黃云蘭，李諾利，梁耿，韋凱東

（廣西欽州市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西 欽州 535099 E－mail：huangyunlan2012＠163.com）

枸杞為茄科落葉灌木植物寧夏枸杞（Lycium barbarum L）的成熟果實(shí)，其含有黃酮類、多糖、多種氨基酸、生物堿、揮發(fā)油等多種天然化學(xué)成分。現(xiàn)代藥理研究表明［1，2］，枸杞具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降壓、降脂、降血糖和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。本實(shí)驗(yàn)通過建立鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）聯(lián)合高糖高脂飲食所致的2型糖尿病大鼠模型，探討枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠的血糖、游離脂肪酸（NEFA）等指標(biāo)的影響，為其豐富資源的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物與飼料 雄性SD大鼠60只，體重（200±20）g，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK桂2009－0002。高糖高脂飼料組成（100g）：豬油20g，膽固醇5g，脫氧膽酸鈉5g，蔗糖20g，合并普通飼料50g制成。

1.2 藥物與試劑 STZ：美國Sigma公司，批號(hào)：80082038。二甲雙胍片：北京京豐制藥有限公司，規(guī)格250mg／片，批號(hào)：111012。血糖試劑盒：四川邁克科技股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)：1211031。游離脂肪酸（NEFA）測試盒，谷胱甘肽（GSH）測試盒，超氧化物歧化酶（SOD）測試盒，丙二醛（MDA）測試盒，均由武漢博士德生物工程有限公司提供，批號(hào)：20120816。

1.3 儀器 722S紫外分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限責(zé)任公司。酶標(biāo)分析儀：美國Thermo Forma公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 枸杞多糖制備 實(shí)驗(yàn)提取流程：將枸杞粉碎后用70%乙醇室溫浸泡30min后，80°C回流提取1.5h，紗布過濾，濾液用漏斗抽濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮，然后分別用無水乙醇、丙酮多次洗滌，真空干燥揮干溶劑后，Sevag法除去蛋白質(zhì)，經(jīng)化學(xué)法鑒別為枸杞多糖類化合物即可使用。

2.2 2型糖尿病大鼠模型 正常對(duì)照組給予喂食普通飼料；其他實(shí)驗(yàn)用大鼠持續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，造模前禁食12h，腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）溶液40mg／kg，繼續(xù)投喂高糖高脂飼料至2周末，尾靜脈采血測空腹血糖（FBG），選取FBG≥16.8mmol／L的大鼠作為2型糖尿病模型［3］。

2.3 分組及給藥 經(jīng)檢測FBG確定成模后，隨機(jī)分成5組：模型組，二甲雙胍陽性組及枸杞多糖低、中、高劑量組，每組10只。枸杞多糖組分別灌胃給予枸杞多糖100、200、400mg／kg，陽性組給予二甲雙胍每天20mg／kg，連續(xù)灌胃30天，并設(shè)置正常組。末次給藥后，檢測FBG指數(shù)，比色法檢測血清中NEFA和GSH含量。ELISA法檢測肝臟組織中SOD活性和MDA含量。實(shí)驗(yàn)操作步驟嚴(yán)格按照廠家說明書進(jìn)行。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠模型FBG的影響 與正常組比較，治療前模型組和其他各組大鼠FBG明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，藥物干預(yù)后給藥各組FBG逐漸降低（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠FBG的影響（±s，n＝10）

注：與正常組比較，a：P＜0.01；與模型組比較，b：P＜0.01

組別 劑量（mg／kg）FBG（mmol／L）給藥前 給藥后正常組 － 6.48±1.79 6.71±1.83模型組 － 17.54±1.48a18.04±2.62a二甲雙胍組 20 17.36±2.05a12.47±1.63b枸杞多糖組 100 16.92±2.18a15.21±2.44b200 17.59±2.06a14.17±2.56b 400 17.46±2.38a11.87±1.89b

3.2 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠血清NEFA、GSH的影響 與正常組比較，2型糖尿病大鼠模型組NEFA水平異常升高，而GSH活性則明顯降低（P＜0.01）。藥物治療后，二甲雙胍組和枸杞多糖給藥各組的NEFA水平顯著降低，GSH活性升高，與模型組比較差異有高度顯著性（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠血清中NEFA、GSH的影響 （±s，n＝10）

表2 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠血清中NEFA、GSH的影響 （±s，n＝10）

注：與正常組比較，a：P＜0.01；與模型組比較，b：P＜0.01

組別 劑量（mg／kg）NEFA（mmol／L ）GSH（g／L）－ 2.04±0.78 90.24±17.28模型組 － 5.13±1.46a 37.85±9.94a二甲雙胍組 20 1.84±0.97b 70.63±15.46b枸杞多糖組 100 2.79±1.21b 46.82±10.95b2002.04±1.16b 58.62±12.37b 400 1.72±0.83b 68.31±15.98正常組b

