀胱腫瘤的發(fā)病率在男性泌尿生殖器腫瘤中僅次于前列腺癌,居第2位,在國內則占首位。隨著對生存素(Survivin)基因的研究深入,發(fā)現(xiàn)Survivin基因作為一種凋亡抑制基因在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用,且與腫瘤的分級、分期密切相關。本研究應用中藥瑞香狼毒水提取物作用于人膀胱癌T24細胞,探討瑞香狼毒對膀胱癌T24細胞生物學行為的影響,以期為臨床開辟新治療途徑提供理論依據。現(xiàn)將結果報道如下:

        1 材料與方法

        1.1 材料

        1.1.1 來源 人膀胱癌T24細胞株由山西醫(yī)科大學寄生蟲實驗中心提供。瑞香狼毒購自山西省醫(yī)藥公司,山西醫(yī)科大學藥物學院進行藥物提取。

        1.1.2 主要試劑 RPMI-1640為賽默飛世爾生物化學制品(北京)有限公司產品;胎牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司產;二甲基亞砜(DMSO)為天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心產品;絲裂霉素為日本協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會社富士工廠產品;兔抗人Survivin單克隆抗體(工作液)為中杉金橋公司產品。

        1.1.3 主要設備 超凈工作臺,相差倒置顯微鏡,二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱,水浴箱,水平離心機,全自動ELX800酶聯(lián)免疫分析儀,流式細胞儀。

        1.2 方法

        1.2.1 細胞培養(yǎng) 將膀胱癌T24細胞復蘇后接種至培養(yǎng)瓶,加含有10%胎牛血清和雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基5 mL瓶蓋微松,放置37℃,5%CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中,每2~3天更換培養(yǎng)液,待細胞生長至貼滿培養(yǎng)瓶壁時,用0.25%胰酶消化傳代。

        1.2.2 MTT法檢測膀胱癌T24細胞抑制率 將細胞消化、計數(shù),將其接種至96孔培養(yǎng)板中,每孔5×104個細胞,容積100 μL,置CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12 h細胞貼壁后,于96孔板中依次加入不同濃度的瑞香狼毒水提取物(0.04、0.2、1、5 g/mL)每一濃度設6個復孔,同時設一個空白組(僅加入100 μL RPMI-1640培養(yǎng)基)和對照組(未加藥物的100 μL細胞懸液)。繼續(xù)培養(yǎng) 12、24、48、72 h 后, 每孔加入 MTT 試劑 20 μL,置CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄上清,每孔加二甲基亞砜100 μL置搖床上混勻,10 min后用酶標儀在490 nm發(fā)射波長下讀OD數(shù)值,計算細胞抑制率。抑制率的計算:抑制率=(1-OD處理組/OD對照組)×100%。

        1.2.3 細胞凋亡率的檢測 將對數(shù)生長期的膀胱癌T24細胞消化、計數(shù),種植于6孔板內,每孔1×106個細胞,容積3 mL。待12 h細胞附壁后加入不同濃度藥物。實驗分為對照組(未加藥物的 100 μL 細胞懸液),藥物組(0.04、0.2、1、5 g/mL)每組設5個復孔,作用48 h后收集細胞,Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑進行染色,流式細胞儀檢測細胞凋亡率。

        1.2.4 免疫細胞化學 取對數(shù)生長期膀胱癌T24細胞,消化、計數(shù),種植于6孔板內,每孔1×105個細胞,容積3 mL。12 h細胞附壁后加藥干預,實驗分為對照組(未加藥物的100 μL細胞懸液),藥物組(0.04、0.2、1、5 g/mL)每組設 5 個復孔,作用48 h后進行免疫細胞化學染色,加入兔抗人Survivin單克隆抗體工作液,4℃溫箱孵育過夜,次日滴加二抗(羊抗兔)、顯色劑,封片后觀察細胞Survivin蛋白的表達。實驗以細胞胞漿或細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結果,在顯微鏡下拍照并行灰度值測定。

