王偉

·基礎(chǔ)研究·

益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥對(duì)大鼠急性心肌梗死后梗死心肌與心室重構(gòu)的影響

王偉

目的觀察急性心肌梗死(AMI)后大鼠心室重構(gòu)時(shí)左心室質(zhì)量、心肌梗死面積、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量及益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥的干預(yù)作用。方法結(jié)扎Wistar大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制AMI模型，6周后并發(fā)心肌重構(gòu)，將24只AMI大鼠隨機(jī)分為模型組(灌服等容量蒸餾水)、培哚普利組(0.36 mg/kg體質(zhì)量)、硝酸異山梨醇酯組(5 mg/kg體質(zhì)量)、益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥組(生藥10 g/kg體質(zhì)量)，每組6只，于造模成功后第2天開(kāi)始灌胃相應(yīng)藥物，1次/d連續(xù)4周，空白組(只穿刺，不結(jié)扎)5只灌服等容量蒸餾水。4周后稱(chēng)體質(zhì)量后處死大鼠，取血檢測(cè)血清Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量，取心臟，稱(chēng)取心臟、左心室質(zhì)量，計(jì)算心臟指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù)，取左心室缺血區(qū)N-BT染色法觀察心肌梗死面積。結(jié)果與空白組比較，模型組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著增加(均為P＜0.01);與模型組比較，中藥組大鼠心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)、心肌梗死面積、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著減小(均為P＜0.05)，其中心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù)、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量介于硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組之間(均為P＜0.05)，而心肌梗死面積則與硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.05)。結(jié)論益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥可縮小AMI后心肌重構(gòu)大鼠心肌梗死面積，抑制膠原蛋白合成、分泌和心肌肥厚、心肌纖維化，其效應(yīng)優(yōu)于硝酸異山梨醇酯，而稍差于培哚普利。

心肌梗死;心室重構(gòu);益氣養(yǎng)陰活血解毒;膠原蛋白;大鼠

心肌梗死是由于冠狀動(dòng)脈供血中斷，引起供血區(qū)持續(xù)缺血而導(dǎo)致的較大范圍的心肌壞死。心肌梗死后，梗死區(qū)心肌周?chē)鷼埓娴男募〖?xì)胞接受心肌缺血、損傷的信息啟動(dòng)了眾多蛋白質(zhì)的表達(dá)，啟動(dòng)心室重構(gòu)［1］，主要表現(xiàn)為殘存的心肌細(xì)胞肥大、凋亡，同時(shí)伴隨成纖維細(xì)胞增殖，纖維組織替代壞死心肌，最終發(fā)展為失代償性心力衰竭而導(dǎo)致死亡。因此，有效抑制心室重構(gòu)的發(fā)生、發(fā)展對(duì)改善預(yù)后具有重要意義。本研究擬通過(guò)觀察益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥對(duì)急性心肌梗死(AMI)后心室重構(gòu)的干預(yù)作用，探討其防治心肌梗死的可行性。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

55只SPF級(jí)SD大鼠，180～220 g，6～8周齡，雌雄各半。由本院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(魯)20100009。

1.2 藥品與試劑

硝酸異山梨醇酯片(硝酸異山梨酯)為天津太平洋制藥有限公司產(chǎn)品;培哚普利片:常州制藥廠提供;益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥(西洋參6 g、熟地12 g、白芍12 g、麥冬12 g、丹參15 g、三七3 g、川芎9 g、茯苓皮9 g、竹瀝6 g、黃連9 g、炙甘草9 g)由本院中藥房提供中藥飲片，并制備成顆粒劑(相當(dāng)于生藥10.2 g/g);CD34+細(xì)胞FIT流式抗體，Santa cruz公司;PⅠCP和PⅢNP放免試劑盒，Orion Diagnostica公司。