3.3 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠血清肝組織SOD，MDA的影響 與正常組比較，2型糖尿病大鼠模型組肝組織中SOD活性明顯下降，而MDA含量明顯增多（P＜0.01）。治療后，二甲雙胍組和枸杞多糖給藥組2型糖尿病大鼠肝組織中SOD水平明顯增多，而MDA含量逐漸減少，與模型組比較差異有高度顯著性（P＜0.01）。結(jié)果見表3。

表3 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠肝組織SOD、MDA的影響 （±s，n＝10）

表3 枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠肝組織SOD、MDA的影響 （±s，n＝10）

注：與正常組比較，a：P＜0.01；與模型組比較，b：P＜0.01

組別 劑量（mg／kg）SOD（u／mg）MDA（nmol／mg）正常組 － 192.64±48.57 7.12±1.38模型組 － 87.95±22.64a15.35±4.06a二甲雙胍組 20 170.46±41.52b 8.47±1.92b枸杞多糖組 100 103.82±29.17b 12.53±3.24b200 142.31±32.69b 10.26±2.73b 400 176.85±41.93b 7.98±1.68b

4 討論

糖尿病是慢性疾病，其誘導(dǎo)的并發(fā)癥是致殘、致殘死的主要原因，臨床上病癥多見為高血糖主要特征的代謝障礙［4］。因此，有效控制高血糖的紊亂狀態(tài)是治療糖尿病的首要策略。本實(shí)驗(yàn)顯示，枸杞多糖各治療組逐漸地降低2型糖尿病大鼠的血糖水平，表現(xiàn)為劑量的依賴性，表明枸杞多糖具有良好的降血糖療效。

糖尿病造成機(jī)體脂代謝紊亂和抗氧化損傷能力下降，最終會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗［5］。肝臟是調(diào)節(jié)血脂和血糖的重要器官之一，維持其代謝的內(nèi)平衡是機(jī)體正常運(yùn)行的必要條件［6］。研究表明異常表達(dá)的NEFA會(huì)介導(dǎo)肝毒性作用，從而造成細(xì)胞的功能障礙，最終導(dǎo)致血脂、血糖的異常，進(jìn)一步加劇糖尿病病情［7］。自由基介導(dǎo)的細(xì)胞毒性，可使脂質(zhì)過氧化，損傷細(xì)胞膜，嚴(yán)重破壞組織的正常功能。而GSH、SOD能清除體內(nèi)代謝過程中產(chǎn)生的超氧陰離子等自由基，對(duì)細(xì)胞或組織有保護(hù)作用。在生物體內(nèi)，活性氧簇（ROS）作用于脂質(zhì)誘發(fā)過氧化反應(yīng)，氧化終產(chǎn)物為MDA，其再次破壞蛋白質(zhì)、核酸等分子結(jié)構(gòu)，具有細(xì)胞毒作用［8］。在本實(shí)驗(yàn)中，枸杞多糖能有效升高2型糖尿病大鼠血清中GSH活性，同時(shí)降低NEFA的含量，并提高肝臟組織中SOD活性和降低MDA含量，表明枸杞多糖能夠增強(qiáng)2型糖尿病大鼠肝臟抗氧化應(yīng)激能力和抑制細(xì)胞介導(dǎo)的脂毒性，恢復(fù)糖尿病大鼠肝功能。推測其對(duì)2型糖尿病大鼠氧化損傷的保護(hù)作用可能是其降血糖的主要機(jī)制之一。

［1］ 吳琦，李志強(qiáng)，崔忠慧.枸杞多糖降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究進(jìn)展［J］.牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，29（2）：67－69.

［2］ 左紅舉，喇萬英.枸杞多糖的降血糖作用及對(duì)糖尿病并發(fā)癥的研究現(xiàn)狀和展望［J］.甘肅中醫(yī)，2009，22（4）：77－79.

［3］ Hong LL，Xu GX，Shen GM，et al.Establishment of the model of type2diabetes in SD rats［J］.Lab Ani Sci ＆Admi，2005，22（4）：1－3.

［4］ Bhattarai MD.Three patterns of rising type2diabetes prevalence in the world：need to widen the concept of prevention in individuals into control in the community［J］.JNMA J Nepal Med Assoc，2009，48（174）：173－179.

［5］ Demissie S，Levy D，Benjamin EJ，et al.Insulin resistance，oxidative stress，hypertension，and leukocyte telomere length in men from the Framingham Heart Study［J］.Aging Cell，2006，5（4）：325－330.

［6］ Sayuri Nakamura，Yoshinori Ito，Koji Suzuki，et al.Blood pressure，levels of serum lipids，liver enzymes and blood glucose by aldehyde dehydrogenase2and drinking habit in Japanese men［J］.Environ Health Prev Med，2006，11（2）：82－88.

［7］ Ontko JA.Effects of ethanol on the metabolism of free fatty acids in isolated liver cells［J］.J Lipid Res，1993，14（1）：78－86.

［8］ Sturgeon BE，Sipe HJ Jr，Barr DP，et al.The fate of the oxidizing tyrosyl radical in the presence of glutathione and ascorbate.Implications for the radical sink hypothesis［J］.J Biol Chem，1998，273（46）：30116－30121.