邱志遠(yuǎn) 滿昌峰 彭輝勇 范鈺

·短篇論著·

表沒食子兒茶素沒食子酸醋對人胃癌細(xì)胞遷移、襲和FoxM1基因表達(dá)的影響

邱志遠(yuǎn) 滿昌峰 彭輝勇 范鈺

目的 觀察表沒食子兒茶素沒食子酸醋(表沒食子兒茶素沒食子酸醋，EGCG)對人胃癌細(xì)胞遷移、侵襲的影響，并探討其可能機(jī)制。方法 采用不同濃度的EGCG處理人胃癌BGC823細(xì)胞后，以劃痕試驗(yàn)方法檢測癌細(xì)胞遷移能力，以Transwell方法檢測癌細(xì)胞侵襲能力，采用蛋白質(zhì)印跡方法檢測FoxM1基因蛋白水平變化。結(jié)果 人胃癌BGC823細(xì)胞經(jīng)EGCG處理后，遷移和侵襲能力均明顯下降，且呈劑量依賴性(P＜0.01)。EGCG處理組FoxM1基因蛋白水平明顯下調(diào)，且呈濃度依賴性。結(jié)論EGCG可降低人胃癌細(xì)胞侵襲能力，下調(diào)FoxM1基因表達(dá)，是其重要機(jī)制之一。

胃腫瘤;表沒食子兒茶素沒食子酸醋;侵襲;FoxM1

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和死亡率很高。大多數(shù)胃癌患者發(fā)現(xiàn)時即已有癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，尋找理想的抗癌藥物是當(dāng)務(wù)之急，表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是茶多酚中一種重要成分，國內(nèi)外許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)，EGCG在體內(nèi)外對許多腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用［1-5］，但是EGCG對人胃癌細(xì)胞遷移侵襲研究極少，也不明了其抗癌的分子機(jī)制。2012年6月至2012年8月，本課題組培養(yǎng)人胃癌BGC823細(xì)胞，并應(yīng)用EGCG處理，從體外觀察了對癌細(xì)胞遷移、侵襲和FoxM1基因基因蛋白的影響。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理 人胃癌BGC823細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640液中，在37℃、CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。待細(xì)胞至對數(shù)生長期，采用不同濃度(20、40、80 μm)的EGCG)處理，以RPMI 1640代替EGCG處理細(xì)胞作為對照組，3復(fù)孔。

1.2 癌細(xì)胞遷移檢測 采用劃痕法檢測癌細(xì)胞遷移能力。實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［6］進(jìn)行。拍照，計(jì)算間距。

1.3 細(xì)胞侵襲檢測 采用Transwell方法檢測癌細(xì)胞侵襲能力，實(shí)驗(yàn)方法參照文獻(xiàn)［6］進(jìn)行，計(jì)算各組穿過濾膜的癌細(xì)胞數(shù)目。

1.4 FoxM基因蛋白檢測 于EGCG處理癌細(xì)胞不同時間(24、48、72 h)后，收集各組細(xì)胞，提取細(xì)胞總蛋白，蛋白定量后進(jìn)行常規(guī)蛋白質(zhì)印跡檢測。利用Kodak數(shù)碼軟件，測各條帶凈灰度值，并與內(nèi)參照β-actin的測定結(jié)果相比較，計(jì)算其比值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，所得到的數(shù)值均以±s表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EGCG對人胃癌細(xì)胞遷移的影響 采用劃痕法觀察EGCG對癌細(xì)胞遷移間距的影響，結(jié)果顯示，EGCG組(80 μm、40 μm、20 μm)和對照組的間距分別為656±30、522± 12、407±10、258±70(μm)，處理組距離明顯大于空白對照組，具有劑量依賴性。

2.2 EGCG對胃癌細(xì)胞侵襲的影響 收集經(jīng)EGCG處理的BGC823細(xì)胞，采用Transwell檢測癌細(xì)胞侵襲情況。對照組、不同濃度(20、40、80 μm)EGCG處理組細(xì)胞穿過濾膜的細(xì)胞分別為38.6±1.5(個)，28.2±1.8(個)、15.8±1.2(個)、7.8 ±1.6(個)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示，細(xì)胞侵襲呈濃度依賴性減少(P＜0.01)。

2.3 EGCG對胃癌細(xì)胞FoxM1蛋白的影響 以EGCG處理胃癌823細(xì)胞后，采用蛋白質(zhì)印跡方法檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，EGCG各處理組FoxM1基因蛋白水平明顯下調(diào)，且呈濃度依賴性。

3 討論

遷移性是轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞重要特征之一。體外培養(yǎng)時，正常細(xì)胞具有遷移的接觸抑制，因而呈單層生長;而癌細(xì)胞喪失了遷移的接觸抑制，從而呈多層重疊生長。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌BGC823細(xì)胞具有較強(qiáng)的遷移性，而經(jīng)EGCG處理后，細(xì)胞遷移距離明顯縮短。

［1］ Kato K，Long NK，Makita H，et al.Effects of green tea polyphenol on methylation status of RECK gene and cancer cell invasion in oral squamous cell carcinoma cells.Br J Cancer，2008，99(4): 647-654．

［2］ Kushima Y，Iida K，Nagaoka Y，et al.Inhibitory effect of(-)-epigallocatechin and(-)-epigallocatechin gallate against heregulin betal-induced migration/invasion of the MCF-7 breast carcinoma cell line.Biol Pharm Bull，2009，32(5):899-904．

