段建發(fā) 林隆強 陸奕娜

(汕頭出入境檢驗檢疫局 廣東汕頭 515031)

1 前言

氟菌唑(Triflumizole)，又名特富靈、利佛米，農(nóng)用廣譜殺菌劑［1，2］，為甾醇脫甲基化抑制劑，是日本曹達株式會社開發(fā)創(chuàng)制的具有保護和治療作用的內(nèi)吸性殺菌劑［3］，在植物莖葉內(nèi)傳導(dǎo)性強，可直接作用于侵入植物體內(nèi)的病原菌，抑制病斑蔓延。主要用于麥類、蔬菜、果樹及其他作物的白粉病、黑穗病、銹病、條紋病和瘡茄病的防治，對茶樹炭疽、茶餅病、桃褐腐病也有效。氟菌唑在植物體內(nèi)代謝生成的主要產(chǎn)物為氟菌唑代謝物(Triflumizole metabolite)。

氟菌唑化學(xué)名稱為(E)－4－氯－α，α，α－三氟代－N－(1－咪唑－1－基－2－正丙氧基亞乙基)－鄰－甲苯胺，氟菌唑代謝物化學(xué)名稱為(E)－4－氯－α，α，α－三氟代 －N－(1－氨 －1－基 －2－正丙氧基亞乙基)－鄰－甲苯胺，二者的分子結(jié)構(gòu)示意圖見圖1和圖2。

圖1 氟菌唑分子結(jié)構(gòu)示意圖

圖2 氟菌唑代謝物分子結(jié)構(gòu)示意圖

氟菌唑?qū)θ?、畜低毒，正常使用條件下對作物以及環(huán)境污染小，目前我國尚未制定食品中氟菌唑最大允許殘留量標準。但是近年來，一些貿(mào)易國家實施新技術(shù)壁壘，對部分產(chǎn)品中的氟菌唑設(shè)定了很嚴的最大允許殘留量，最高達0.05mg/kg(日本肯定列表對大米、土豆等產(chǎn)品的限量要求)。

而我國現(xiàn)有的檢測標準SN 0703－1997《出口蔬菜中利佛米殘留量檢驗方法》［4］，采用高效液相色譜法，檢測低限為0.1mg/kg，達不到國外的相關(guān)要求。因此，尋找一種簡便快速、準確靈敏的蔬菜水果中氟菌唑及其代謝物的檢測方法十分必要。目前有使用氣相色譜法檢測氟菌唑的研究［5］，但未見有氣質(zhì)聯(lián)用法的報道。

本研究采用氣相色譜法－質(zhì)譜聯(lián)用法對進出口番茄中的氟菌唑及其代謝物進行測定和確證，結(jié)果表明，該方法簡便快速、準確靈敏、重復(fù)性好，適合番茄中氟菌唑及其代謝物的定量和確證。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 樣品

番茄樣品購于市場。

2.1.2 試劑

氟菌唑標準品:純度為98.5%，Dr.Ehrenstorfer公司提供;氟菌唑代謝物標準品:純度為98.0%，日本 Wako公司提供;弗羅里硅土固相萃取柱:1000mg/6mL，美國Supelco公司;乙腈、丙酮、正己烷:色譜純;水為超純水;氯化鈉:分析純;無水硫酸鈉:650℃灼燒4h，在干燥器內(nèi)冷卻至室溫，儲于密封瓶中備用。

2.1.3 儀器

Agilent7890A/5975C氣相色譜－質(zhì)譜儀:配備電子轟擊源(EI)、7683自動進樣器、增強型化學(xué)工作站，美國Agilent公司;氮氣吹干儀:日本東京理化公司;固相萃取裝置:美國Supelco公司;渦旋混合器:德國IKA公司;離心機:美國enpendorf公司;分析天平:感量為0.0001g 和0.01 g。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件

HP－5MS石英毛細管柱，30 m ×0.25 mm×0.25μm;進樣口溫度:250℃，自動進樣;進樣方式:不分流;進樣量:1μL;載氣:高純氦(純度99.999%);流速1mL/min;程序升溫:50℃保持2 min，以20℃/min升至200℃，再以10℃/min升至280℃，保持5 min。

2.2.2 質(zhì)譜條件

離子源:EI;電離能量:70eV;離子源溫度:230℃;四極桿溫度:150℃;色譜－質(zhì)譜接口溫度:280℃;溶劑延遲時間:6.0min;采集模式:分組選擇離子監(jiān)測(SIM);第1組(6 min開始):m/z 167、m/z 201、m/z 221、m/z 235;第 2 組(13 min 開始):m/z 278、m/z 179、m/z 206、m/z 287;離子駐留時間均為100 ms。

2.2.3 標準工作液的配置

將氟菌唑、氟菌唑代謝物標準品用正己烷配制成濃度為1000mg/L的標準儲備液，并根據(jù)需要用正己烷稀釋成適當濃度的標準工作液，棕色瓶4℃下保存，有效期3個月。

2.2.4 樣品制備

取番茄樣品可食用部分，切碎后用食品搗碎機將樣品加工成漿狀，混勻備用。

稱取5g試樣(精確至0.1g)，置于50 mL離心管中，加入20mL乙腈，3.0 g氯化鈉，渦旋振蕩混勻30 s，超聲提取10 min，4000 r/min 離心 5 min，取上清液4 mL于15 mL離心管中，在氮吹儀上50℃氮氣吹至近干，加入2 mL正己烷溶解殘渣，待凈化。

