李嬋娟

（保山中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，云南 保山 675000）

研究表明，氧化應(yīng)激是許多疾病和損傷的病理基礎(chǔ)，也是加速機體衰老的重要原因[1]。特別在心腦血管疾病中，氧化損傷是心腦血管疾病發(fā)展的一個重要階段。石斛因其具有抗氧化、清除自由基等功效，長期以來一直用于心、腦血管疾病的防治以及抗衰老、抗腫瘤、治療白內(nèi)障等。本實驗通過探討溴代苯致肝臟脂質(zhì)過氧化小鼠的肝臟MDA含量改變，旨在對比研究幾種石斛粗提物的抗氧化作用及其機制，從而為開發(fā)利用這一類天然藥物提供參考。

1 實驗材料

1.1 樣品

1.1.1 受試物 鼓槌石斛SHch（Dendrobiumchrysotoxum），棕色浸膏，提取率為3.15%；金釵石斛SHn（D.nobile），棕色浸膏，提取率為5.42%；翅梗石斛SHtr（D.trigonopus），棕色浸膏，提取率為4.34%；長距石斛SHl（D.longicornum），棕色浸膏，提取率為4.16%；報春石斛SHp（D.primulinum），棕色浸膏，提取率為13.81%；球花石斛SHth（D.thysiflorum），棕色浸膏，提取率為11.80%；玫瑰石斛SHcr（D.crepidatum），棕色浸膏，提取率為121.11%；疊鞘石斛SHd（D.denneanum），棕色浸膏，提取率為13.24%；黑毛石斛SHw（D.williamsonii），棕色浸膏，提取率為11.39%；流蘇石斛SHf（D.fimbriatum），棕色浸膏，提取率為14.27%；由中科院昆明植物研究所提供。所有樣品均為60%乙醇提取物，易吸濕，常溫密閉保存。

1.1.2 對照藥品 維生素C片（國藥準字 H53021188）100 mg／片，昆明制藥集團股份有限公司出品，批號090908。

1.1.3 配制方法 各種石斛粗提物按提取率折算成6.0 g／kg的生藥劑量為實驗的給藥劑量，臨用前稱取適量樣品于乳缽中，用1%CMC－Na研磨后配制成相當于生藥0.30 g／m L濃度的混懸液供小鼠灌胃用；陽性對照維生素C片的配制方法同石斛粗提物。為保證受試物的穩(wěn)定性，所有樣品均為臨用前新鮮配制。

1.2 動物 SPF級昆明種小鼠，全雄，體重18～24 g；購自于昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心。合格證號：SCXK（滇）2005－0008

1.3 主要儀器 AL104電子分析天平（稱量試劑、藥品、臟器），梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司；JJ2000型電子天平（稱量動物體重），常熟雙杰測試儀器廠；F5810－R型臺式高速冷凍離心機，德國Eppendorf；Thermo1500型酶標儀，芬蘭雷勃；Millipore超純水處理系統(tǒng)，美國 Millipore公司；BCD－225E冰箱，青島海爾冰箱廠；HS－1恒溫水浴箱，江蘇金壇。

1.4 主要試劑 氯化鈉注射液，國藥準字 H53020469，500 mL／瓶，昆明南疆制藥有限公司，批號A091011e1；溴代苯，分析純，中國青浦合成試劑廠出品，批號20000405；橄攬油，化學(xué)純，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司出品，批號20090801；丙二醛測定試劑盒（MDA，硫代巴比妥酸法），南京建城生物工程研究所出品，批號20091107。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗結(jié)果以均值±標準差（±s）表示，用DAS ver1.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。方差齊用t檢驗，方差不齊用t’檢驗；偏態(tài)分布資料用秩和檢驗；計數(shù)資料用χ2檢驗。