        1.3 統(tǒng)計學方法

        應用SPSS 17.0軟件對數(shù)據進行單因素方差分析,多個樣本均數(shù)間兩兩比較采用Bonferroni法檢驗,計量資料采用均數(shù)±標準差(±s)表示,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 MTT法檢測結果

        瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞的生長抑制作用通過MTT法檢測不同濃度藥物分別處理12、24、48、72 h后,測各組細胞吸光度(表1)及抑制率(表2),結果顯示瑞香狼毒水提取物對該細胞株有明顯的生長抑制作用,濃度越高作用,時間越長,抑制作用越明顯。

        表1 不同濃度瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞作用的OD值(±s)

        表1 不同濃度瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞作用的OD值(±s)

        注:與對照組比較,★P<0.05;每個藥物濃度組與前一藥物濃度組比較,△P<0.05;每個時間段與前一時間段比較,○P<0.05

        藥物濃度(g/mL)OD值12 h 24 h 48 h 72 h對照組0.04 0.2 15 0.69±0.03 0.61±0.03★0.56±0.07★0.40±0.02★△0.32±0.05★△0.73±0.04 0.57±0.03★0.43±0.02★△○0.37±0.06★0.28±0.03★△0.76±0.04 0.53±0.05★0.38±0.03★△○0.30±0.05★△○0.22±0.05★△○0.82±0.04 0.46±0.05★○0.28±0.05★△○0.23±0.05★○0.15±0.02★△○

        2.2 凋亡率檢測結果

        藥物組(0.04、0.2、1、5 g/mL)分別作用于膀胱癌 T24 細胞 48 h 后,細胞凋亡率分別為(11.67±2.61)%、(22.40±3.18)%、(38.29±2.30)%、(57.57±3.77)%,各組與對照組凋亡率[(1.05±0.34)%]比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),高濃度組與低濃度組比較差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果顯示,隨著藥物濃度的增高,膀胱癌T24細胞的凋亡率增加。

        表2 不同濃度瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞增殖抑制率(±s,%)

        表2 不同濃度瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞增殖抑制率(±s,%)

        注:每個濃度組與前一濃度組比較,▲P<0.05;每個時間段與前一時間段比較,◇P<0.05

        藥物濃度(g/mL)抑制率12 h 24 h 48 h 72 h 0.04 0.2 15 12.49±4.09 19.10±9.68 42.33±3.52▲54.55±6.77▲21.99±4.48◇41.40±3.22▲◇48.86±7.65 61.16±4.48▲30.00±6.44 50.01±3.31▲60.74±6.64▲◇71.58±6.03▲◇44.72±5.67◇65.70±6.23▲◇71.58±5.84◇81.59±2.26▲◇

        2.3 免疫細胞化學結果

        藥物組(0.04、0.2、1、5 g/mL)分別作用于膀胱癌 T24 細胞48 h后,經過免疫細胞化學染色、封片、顯微鏡下拍照后,測各組灰度值分別為(142.49±1.67)、(152.14±2.66)、(161.63±4.44)、(171.72±1.17),各組與對照組灰度值(130.84±4.99)比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),高濃度組與低濃度組比較差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果顯示,瑞香狼毒水提取物作用于膀胱癌T24細胞后,下調細胞中Survivn蛋白表達,濃度越高,下調作用愈明顯。