1.3 主要儀器

RM6240B型生理實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HX-300動(dòng)物呼吸機(jī)，成都泰盟科技有限公司;奧林巴斯顯微鏡及病理圖像采集系統(tǒng);Image Pro Plus圖像分析軟件，M349277-γ放射免疫計(jì)數(shù)器，克格儀器有限公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 AMI大鼠動(dòng)物模型的復(fù)制將55只大鼠隨機(jī)分為空白組(5只)和造模組(50只)，除空白組外，各組均建立AMI動(dòng)物模型。以35 g/L水合氯醛300 mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠，氣管插管，呼吸機(jī)人工呼吸，呼吸頻率60次/min，潮氣量20 ml/kg，沿胸骨左緣第3～4肋骨切開(kāi)胸腔并暴露心臟，于冠狀動(dòng)脈前降支中段(分支起點(diǎn)處1～2 mm)縫合線(xiàn)結(jié)扎，建立AMI模型，并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，ST段弓背抬高提示AMI形成，空白組只開(kāi)胸分離冠狀動(dòng)脈前降支，但不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。

1.4.2 動(dòng)物分組與給藥結(jié)扎術(shù)24 h后存活大鼠共24只，隨機(jī)均分為模型組(灌服等容量蒸餾水)、培哚普利組(0.36 mg/kg體質(zhì)量)、硝酸異山梨醇酯組(5 mg/kg體質(zhì)量)、中藥組(生藥10 g/kg體質(zhì)量)4組，空白組予等容量蒸餾水，大鼠給藥劑量根據(jù)成人用藥量按體表面積進(jìn)行用藥量換算［2］:于術(shù)后第2天開(kāi)始灌胃，1次/d，連續(xù)6周。于末次給藥后2 h，稱(chēng)體質(zhì)量后處死動(dòng)物，取材，進(jìn)行各指標(biāo)的觀察。

1.4.3 血樣及病理組織處理于末次給藥后2 h大鼠腹腔注射20%氨基甲基乙酯麻醉處死后，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，制備血清備用;剝離心臟組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸干，稱(chēng)取全心臟質(zhì)量(mg)，沿房室交界處剪去左右心房及大血管，去除右心室游離壁，稱(chēng)取余下的左心室質(zhì)量(mg)，記錄并計(jì)算左心室質(zhì)量指數(shù)=左心室質(zhì)量/體質(zhì)量(mg/g)和心臟指數(shù)=心臟質(zhì)量/體質(zhì)量(mg/g)。

1.4.4 血清Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量測(cè)定取分離血清，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。以M349277-γ放射免疫計(jì)數(shù)器檢測(cè)值為自變量、標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并由樣品γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品濃度。

1.4.5 心肌梗死面積測(cè)算取結(jié)扎部位以下左心室缺血心肌組織，0.2%N-BT染色，顯微鏡相同倍數(shù)下觀察心肌制備區(qū)域大小的變化，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，Image Pro Plus圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)視野內(nèi)心肌雙側(cè)的梗死區(qū)(N-BT非染色區(qū))和非梗死區(qū)(N-BT染色區(qū))面積，計(jì)算梗死區(qū)面積的百分比(%)=梗死區(qū)面積/(梗死區(qū)面積+非梗死區(qū)面積)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析，組間均值兩兩比較采用SNK或Dunnett T3檢驗(yàn)，以上統(tǒng)計(jì)均由SPSS 15.0完成。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)AMI大鼠心臟質(zhì)量及質(zhì)量系數(shù)的影響

治療結(jié)束后5組間大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.05);與空白組相比，模型組、硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)均顯著增加(均為P＜0.01)，與模型組相比，硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)均顯著減小(均為P＜0.05);硝酸異山梨醇酯組與培哚普利組心臟質(zhì)量間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但培哚普利組心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量和左心室質(zhì)量指數(shù)均較硝酸異山梨醇酯組顯著減小(均為P＜0.01);中藥組心臟質(zhì)量與硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.05)，心臟質(zhì)量指數(shù)與硝酸異山梨醇酯差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)而較培哚普利組有顯著增加(P＜0.01)。左心室質(zhì)量和左心室質(zhì)量指數(shù)較硝酸異山梨醇酯顯著降低(P＜0.01)而較培哚普利組有顯著增加(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)AMI大鼠心肌梗死面積的影響

與模型組相比，硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心肌梗死面積均顯著減小(均為P＜0.01);硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組3組間心肌梗死面積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＞0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 對(duì)AMI大鼠膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量的影響

