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        益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥對(duì)大鼠急性心肌梗死后梗死心肌與心室重構(gòu)的影響

        2012-09-13 08:09:12王偉
        中國(guó)心血管雜志 2012年4期
        關(guān)鍵詞:培哚山梨醇膠原蛋白

        王偉

        ·基礎(chǔ)研究·

        益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥對(duì)大鼠急性心肌梗死后梗死心肌與心室重構(gòu)的影響

        王偉

        目的觀察急性心肌梗死(AMI)后大鼠心室重構(gòu)時(shí)左心室質(zhì)量、心肌梗死面積、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量及益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥的干預(yù)作用。方法結(jié)扎Wistar大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支復(fù)制AMI模型,6周后并發(fā)心肌重構(gòu),將24只AMI大鼠隨機(jī)分為模型組(灌服等容量蒸餾水)、培哚普利組(0.36 mg/kg體質(zhì)量)、硝酸異山梨醇酯組(5 mg/kg體質(zhì)量)、益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥組(生藥10 g/kg體質(zhì)量),每組6只,于造模成功后第2天開(kāi)始灌胃相應(yīng)藥物,1次/d連續(xù)4周,空白組(只穿刺,不結(jié)扎)5只灌服等容量蒸餾水。4周后稱體質(zhì)量后處死大鼠,取血檢測(cè)血清Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量,取心臟,稱取心臟、左心室質(zhì)量,計(jì)算心臟指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù),取左心室缺血區(qū)N-BT染色法觀察心肌梗死面積。結(jié)果與空白組比較,模型組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著增加(均為P<0.01);與模型組比較,中藥組大鼠心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)、心肌梗死面積、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著減小(均為P<0.05),其中心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù)、血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量介于硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組之間(均為P<0.05),而心肌梗死面積則與硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)。結(jié)論益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥可縮小AMI后心肌重構(gòu)大鼠心肌梗死面積,抑制膠原蛋白合成、分泌和心肌肥厚、心肌纖維化,其效應(yīng)優(yōu)于硝酸異山梨醇酯,而稍差于培哚普利。

        心肌梗死;心室重構(gòu);益氣養(yǎng)陰活血解毒;膠原蛋白;大鼠

        心肌梗死是由于冠狀動(dòng)脈供血中斷,引起供血區(qū)持續(xù)缺血而導(dǎo)致的較大范圍的心肌壞死。心肌梗死后,梗死區(qū)心肌周圍殘存的心肌細(xì)胞接受心肌缺血、損傷的信息啟動(dòng)了眾多蛋白質(zhì)的表達(dá),啟動(dòng)心室重構(gòu)[1],主要表現(xiàn)為殘存的心肌細(xì)胞肥大、凋亡,同時(shí)伴隨成纖維細(xì)胞增殖,纖維組織替代壞死心肌,最終發(fā)展為失代償性心力衰竭而導(dǎo)致死亡。因此,有效抑制心室重構(gòu)的發(fā)生、發(fā)展對(duì)改善預(yù)后具有重要意義。本研究擬通過(guò)觀察益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥對(duì)急性心肌梗死(AMI)后心室重構(gòu)的干預(yù)作用,探討其防治心肌梗死的可行性。

        1 材料與方法

        1.1 動(dòng)物

        55只SPF級(jí)SD大鼠,180~220 g,6~8周齡,雌雄各半。由本院倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(魯)20100009。

        1.2 藥品與試劑

        硝酸異山梨醇酯片(硝酸異山梨酯)為天津太平洋制藥有限公司產(chǎn)品;培哚普利片:常州制藥廠提供;益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥(西洋參6 g、熟地12 g、白芍12 g、麥冬12 g、丹參15 g、三七3 g、川芎9 g、茯苓皮9 g、竹瀝6 g、黃連9 g、炙甘草9 g)由本院中藥房提供中藥飲片,并制備成顆粒劑(相當(dāng)于生藥10.2 g/g);CD34+細(xì)胞FIT流式抗體,Santa cruz公司;PⅠCP和PⅢNP放免試劑盒,Orion Diagnostica公司。

        1.3 主要儀器

        RM6240B型生理實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)、HX-300動(dòng)物呼吸機(jī),成都泰盟科技有限公司;奧林巴斯顯微鏡及病理圖像采集系統(tǒng);Image Pro Plus圖像分析軟件,M349277-γ放射免疫計(jì)數(shù)器,克格儀器有限公司。

        1.4 實(shí)驗(yàn)方法

        1.4.1 AMI大鼠動(dòng)物模型的復(fù)制將55只大鼠隨機(jī)分為空白組(5只)和造模組(50只),除空白組外,各組均建立AMI動(dòng)物模型。以35 g/L水合氯醛300 mg/kg腹腔內(nèi)注射麻醉大鼠,氣管插管,呼吸機(jī)人工呼吸,呼吸頻率60次/min,潮氣量20 ml/kg,沿胸骨左緣第3~4肋骨切開(kāi)胸腔并暴露心臟,于冠狀動(dòng)脈前降支中段(分支起點(diǎn)處1~2 mm)縫合線結(jié)扎,建立AMI模型,并記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖,ST段弓背抬高提示AMI形成,空白組只開(kāi)胸分離冠狀動(dòng)脈前降支,但不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈。

        1.4.2 動(dòng)物分組與給藥結(jié)扎術(shù)24 h后存活大鼠共24只,隨機(jī)均分為模型組(灌服等容量蒸餾水)、培哚普利組(0.36 mg/kg體質(zhì)量)、硝酸異山梨醇酯組(5 mg/kg體質(zhì)量)、中藥組(生藥10 g/kg體質(zhì)量)4組,空白組予等容量蒸餾水,大鼠給藥劑量根據(jù)成人用藥量按體表面積進(jìn)行用藥量換算[2]:于術(shù)后第2天開(kāi)始灌胃,1次/d,連續(xù)6周。于末次給藥后2 h,稱體質(zhì)量后處死動(dòng)物,取材,進(jìn)行各指標(biāo)的觀察。

