潘百明，譚廷天

(賀州學(xué)院 化學(xué)與生物工程系，廣西 賀州 542899)

1 引 言

雞球蟲病是雞常見且危害十分嚴(yán)重的寄生蟲病，是由一種或多種艾美耳屬腸道寄生原蟲引起的。主要危害15到50日齡的雛雞，其發(fā)病率高達(dá)30%到100%，死亡率達(dá)20%到80%，且發(fā)病耐過的雞生長發(fā)育遲緩，產(chǎn)蛋率減少［1］。它造成的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重，給全球養(yǎng)雞業(yè)造成巨額經(jīng)濟(jì)損失，據(jù)資料顯示，每年造成的經(jīng)濟(jì)損失約12 億美元［2］15－16。而我國每年僅抗球蟲藥即消耗約6—18億人民幣［3］31。目前我國雞球蟲防治主要是以預(yù)防為主:在飼料中添加球蟲藥這種方式來預(yù)防球蟲感染，治療為輔;雞體一旦感染了球蟲病，即使治療，其腸道功能也難以完全恢復(fù)正常，會直接影響營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而引起飼料報(bào)酬與增重不同程度的下降［4］293。飼料利用率低，料肉比高，這種效果明顯會影響?zhàn)B殖場和養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)收入，浪費(fèi)了大量資源和人力。

賀州地處桂湘粵三省交界，地理環(huán)境復(fù)雜、氣候多變，球蟲種類及感染情況尚未有過報(bào)道。為了提供賀州雞球蟲病的預(yù)防和治療理論依據(jù)，筆者于2010—2011年在賀州市范圍內(nèi)進(jìn)行了雞球蟲種類及感染情況調(diào)查，不僅填補(bǔ)了該地區(qū)球蟲種類的空白，也為賀州預(yù)防和治療雞球蟲病提供理論依據(jù)，為雞球蟲耐藥性研究做好基礎(chǔ)工作。

2 儀器、材料與方法

2.1 儀器、材料

儀器包括高速離心機(jī)，攝影顯微鏡，手術(shù)刀，細(xì)口瓶，冰箱，培養(yǎng)箱，60目鋼絲篩等;試劑包括2.5%重鉻酸鉀，飽和食鹽水等;實(shí)驗(yàn)對象為15－30日齡的雛雞。

2.2 采集時間、地點(diǎn)及對象

從2010到2011年期間，分別在賀州市范圍內(nèi)的20多個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，隨機(jī)選取雞場為調(diào)查范圍，采集各個日齡的雛雞的新鮮混合糞便，用薄膜袋編號帶回實(shí)驗(yàn)室，記錄采集地點(diǎn)和采集樣品數(shù)量，1份雞糞的量是以雞場或村莊為單位，共采集60份樣品。

2.3 卵囊分離和保存

2.3.1 卵囊收集

取雞糞的樣品加適量的飽和食鹽水?dāng)嚢杈鶆颍?0目鋼絲篩過濾去掉粗雜部分，取濾液置離心機(jī)以轉(zhuǎn)速為2500r/min離心5分鐘，去掉雜質(zhì)，取上清液加10倍蒸餾水?dāng)嚢杈鶆?，再置于離心機(jī)與上同速離心10min，棄上清液，得到沉淀部分(內(nèi)有卵囊)。

2.3.2 卵囊培養(yǎng)

取以上分離出來的蟲卵加入2.5%的重鉻酸鉀溶液，搖均勻后置280C恒溫箱通氣培養(yǎng)，培養(yǎng)12小時后每隔三小時觀察一次卵囊發(fā)育狀況，直至卵囊完全孢子化后停止培養(yǎng)。

40年前，改革開放的號角如春雷般響徹中華大地，驚醒了沉睡中的東方，讓神州大地迸發(fā)出勃勃生機(jī)，開辟了中華民族由站起來走向富起來、強(qiáng)起來的復(fù)興之路。

2.3.3 卵囊保存

將培養(yǎng)后的卵囊放入2.5%重鉻酸鉀溶液中置4I℃ 冰箱保存。

2.4 球蟲鑒定

2.4.1 球蟲卵囊觀察

在顯微鏡(目鏡16×物鏡100)下觀察卵囊形態(tài)、顏色、有無卵膜孔、極體、卵囊外殘殖體、內(nèi)殘殖體、最早孢子化時間及孢子囊形態(tài)，參考有關(guān)資料①對蟲種進(jìn)行鑒定并進(jìn)行顯微攝影。

2.4.2 觀察腸道病變部位及病變特征

選擇6組具有典型代表性的球蟲卵囊編號為1、2、3、4、5、6，經(jīng)初步鑒定分別為柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和和緩艾美耳球蟲，感染對應(yīng)編號為(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)的15 － 30 日齡雞，每組10只，用等同數(shù)量的雞設(shè)置一個對照組編號為(7)。待其發(fā)病后撲殺并對病雞進(jìn)行解剖，觀察腸道病變部位及病變特征，并且刮取對應(yīng)的腸道內(nèi)粘液進(jìn)行二次鏡檢①。