弗羅里硅土固相萃取柱使用前柱內(nèi)填約10 mm高無水硫酸鈉層，先后用5 mL正己烷溶液和5mL丙酮－正己烷(2+3，V/V)活化固相萃取柱，勿使柱基干燥。將待凈化溶液移入預(yù)先平衡好的弗羅里硅土柱，用20 mL刻度離心管收集淋洗液，用5 mL丙酮－正己烷(2+3，V/V)沖洗該離心管后淋洗弗羅里硅土柱，并重復(fù)1次;將收集淋洗液的離心管置于氮吹儀上50℃氮氣吹至近干，用正己烷溶解并定容至1.0 mL，在旋渦混合器上混勻，供氣相色譜－質(zhì)譜儀測定。

2.2.5 結(jié)果計算

用色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)或按式(1)計算試樣中農(nóng)藥殘留量:

式中:X——試樣中農(nóng)藥的殘留量，單位為mg/kg;

A——樣液中農(nóng)藥的峰面積;

Ci——標準工作液中農(nóng)藥的濃度，單位為μg/mL;

V——樣液最終定容體積，單位為mL;As——標準工作液中農(nóng)藥的峰面積;

m——最終樣液所代表的試樣質(zhì)量，單位為g。

注:計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。

3 結(jié)果與討論

3.1 特征離子的選擇

圖3和圖4為氟菌唑及氟菌唑代謝物全掃描(SCAN)質(zhì)譜圖。圖 3 顯示 m/z為 278、202、179、287的4個離子可以作為氟菌唑的特征離子，其中響應(yīng)值最高的278為定量離子;圖4顯示 m/z為167、201、221、235的4個離子可以作為氟菌唑代謝物的特征離子，其中響應(yīng)值最高的167為定量離子。根據(jù)化合物的出峰時間，可以采用分組選擇離子掃描模式，第一組掃描開始時間為第6min，掃描離子為:167、201、221、235;第二組掃描開始時間為第13min，掃描離子為:278、206、179、287。圖 5 為采用分組選擇離子掃描結(jié)果顯示，總離子流出色譜圖的干擾離子更少，背景更干凈。

圖3 氟菌唑質(zhì)譜圖

圖4 氟菌唑代謝物質(zhì)譜圖

圖5 標準物質(zhì)分組選擇離子檢測掃描(SIM)總離子流色譜圖

3.2 定性依據(jù)及定量方法

經(jīng)確證分析被測物質(zhì)量色譜峰保留時間與標準品樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn);同時所選擇離子的豐度比與標準樣品相關(guān)離子的相對豐度一致，相似度在允許差之內(nèi)(見表1)，則可判定樣品為氟菌唑陽性檢出。本研究采用外標法定量，氟菌唑和氟菌唑代謝物的定量離子、定性離子及標準相對離子豐度見表1。

表1 定性確證時定量離子、定性離子和標準相對離子豐度及最大允許相對偏差

3.3 方法線性范圍與檢出限

將氟菌唑和氟菌唑代謝物的標準儲備液(1000mg/L)用正己烷稀釋成濃度均為0.01mg/L、0.05mg/L、0.10mg/L、0.20mg/L、0.50mg/L、1.0 mg/L的標準混合工作液。取相同體積進行上機分析，以標準混合工作溶液濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制外標校準曲線，各回歸方程呈良好的線性關(guān)系:氟菌唑代謝物 y=1.340×104x+147.5(r=0.9995)，氟菌唑 y=5.028 ×103x+39.45(r=0.9995) 。

測定低限(LOQ)指信噪比(S/N)大于10時的最低檢測濃度。本方法測定氟菌唑和氟菌唑代謝物的LOQ均為0.01mg/kg，能滿足日常檢測的需要。圖6為0.01mg/kg添加水平的總離子流出色譜圖。

3.4 精密度與回收率

使用番茄作為樣品進行3個水平添加回收率實驗，分別為 0.01mg/kg、0.02mg/kg、0.10mg/kg，每個添加水平重復(fù)6次，結(jié)果見表2。

圖6 0.01mg/kg添加水平的總離子流出色譜

表2 加標回收率和重復(fù)性試驗結(jié)果(n=6)

表2結(jié)果顯示，氟菌唑回收率范圍在82.0% －102.1%之間，氟菌唑代謝物回收率范圍在85.0%－103.2%之間，說明本研究測定的重現(xiàn)性好，符合方法精密度要求。

4 結(jié)論

本研究建立的氣相色譜－質(zhì)譜法測定番茄中氟菌唑殘留量的方法，具有簡便快速、準確靈敏、重復(fù)性好等特點，適合番茄中氟菌唑殘留量確證和定量測定。

［1］ 農(nóng)業(yè)大詞典編輯委員會.農(nóng)業(yè)大詞典［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1998:458－459.

［2］ 紀磊.氟菌唑的致突變性及亞慢性毒性研究［J］.浙江化工，2007，38(10):28 －30.

［3］ 王振榮.農(nóng)藥商品大全［M］.北京:中國商業(yè)出版社，1996:473－474.

［4］ SN0703－1997出口蔬菜中利佛米殘留量檢驗方法［S］.

［5］ 吳俐，陳銘學(xué)，牟仁祥，等.植物源食品中6種三唑類殺菌劑殘留量的氣相色譜法測定［J］.分析測試學(xué)報，2009，28(7):846－848.