孟健

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是危害人類健康最常見的一種疾病，累及冠狀動(dòng)脈、腦動(dòng)脈及肢體動(dòng)脈，后果嚴(yán)重。近年來大量研究表明寶曲在調(diào)節(jié)血脂、抗氧化保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞等方面發(fā)揮著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在通過寶曲對兔動(dòng)脈硬化形成的影響，分析其抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 ①實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康的日本大耳兔24只，雌雄各半，兔齡4個(gè)月，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供(許可證號:SCXK京2010-0003)。②藥品與試劑:寶曲由上海德豐堂生物科技有限公司生產(chǎn)，批號為20100702;總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)檢測試劑盒由上海名典生物工程有限公司提供;高密度脂蛋白(HDL)檢測試劑盒由波音特生物科技有限公司提供;其他試劑均為分析純。③主要儀器:7170全自動(dòng)生化分析儀(日立公司)。

1.2 方法 ①動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境:分籠開放飼養(yǎng)，普通兔飼料和高脂兔飼料(普通飼料+10 g/L膽固醇+80 g/L豬油)均由北京科奧協(xié)力飼料有限公司提供。②動(dòng)物分組及模型建立:普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3組，各8只?？瞻捉M給予普通飼料加蒸餾水喂養(yǎng);模型對照組給予高脂飼料加蒸餾水喂養(yǎng);寶曲量組給予高脂飼料加蒸餾水喂養(yǎng)。除空白對照組外，其余各組給予兔耳中動(dòng)脈部一次性注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)，使動(dòng)脈發(fā)生免疫損傷，5周后形成類似人的動(dòng)脈粥樣硬化病變。③給藥方法:寶曲組給予87.2 mg/kg，灌胃容量2 ml/kg，1次/d。高脂組、空白組每日給與相同劑量蒸餾水一次，試驗(yàn)周期為7周。

1.3 觀測治標(biāo)及方法

1.3.1 血脂測定 喂飼12周后，各兔禁食12 h后，于各組兔耳緣靜脈取血分離血清，按試劑盒方法測血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)。

1.3.2 主動(dòng)脈的病理學(xué)檢查 ①動(dòng)脈粥樣斑塊面積、斑塊指數(shù)的測算:空氣栓塞法處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取部分頸動(dòng)脈，包埋做切片，觀察動(dòng)脈粥樣斑塊;從主動(dòng)脈弓到腹主動(dòng)脈髂前分叉處取下主動(dòng)脈，生理鹽水洗凈后蘇丹染色，數(shù)碼相機(jī)照相，輸入計(jì)算機(jī)用Adobe illustrator圖片處理軟件測算斑塊面積。于10×10倍光學(xué)顯微鏡下觀察主動(dòng)脈壁形態(tài)，并用測微尺測量斑塊厚度及主動(dòng)脈壁厚度，計(jì)算斑塊指數(shù)(斑塊指數(shù)=斑塊面積斑塊厚度)。②內(nèi)膜厚度與中膜厚度比值的測算:在10×10倍放大條件下，用1/10目鏡測微尺測量動(dòng)脈內(nèi)膜厚度及中膜厚度。以內(nèi)膜最厚處為中心，測量該點(diǎn)的內(nèi)膜厚度及中膜厚度，算出其比值，然后將動(dòng)脈等距分成5點(diǎn)(包括中心點(diǎn))，分別測其比值，取該樣本的平均值。③動(dòng)脈內(nèi)膜單位面積內(nèi)泡沫細(xì)胞數(shù)(內(nèi)膜泡沫細(xì)胞密度):在40×10倍放大條件下，用目鏡測微尺及手控計(jì)數(shù)器分別計(jì)算上述5個(gè)點(diǎn)，25個(gè)小格內(nèi)的泡沫細(xì)胞數(shù)，取該動(dòng)物全部切片的平均值，算出每mm2內(nèi)的泡沫細(xì)胞數(shù)，即為該動(dòng)脈內(nèi)膜單位面積內(nèi)的泡沫細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 寶曲對血脂的影響 結(jié)果表明，給予高脂飼料12周后，模型組兔空腹血清TC、TG較空白組顯著升高，而HDL-C值明顯降低。但在相同飼養(yǎng)條件下，給予寶曲組兔的空腹血脂變化和高脂組相比表現(xiàn)為TC、TG顯著降低，HDL-C顯著升高，見表1。