3 結(jié)果與分析

3.1 雞球蟲種類

對60份雞糞進(jìn)行鏡檢，并進(jìn)行顯微攝影，共檢出艾美耳屬(Eimeria)球蟲6種:即柔嫩艾美耳球蟲(E.tenella)，毒害艾美耳球蟲(E.necatrix)，堆型艾美耳球蟲(E.acervulina)，巨型艾美耳球蟲(E.maxima)，和緩艾美爾球蟲(E.mitis)和早熟艾美耳球蟲(E.praecox)。6種球蟲的顯微攝影圖詳見(圖1、圖2、圖3、圖4、圖 5、圖6)所示:

3.2 6種雞球蟲的形態(tài)特征與感染率

通過對雞糞中分離出來的球蟲卵囊進(jìn)行鏡檢，統(tǒng)計(jì)含每一種球蟲的樣品數(shù)并計(jì)算出感染率。6種球蟲的形態(tài)及感染率見下表(表1)。

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3.3 實(shí)驗(yàn)雛雞腸道病變部位及病變特征觀察結(jié)果

對照第(7)組，觀察實(shí)驗(yàn)組雛雞腸道病理變化，根據(jù)索勛［1］對病變部位特征的描述可以得到以下結(jié)果。

第(1)組觀察盲腸，多數(shù)盲腸可見大量出血，個別盲腸出血部位可以擴(kuò)伸到其他部位的消化道粘膜。盲腸腫的非常大且整個腸道的厚度都明顯比正常的厚，里面有液態(tài)狀或半固體狀的血液，而且從漿膜面看非常明顯，外觀為暗紅色的瘀點(diǎn)，初步確定為柔嫩艾美耳球蟲。

第(2)組觀察小腸中段，突出特征是小腸長度大約為正常長度的一半，直徑大約為正常的2倍多，粘膜顏色是緋紅色，腸壁往往充血，可見到粘膜上出現(xiàn)血紅斑點(diǎn)和灰白色針尖大到針帽大的壞死灶。壞死灶可延伸到粘膜深處，腸內(nèi)容物為暗紅色或猩紅色而且含血凝塊，呈“鹽和黑胡椒”狀外觀，初步確定為毒害艾美耳球蟲。

第(3)組觀察到十二指腸極少出血，少部分充血而且出現(xiàn)瘀斑，初步確定為堆型艾美耳球蟲。

第(4)組觀察到小腸近段和中部是粘膜發(fā)炎部位，可見水腫，有出血現(xiàn)象，腸內(nèi)容物為橙黃色體，初步確定為巨型艾美耳球蟲。

第(5)組觀察到小腸前段腸道內(nèi)有水樣的內(nèi)容物，粘膜表面可見針尖大的出血點(diǎn)，初步確定為早熟艾美耳球蟲。

第(6)組觀察小腸前段無特別明顯的癥狀，可能有和緩艾美耳球蟲。

3.4 刮取各個部位粘液進(jìn)行二次鏡檢的結(jié)果

通過對比表1的六種球蟲形態(tài)特征，刮取實(shí)驗(yàn)雛雞腸道病變部位粘液進(jìn)行二次鏡檢發(fā)現(xiàn)的雞球蟲均與初次鏡檢的球蟲基本相同，最后確定球蟲種類分別是柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和和緩艾美耳球蟲。

3.5 統(tǒng)計(jì)球蟲混合感染的結(jié)果

統(tǒng)計(jì)鏡檢結(jié)果中混合感染球蟲的雞糞樣品數(shù)詳見下表(表2)。

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由表2可知，賀州市雞球蟲感染流行的情況是混合感染六種球蟲為主，占總感染雞糞份數(shù)(31)58.1%。說明該地區(qū)的球蟲病是由多種球蟲引起的，而不是單純由一種或兩種艾美耳球蟲引起的。所以防治球蟲病時不能單一的添加治療某一種球蟲的抗球蟲藥，而是按不同比例調(diào)配出混合抗球蟲藥進(jìn)行投藥。