2 方法與結(jié)果

選18～22 g雄性昆明種小鼠130只，按體重隨機分為13組：空白對照組；模型對照組；陽性對照維生素C片200 mg／kg組；10種石斛樣品粗提物6.0 g／kg組；每組10只。各組動物每日分別按劑量灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃3d，空白對照組灌服等容量1%CMC－Na 20 mL／kg.bw。末次給藥后30 min，除空白對照組外，其余各組均以10 m L／kg.bw的劑量灌胃給予0.3 mol／L的溴代苯橄欖油溶液，間隔4h再加強給藥1次。造模20 h后脫臼處死小鼠，摘取肝臟用PH7.4的Tris－HCl緩沖溶液清洗后，稱取200 mg同部位肝組織，加生理鹽水制成10%肝勻漿，以3000轉(zhuǎn)／min離心10 min，取上清液按試劑盒方法測定 MDA（肝臟丙二醛）含量[2]。結(jié)果見表1。

表1 石斛樣品粗提物對小鼠體內(nèi)抗氧化作用的影響

由表1可知，模型組小鼠肝組織中MDA含量明顯高于空白對照組，表明溴代苯誘發(fā)小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化模型成功；陽性對照維生素C片、鼓槌石斛、金釵石斛及報春石斛組，對溴代苯誘發(fā)的小鼠肝損傷有不同程度的保護作用，可使肝組織中的MDA含量明顯下降，表明抗氧化作用顯著；除玫瑰石斛外，其余各組僅有一定作用趨勢。

3 討論

脂質(zhì)過氧化是一典型的自由基鏈式反應(yīng)，是自由基攻擊細胞膜上的多聚不飽和脂肪酸而引發(fā)的一系列鏈式反應(yīng)，產(chǎn)生大量脂肪質(zhì)過氧化物及許多中間產(chǎn)物，如丙二醛等，可導(dǎo)致人體細胞氧化損害、老化、致癌和動脈硬化等許多疾病。通過食用具有抗氧化能力的食物或藥物，可防止多種疾病發(fā)生。食物的抗氧化能力可通過體外和體內(nèi)抗氧化實驗進行評價[3]。

生物體系（如肝細胞等）脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物有丙二醛，測定丙二醛的含量，在一定程度上可以反映脂質(zhì)過氧化損傷的程度，是目前公認的反映脂質(zhì)過氧化的指標[4]。溴代苯是一種有毒的氧化劑，在體內(nèi)對肝臟有很強的親和力，能造成動物細胞脂質(zhì)過氧化性損傷[5]。本文采用溴代苯致小鼠實驗性肝損傷模型，測定肝組織勻漿MDA含量。本實驗中給予小鼠溴代苯油20h后，小鼠肝臟代償性增大、壞死，溴代苯可使模型組小鼠肝勻漿MDA含量明顯增加，表明溴代苯引起肝損傷的機制與脂質(zhì)過氧化有關(guān)。本結(jié)果顯示，鼓槌石斛、金釵石斛及報春石斛組能顯著降低肝勻漿丙二醛含量，說明以上這三種石斛具有抗脂質(zhì)過氧化能力。翅梗石斛、長距石斛、球花石斛、疊鞘石斛、黑毛石斛、流蘇石斛僅有一定作用趨勢，與損傷模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。本次實驗因樣品量僅夠用藥3 d，而以往實驗的連續(xù)用藥時間多在7 d以上，是否存在給藥時間太短而影響結(jié)果的判斷？有待于進一步的研究。

[1]Szweda PA，F(xiàn)riguet B，Szweda L I.Proteolysis free radicals and aging[J].Free Radic Biol Med，2002，33（1）：29.

[2]張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法學(xué)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1998：1232.

[3]宋懷恩，聞韌.抗氧化篩選方法的研究進展[J].中國藥物化學(xué)雜志，2003，13（2）：119～123.

[4]劉方，武子斌，牛淑敏，等.中藥材抗氧化及自由基清除活性的研究[J].中國藥學(xué)雜志，2001，36（7）：442～445.

[5]吳植強，周智，韋奇質(zhì).水羅傘提取物對溴代苯小鼠肝損傷的保護作用和抗氧化作用[J].中國藥理學(xué)通報，2004，20（11）：1221～1223.