與空白組相比，模型組、硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著增加(均為P＜0.01);硝酸異山梨醇酯組血清膠原蛋白Ⅰ含量較模型組顯著減小(P＜0.05)，硝酸異山梨醇酯組血清膠原蛋白Ⅲ含量顯著減小(P＜0.01)，培哚普利組和中藥組血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著減小(均為P＜0.01);中藥組血清膠原蛋白Ⅰ含量較硝酸異山梨醇酯組顯著降低(P＜0.05)而與培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，血清膠原蛋白Ⅲ含量較硝酸異山梨醇酯組顯著減少(P＜0.01)而較培哚普利組均顯著增加(P＜0.01)，見(jiàn)表2。

表1 對(duì)AMI大鼠體質(zhì)量、心臟質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)的影響(ˉx±s)

表2 對(duì)AMI大鼠心肌梗死面積和血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量的影響(ˉx±s)

3 討論

本研究采用左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法復(fù)制心肌梗死大鼠模型，可出現(xiàn)較大范圍的心肌梗死，以及血清膠原蛋白含量增加、心肌肥大和左心室肥大等心室重構(gòu)的病理學(xué)改變，與文獻(xiàn)報(bào)道相符［3］，提示心肌梗死后并發(fā)心室重構(gòu)模型復(fù)制成功。

AMI屬于中醫(yī)的“真心痛”、“厥心痛”等范疇，而心肌纖維化屬中醫(yī)學(xué)“心悸”、“怔忡”、“胸痹”、“痰飲”等范疇。本病為本虛標(biāo)實(shí)之證，主要病機(jī)為氣虛、陰虛導(dǎo)致血瘀，阻塞心脈，以致栓塞，導(dǎo)致水濕內(nèi)停，化為痰濁，虛、瘀、熱、濕、痰諸邪蓄積以致毒邪內(nèi)壅，致心肌梗死后心室重構(gòu)。本方以西洋參為君藥，補(bǔ)氣養(yǎng)陰、瀉火生津;熟地、當(dāng)歸、白芍同用，補(bǔ)血養(yǎng)陰，共為臣藥;丹參、三七、川芎活血祛瘀為佐藥;茯苓皮、竹瀝、黃連和甘草除濕化痰解毒為使藥，共奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、祛痰解毒之功。

心肌重構(gòu)是由多因素共同調(diào)控、多階段變化的過(guò)程，心肌梗死后心肌細(xì)胞死亡或凋亡、左心室機(jī)械超負(fù)荷過(guò)大，繼發(fā)神經(jīng)-體液-炎癥反應(yīng)［4］，誘導(dǎo)心肌膠原蛋白的合成與分泌，促進(jìn)心肌纖維化和左心室重構(gòu)。硝酸異山梨醇酯、培哚普利和中藥均可顯著縮小冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后心肌梗死面積，提示通過(guò)減少心肌梗死，可抑制心肌梗死后心肌重構(gòu);而益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥還可通過(guò)降低血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量，發(fā)揮多靶點(diǎn)協(xié)同效應(yīng)，固其抗心肌梗死后心室重構(gòu)效應(yīng)優(yōu)于硝酸異山梨醇酯和培哚普利。

綜上，益氣養(yǎng)陰活血解毒法中藥對(duì)心肌梗死后左心室重構(gòu)具有較好的治療效應(yīng)，并初步證實(shí)其抗心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制與抑制膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ的合成與分泌有關(guān)，其確切的機(jī)制尚待深入研究。

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Influence of Yiqi Yangyin Huoxue Jiedu com pounds on infarcted myocardium and ventricular remodeling after acute myocardial infarction in rats

WANGWei.Department of Cardiology，Penglai People's Hospital，Penglai265600，China>

WANGWei，Email:plyywangwei@163.com

Myocardial infarction;Cardiac remodeling，ventricular;Yiqi Yangyin Huoxue Jiedu compounds;Collagen;Rats

2012-02-22)

(本文編輯:周白瑜)

10.3969/j.issn.1007-5410.2012.04.016

265600蓬萊市人民醫(yī)院心內(nèi)科

王偉，電子信箱:plyywangwei@163.com