3.6 球蟲致病優(yōu)勢種問題分析

由表1中感染率說明柔嫩艾美耳球蟲(74.1%)和毒害艾美耳球蟲(51.6%)為優(yōu)勢種，其中柔嫩艾美耳球蟲感染率最高，危害性最大。其次到毒害(51.6%)、堆型(45.1%)、巨型(41.9%)、和緩(35.4%)和早熟艾美耳球蟲(35.4%)，其危害性依次降低。據(jù)黃兵等［5］14－16調(diào)查發(fā)現(xiàn)，上海地區(qū)流行的優(yōu)勢球蟲為變位艾美耳球蟲(出現(xiàn)率為83%);李銘等［6］41－42、劉振湘等［7］26調(diào)查結(jié)果顯示均有柔嫩艾美耳球蟲這一優(yōu)勢種，后者檢出率為94.3%。與黃兵的結(jié)果不同可能是因?yàn)樯虾５貐^(qū)防治柔嫩艾美耳球蟲措施效果好;而與李銘、劉振湘的結(jié)果相同，說明賀州市在防治柔嫩艾美耳球蟲的措施不足，應(yīng)該加強(qiáng)防治柔嫩和毒害艾美耳球蟲的措施。因此，在不同地理區(qū)域的環(huán)境下檢測出球蟲優(yōu)勢種是不盡相同的，防治球蟲病的措施也必須因地制宜。

3.7 球蟲種類的差異性分析

本次調(diào)查的球蟲種類特征與索勛［1］的描述基本一致，個別蟲種的卵囊在形態(tài)上存在較大差異，如觀察發(fā)現(xiàn)一個球蟲卵囊比巨型艾美耳球蟲的卵囊大，對于該球蟲卵囊的鑒定有待進(jìn)一步研究。

3.8 賀州市雞球蟲的感染情況分析

對表1中的感染率算法及結(jié)果做個說明，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)條件的限制及鏡檢拍照時照片不能全面覆蓋整個樣品，只是局域畫面。因此統(tǒng)計(jì)含每一種球蟲種類的樣品數(shù)而非統(tǒng)計(jì)每個樣品中含有每種球蟲個數(shù)來表示感染率，前者統(tǒng)計(jì)方法雖然過于籠統(tǒng)，但是目前筆者尚未找到有關(guān)文獻(xiàn)對感染率的標(biāo)準(zhǔn)公式。對于感染率計(jì)算結(jié)果的意義在于代表性高于客觀性，但可以說明賀州市感染了該種球蟲而且實(shí)際感染率會高于本文的感染率。由表2可知為球蟲混合感染，應(yīng)引起我們的重視，做好防治雞球蟲病宣傳工作，運(yùn)用科學(xué)的綜合性預(yù)防措施防范該地區(qū)的球蟲病。

4 結(jié) 論

綜上所述，本次對賀州市雞球蟲種類調(diào)查的結(jié)論是共檢測出6種艾美耳球蟲，總感染率為51.6%。6種蟲分別是柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲、堆型艾美耳球蟲、巨型艾美耳球蟲、早熟艾美耳球蟲和和緩艾美耳球蟲。其中，柔嫩和毒害艾美耳球蟲為優(yōu)勢種，感染率分別為74.1%、51.6%，感染方式為混合感染。

5 展 望

由于本次調(diào)查范圍存在一定的區(qū)域局限性，加上人為因素的影響，造成調(diào)查研究結(jié)果不是十分全面，可能在賀州市還存在著其他種類的球蟲，如布氏、哈氏、變位艾美耳球蟲。因此，需要今后的學(xué)者不斷對賀州的雞球蟲進(jìn)行調(diào)查研究，完善該地區(qū)球蟲種類的統(tǒng)計(jì)，為防治球蟲病做出貢獻(xiàn)。

注釋:

①安健.球蟲病與雞球蟲抗藥性［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.左仰賢．球蟲學(xué)—畜禽和人的球蟲與球蟲?。跰］.天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社，1992:5．張保祥，張友三，郭?？⒌?陜西雞球蟲病的研究［J］.畜牧獸醫(yī)雜志－1986(6):26－27．白啟.蘭州和廣州地區(qū)雞球蟲種調(diào)查［J］.獸醫(yī)科技雜志，1981(12):18－24．黃兵，史天衛(wèi)，吳薛忠等.巨型艾美耳球蟲純種的初步確定和致病性研究［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，1995(4):l2－l4．

［1］索勛，李國清.雞球蟲病學(xué)［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社出版，1998．

［2］香港大方西藥公司.防治雞球蟲病的新措施［J］.禽業(yè)科技，1995(1).

［3］劉賢勇，索勛.雞球蟲病及其控制策略［J］.中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2006(5)．

［4］閆鴻斌，田廣孚，賈萬忠等．雞球蟲疫苗1號的免疫效果研究［J］.中國獸醫(yī)科學(xué)，2006(4)．

［5］黃兵，趙其平，陳燕軍，等．2002上海地區(qū)雞球蟲病情情況調(diào)查與防治對策［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲，2002(2)．

［6］李銘，荊安，黃和等.重慶市江濱地區(qū)雞球蟲種類調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，2002(1)．

［7］劉振湘，唐曉玲.湖南省衡陽市雞球蟲病病原種類及流行情況調(diào)查［J］.中國獸醫(yī)寄生蟲病，2001(2)．