李紅濤

阿司匹林(ASA)，又名乙酰水楊酸，是非甾體類(lèi)抗炎藥的代表藥物，主要通過(guò)抑制環(huán)氧化酶的活性而降低前列腺素的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用［1］。近年來(lái)，流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)室資料均表明，阿司匹林對(duì)食管癌，結(jié)腸癌，胃癌等消化道腫瘤均有抗腫瘤作用［2］。本實(shí)驗(yàn)選用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞來(lái)探討阿司匹林對(duì)乳腺癌的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 主要試劑 RPMI1640培養(yǎng)基、胎牛血清、噻唑藍(lán)試劑均購(gòu)于華美公司。阿司匹林純品購(gòu)自Sigma公司。Annexin V-FITC試劑盒購(gòu)于北京寶賽生物工程公司。

1.1.2 細(xì)胞株 MCF-7細(xì)胞株購(gòu)于中科院上海細(xì)胞生物研究所。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) MCF-7細(xì)胞株培養(yǎng)于含10%小牛血清RPMI1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)至70% ～80%融合時(shí)，0.25%胰蛋白酶消化、傳代。

1.2.2 MTT實(shí)驗(yàn) 不同濃度的阿司匹林:2.0 mmol/L，4.0 mmol/L，8.0 mmol/L，16.0 mmol/L，作用細(xì)胞 24 h、48 h、72 h后，每孔加入5 mg/ml的MTT20 μl，作用4 h后，每孔加入150 μl DMSO溶液，輕輕震蕩15 min，在酶標(biāo)儀570 nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光密度值(OD值)。公式:實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值)×100%。

1.2.3 FCM實(shí)驗(yàn) 不同藥物濃度處理48 h的MCF-7細(xì)胞，PBS洗滌3次后，調(diào)節(jié)濃度為1.0×106/ml，按Annexin/FITC及PI試劑盒提供方法依次加入結(jié)合緩沖液。Annexin/FITC及PI 4℃避光30 min后，即可上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，計(jì)算凋亡率。

1.3 形態(tài)學(xué)觀察 應(yīng)用電鏡觀察阿司匹林是否引起MCF-7細(xì)胞凋亡。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和配對(duì)t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞增殖活性 阿司匹林對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖有抑制作用，呈時(shí)間-劑量依賴(lài)性，隨時(shí)間、濃度增加而增加，有顯著相關(guān)性(如表1)。

表1 不同濃度阿司匹林作用不同時(shí)間對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率(±s)

表1 不同濃度阿司匹林作用不同時(shí)間對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制率(±s)

阿司匹林濃度(mmol/l)時(shí)間(小時(shí))24 h 48 h 72 h 0(對(duì)照組)0±0 0±0 0±0 2 5.38±0.29 13.17±0.47 30.25±0.66 4 7.05±0.56 16.50±0.98 32.72±1.01 8 11.23±1.02 19.81±1.10 41.59±1.62 16 16.27±1.35 23.96±1.56 53.31±1.95

2.2 細(xì)胞凋亡百分率 以上不同濃度的阿司匹林作用MCF-7細(xì)胞48 h后，細(xì)胞的凋亡率為(19.09±0.87)% ～(53.75±0.48)%，凋亡率隨著藥物濃度增加而增高，呈劑量依賴(lài)性。

2.3 細(xì)胞凋亡 不同濃度阿司匹林作用后MCF-7細(xì)胞48 h后，電鏡下可以觀察細(xì)胞呈典型的凋亡形態(tài)學(xué)變化，出現(xiàn)細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)凝集于核膜周邊，新月型小體及胞質(zhì)空泡形成等。

3 討論

阿司匹林是傳統(tǒng)的解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物，目前有文獻(xiàn)報(bào)道其對(duì)腫瘤細(xì)胞有抑制作用，并可降低許多腫瘤的發(fā)病率［3］，但是其抗腫瘤機(jī)制還不是很明確，阿司匹林可能通過(guò)多種途徑抑制腫瘤的生長(zhǎng)。許多研究證實(shí)，阿司匹林可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而抑制腫瘤生長(zhǎng)。此外，阿司匹林還可以通過(guò)干擾線粒體能量代謝、抑制磷酸戊糖途徑、增加活性氧的活性而誘導(dǎo)凋亡。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、形態(tài)學(xué)方法研究阿司匹林處理的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞結(jié)果顯示阿司匹林對(duì)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用，呈時(shí)間-劑量依賴(lài)性，對(duì)乳腺癌細(xì)胞抑制率隨時(shí)間、濃度增加而增加。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與王美榮［4］研究結(jié)果基本相近。

綜上所述，阿司匹林在體外可有效的抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖誘導(dǎo)凋亡，為阿司匹林應(yīng)用于乳腺癌的治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］ DOHERTY G A，MURRAY F E.Cyclooxygenase as a target for chemoprevention in colorectal cancer:lost cause or a concept coming of age?．Expert Opin Ther Targets，2009，13(2):209-218．

［2］ ROSTON A，DUBE C，LEWIN G，et al.Nonsteroidal anti-infammatory drugs and cyclooxygenase-2 inhibitors for primary prevention of colorectal cancer:a systematic review prepared for the U.S.Preventive Services Task Force．Ann Intern Med，2007，146(5):376-89．

［3］ Ll M，LOTAN R，LEVIN B，et al.Aspirin induction of apoptosis in esophageal cancer:a potential for chemop-revention cancer．Epidemiol Biomarkers Prey，2009，9:545-549．

［4］ 王美榮，戚之琳.阿司匹林對(duì)SMMC-7721人肝癌細(xì)胞增殖的影響．皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，29(4):243-245．