        3 討論

        瑞香狼毒為瑞香科狼毒屬植物,又名紅狼毒、棉大戟、斷腸草等,為中藥狼毒之正品,有毒,用藥部位為根,性味苦平,有逐水祛痰、破積殺蟲之功效?,F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤、抗病毒、調節(jié)免疫等活性[1]。國外膀胱癌的發(fā)病率在男性泌尿生殖腫瘤中僅次于前列腺癌,在我國則占首位。目前,國內外采用綜合治療措施,藥物治療在其中發(fā)揮重要作用。國內外學者在瑞香狼毒對肺癌、肝癌、宮頸癌等惡性腫瘤的研究中取得一定成果[2-4],但對泌尿系統(tǒng)如膀胱癌細胞的抗腫瘤研究少有報道。Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡抑制因子,具有高度保守性和明顯抵抗細胞凋亡的作用,參與調控細胞分裂、增殖等過程[5]。Survivin在除胸腺外正常組織中不表達,而在大部分腫瘤細胞中高表達[6]。Survivin基因作為一種凋亡抑制基因在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用[7-8],其表達情況與腫瘤的分級、分期密切相關[9-10],可以作為膀胱癌早期診斷及判斷預后的檢查指標[11]。本實驗研究選擇人膀胱癌T24細胞株,給予膀胱癌T24細胞不同濃度瑞香狼毒處理后,觀察細胞的抑制率、凋亡率以及Survivin蛋白表達的情況。結果顯示:瑞香狼毒水提取物對膀胱癌T24細胞具有明顯的抑制作用,具有濃度和時間依賴性。研究結果還發(fā)現(xiàn)瑞香狼毒水提取物促進膀胱癌T24細胞凋亡并下調Survivin蛋白的表達。

        綜上所述,瑞香狼毒水提取物可誘導膀胱癌細胞發(fā)生凋亡,抑制腫瘤細胞增殖,其作用機制可能與Survivin蛋白表達的下調有關。由于藥物促使腫瘤細胞凋亡是通過多條途徑共同作用的結果,因此需要進一步深入研究,為開辟膀胱癌臨床治療新途徑提供理論依據。

        [1]羅慧英,王愛勤.不同極性溶媒瑞香狼毒提取物的抗腫瘤活性比較[J].中國臨床藥理學與治療學,2005,10(10):1140-1141.

        [2]Yoshida M,Yokokura H,Hidaka H,et al.Mechanism of antitum or action of PKC activator,gnidimacrin[J].Int J Cancer,1998,77(2):243-252.

        [3]馮威健,池川哲郎,吉田光二.瑞香狼毒提取物尼地嗎啉的抗癌活性[J].中華腫瘤雜志,1995,17(1):24-29.

        [4]Yoshida M,F(xiàn)eng WJ,Saijo N,et al.Antitum or activity of daphnanetype diterpene gnidimacrin isolated from Stellera chamaejasme L [J].Int J Cancer,1996,66(2):268-278.

        [5]Ambrosini G,Adida C,Altieri DC.Anovel antiapoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917-921.

        [6]Hoffman WH,Biade S,Zilfou JT,et al.Transcriptional repression of the anti-apoptotic survivin gene by wild type p53 [J].J Biol Chem,2002,277(5):3247-3257.

        [7]Kitsukawa S,Aoyagi T,Noda K,et al.Quantitative analysis of survivin mRNA expression in bladder transitional cell carcinomas[J].Hinyokika Kiyo,2008,54(2):101-106.

        [8]Kitamura H,Torigoe T,Honma I,et al.Expression and antigenicity of survivin,an inhibitor of apoptosis family member,in bladder cancer:implications for specific immunotherapy[J].Urology,2006,67(5):955-959.

        [9]Karam JA,Lotan Y,Ashfaq R,et al.Survivin expression in patients with non-muscle invasive urothelial cell carcinoma of the bladder[J].Urology,2007,70(3):482-486.

        [10]Swana HS,Grossman D,Anthony JN,et al.Tumor content of the anti apoptosis molecule survivin and recurrence of bladder cancer [J].N Engl J Med,1999,341(6):452-453.

        [11]Schultz IJ,Kiemeney LA,Karthaus HF,et al.Survivin mRNA copy number in bladder washings predicts tumor recurrence in patients with superficial urothelial cell carcinomas [J].Clin Chem,2004,50(8):1425-1428.

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