［3］ Larsen CA，Dashwood RH.(-)-Epigallocatechin-3-gallate inhibits Met signaling，proliferation，and invasiveness in human colon cancer cells.Arch Biochem Biophys，2010，501(1):52-57．

［4］ Sen T，Chatterjee A.Epigallocatechin-3-gallate(EGCG)downregulates EGF-induced MMP-9 in breast cancer cells:involvement of integrin receptor α5β1 in the process.Eur J Nutr，2011，50(6): 465-478．

［5］ Singh T，Katiyar SK.Green tea catechins reduce invasive potential of human melanoma cells by targeting COX-2，PGE2 receptors and epithelial-to-mesenchymal transition. PLoS One，2011，6 (10):25224．

［6］ Fan Y，Zhang YL，Wu Y，et al.Inhibition of signal transducer and activator of transcription 3 expression by RNA interference suppresses invasion through inducing anoikis in human colon cancer cells.World J Gastroenterol，2008，14(3):428-434．

［7］ Wang Z，Ahmad A，Li Y，et al.Forkhead box M1 transcription factor:a novel target for cancer therapy．Cancer Treat Rev，2010，36(2):151-156．

［8］ Kim I M，Ackerson T，Ramakrishna S，et al.The forkhead box Ml transcription factor stimulates the proliferation of tumor cells during development of lung cancer．Cancer Res，2006，66(4):2153-2161．

［9］ Liu M，Dai B，Kang S H，et al.FoxM1B is overexpressed in human glioblastomas and critically regulates the tumorigenicity of glioma cells．Cancer Res，2006，66(7):3593-3602．

［10］ Li Q，Zhang N，Jia Z，et al.Critical role and regulation of transcription factor FoxM1 in human gastric cancer angiogenesis and progression．Cancer Res，2009，69(8):3501-3509．

［11］ Yau C，Wang Y，Zhang Y，et al.Young age，increased tumor proliferation and FOXM1 expression predict early metastatic relapse only for endocrine-dependent breast cancers．Breast Cancer Res Treat，2011，126(3):803-810．

［12］ Xia JT，Wang H，Liang LJ，et al.Overexpression of FOXM1 Is associated with poor prognosis and clinicopathologic stage of pancreatic ductal adenocarcinoma．Pancreas，2012，41(4):629-635．

Effects of EGCG on migration and invasion and FoxM1 expression of human gastric cancer cell

QIU Zhi-yuan，MAN Chang-feng，PENG Hui-yong，et al．Cancer Institute，Affiliated People’s of Hospital of Jiangsu University，Jiangsu 212002，China

ObjectiveTo study the effects and mechanism of EGCG on migration and invasion of human gastric cancer cell.MethodsAfter human gastric cancer BGC823 cell were treated with different doses of EGCG，and migration of cancer cell was studied by wound scratch assay，and invasion ability were determined by Transwell assay，and the e protein of MK gene were detected by Western Blot assay.ResultsEGCG could significantly inhibit both invasion ability and a migration in a dose-dependent manner.ConclusionEGCG could inhibit migration and invasion of gastric carcinoma cell line BGC823 through down-regulating of FoxM1 expression．

Gastric carcinoma;EGCG;Invasion;FoxM1

鎮(zhèn)江市社會發(fā)展基金(項(xiàng)目編號:SH2009014)

212002鎮(zhèn)江，江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院腫瘤研究所通訊作者:范鈺

腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移過程非常復(fù)雜，盡管不同種類腫痛侵襲、轉(zhuǎn)移特性有所不同，但侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)鏈步驟基本相同。惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移過程首先包括腫瘤細(xì)胞的分離脫落(即惡性腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤病灶脫離)，然后向周圍組織侵襲，當(dāng)腫瘤細(xì)胞從原發(fā)腫瘤分離脫落后，必須穿透原發(fā)腫瘤周圍的宿主結(jié)締組織才能進(jìn)人循環(huán)系統(tǒng)，之后通過血液循環(huán)和淋巴循環(huán)游走到遠(yuǎn)處組織器官，形成繼發(fā)性腫痛。在此過程中，腫瘤細(xì)胞侵襲細(xì)胞外基質(zhì)是重要的步驟。本研究觀察到人胃癌BGC823細(xì)胞具有較強(qiáng)的侵襲能力，經(jīng)EGCG處理后，侵襲力明顯下降。由此說明，EGCG對胃癌細(xì)胞侵襲具有明顯的抑制作用。

眾多基因參與癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過程，F(xiàn)oxM1信號在許多惡性腫瘤的發(fā)展中扮演著一個至關(guān)重要的角色［7］。研究發(fā)現(xiàn)，在人肺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、肝癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌等許多惡性實(shí)體瘤中，F(xiàn)oxM1均過表達(dá)［8-11］;且發(fā)FoxM1過表達(dá)與胰腺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后密切相關(guān)［12］。本研究以EGCG處理胃癌細(xì)胞后，以蛋白質(zhì)印跡方法檢測FoxM1基因蛋白水平，結(jié)果顯示，EGCG各處理組MK蛋白水平明顯下調(diào)。因此，我們推測，EGCG抑制胃癌細(xì)胞遷移侵襲，可能與下調(diào)FoxM1基因表達(dá)有關(guān)。

本研究結(jié)果提示，EGCG可明顯降低胃癌細(xì)胞體外惡性遷移和侵襲能力，下調(diào)FoxM1基因蛋白表達(dá)，是其重要機(jī)制之一。