表1 寶曲對兔血脂水平的影響(mg/dl，±s)

表1 寶曲對兔血脂水平的影響(mg/dl，±s)

注:與空白組比較，△△P ＜0.01，△P＜0.05;與模型組比較，＊＊P ＜0.01

組別TC TG HDL-C空白組47.21±14.63 49.05±10.02 24.58±4.38模型組 288.46±19.57△△ 83.27±9.50△△ 19.05±6.33△寶曲組 151.38±8.09＊＊ 60.91±8.85＊＊ 49.32±8.81＊＊

2.2 主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化空白組主動(dòng)脈內(nèi)膜等結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉淀或斑塊形成;模型組與空白組比較內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜厚度/中膜厚度比值顯著增加，同時(shí)形成明顯的粥樣斑塊，可見大量泡沫細(xì)胞，嚴(yán)重者泡沫細(xì)胞崩解，膽固醇結(jié)晶形成;寶曲組的內(nèi)膜增厚程度及結(jié)締組織成分與模型組比較均顯著減輕，泡沫細(xì)胞也少于模型組。表明寶曲據(jù)有減輕主動(dòng)脈AS形成的作用。

表2 寶曲對主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)的影響表(±s)

表2 寶曲對主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)的影響表(±s)

注:與空白組比較，△△P＜0.01，△P＜0.05;與模型組比較＊＊P＜0.01，*P＜0.05

2組別 斑塊面積(mm) 斑塊指數(shù) 內(nèi)膜厚度/中膜厚度 泡沫細(xì)胞數(shù)(個(gè)/mm2)空白組0.05±0.01 1.5±1.2模型組 653.4±199.5△△ 296±158△△ 0.94±0.15△△ 14.2±6.9△△寶曲組 273.8±101.1＊＊ 16±6＊＊ 0.11±0.09＊＊ 4.1±1.9 0 0*

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是動(dòng)脈粥樣硬化形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)，兩者又相互影響，兼顧這兩種致病因素是非常必要的。近年研究表明血管壁內(nèi)中膜厚度(IMT)是AS的早期改變，斑塊形成是AS的明顯特征，它可反應(yīng)AS的程度［1］。在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中，由于單核細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞遷移、黏附、增生，并形成泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞崩解后釋放出的脂質(zhì)形成脂質(zhì)核心，從而使病變進(jìn)入不可逆階段并形成粥樣斑塊［2，3］。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，應(yīng)用寶曲的兩治療組血清中TC、TG顯著降低，HDL-C明顯升高，提示寶曲能通過降低TC、TG和升高HDL-C干預(yù)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。應(yīng)用寶曲能顯著減輕內(nèi)膜增厚程度、結(jié)締組織成分以及泡沫細(xì)胞，表明寶曲據(jù)有減輕主動(dòng)脈AS形成的作用。

［1］ Raso EM，Kramer C，Castrol.Association between coronary arterya the roscie rosis and the intima-media thickness of the common carotid artery measured on ultrasonography.ArqBras Cardiol，2003，80(3):589-592．

［2］ 李欣，廖新學(xué)，廖曉星，等.銀杏葉提取物對動(dòng)脈粥樣硬化的防治作用研究.中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2004，13(9):609-611．

［3］ GalleJ，Quaschning T，Seibold S，et al.Endothelial dysfunction andi nflammation:what is the link．Kidney Int Suppl，2003(84):45-49．