        1.4.3 血樣及病理組織處理于末次給藥后2 h大鼠腹腔注射20%氨基甲基乙酯麻醉處死后,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,制備血清備用;剝離心臟組織,生理鹽水沖洗,濾紙吸干,稱取全心臟質(zhì)量(mg),沿房室交界處剪去左右心房及大血管,去除右心室游離壁,稱取余下的左心室質(zhì)量(mg),記錄并計(jì)算左心室質(zhì)量指數(shù)=左心室質(zhì)量/體質(zhì)量(mg/g)和心臟指數(shù)=心臟質(zhì)量/體質(zhì)量(mg/g)。

        1.4.4 血清Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量測(cè)定取分離血清,按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。以M349277-γ放射免疫計(jì)數(shù)器檢測(cè)值為自變量、標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,并由樣品γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

        1.4.5 心肌梗死面積測(cè)算取結(jié)扎部位以下左心室缺血心肌組織,0.2%N-BT染色,顯微鏡相同倍數(shù)下觀察心肌制備區(qū)域大小的變化,每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野,Image Pro Plus圖像分析軟件測(cè)量每個(gè)視野內(nèi)心肌雙側(cè)的梗死區(qū)(N-BT非染色區(qū))和非梗死區(qū)(N-BT染色區(qū))面積,計(jì)算梗死區(qū)面積的百分比(%)=梗死區(qū)面積/(梗死區(qū)面積+非梗死區(qū)面積)×100%。

        1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析,組間均值兩兩比較采用SNK或Dunnett T3檢驗(yàn),以上統(tǒng)計(jì)均由SPSS 15.0完成。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 對(duì)AMI大鼠心臟質(zhì)量及質(zhì)量系數(shù)的影響

        治療結(jié)束后5組間大鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05);與空白組相比,模型組、硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)均顯著增加(均為P<0.01),與模型組相比,硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心臟質(zhì)量、心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量、左心室質(zhì)量指數(shù)均顯著減小(均為P<0.05);硝酸異山梨醇酯組與培哚普利組心臟質(zhì)量間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但培哚普利組心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量和左心室質(zhì)量指數(shù)均較硝酸異山梨醇酯組顯著減小(均為P<0.01);中藥組心臟質(zhì)量與硝酸異山梨醇酯組和培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05),心臟質(zhì)量指數(shù)與硝酸異山梨醇酯差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)而較培哚普利組有顯著增加(P<0.01)。左心室質(zhì)量和左心室質(zhì)量指數(shù)較硝酸異山梨醇酯顯著降低(P<0.01)而較培哚普利組有顯著增加(P<0.05),見(jiàn)表1。

        2.2 對(duì)AMI大鼠心肌梗死面積的影響

        與模型組相比,硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組心肌梗死面積均顯著減小(均為P<0.01);硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組3組間心肌梗死面積差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05),見(jiàn)表2。

        2.3 對(duì)AMI大鼠膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量的影響

        與空白組相比,模型組、硝酸異山梨醇酯組、培哚普利組和中藥組血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著增加(均為P<0.01);硝酸異山梨醇酯組血清膠原蛋白Ⅰ含量較模型組顯著減小(P<0.05),硝酸異山梨醇酯組血清膠原蛋白Ⅲ含量顯著減小(P<0.01),培哚普利組和中藥組血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量均顯著減小(均為P<0.01);中藥組血清膠原蛋白Ⅰ含量較硝酸異山梨醇酯組顯著降低(P<0.05)而與培哚普利組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),血清膠原蛋白Ⅲ含量較硝酸異山梨醇酯組顯著減少(P<0.01)而較培哚普利組均顯著增加(P<0.01),見(jiàn)表2。

        表1 對(duì)AMI大鼠體質(zhì)量、心臟質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)的影響(ˉx±s)

        表2 對(duì)AMI大鼠心肌梗死面積和血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量的影響(ˉx±s)

        3 討論

        本研究采用左冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法復(fù)制心肌梗死大鼠模型,可出現(xiàn)較大范圍的心肌梗死,以及血清膠原蛋白含量增加、心肌肥大和左心室肥大等心室重構(gòu)的病理學(xué)改變,與文獻(xiàn)報(bào)道相符[3],提示心肌梗死后并發(fā)心室重構(gòu)模型復(fù)制成功。

        AMI屬于中醫(yī)的“真心痛”、“厥心痛”等范疇,而心肌纖維化屬中醫(yī)學(xué)“心悸”、“怔忡”、“胸痹”、“痰飲”等范疇。本病為本虛標(biāo)實(shí)之證,主要病機(jī)為氣虛、陰虛導(dǎo)致血瘀,阻塞心脈,以致栓塞,導(dǎo)致水濕內(nèi)停,化為痰濁,虛、瘀、熱、濕、痰諸邪蓄積以致毒邪內(nèi)壅,致心肌梗死后心室重構(gòu)。本方以西洋參為君藥,補(bǔ)氣養(yǎng)陰、瀉火生津;熟地、當(dāng)歸、白芍同用,補(bǔ)血養(yǎng)陰,共為臣藥;丹參、三七、川芎活血祛瘀為佐藥;茯苓皮、竹瀝、黃連和甘草除濕化痰解毒為使藥,共奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、祛痰解毒之功。

        心肌重構(gòu)是由多因素共同調(diào)控、多階段變化的過(guò)程,心肌梗死后心肌細(xì)胞死亡或凋亡、左心室機(jī)械超負(fù)荷過(guò)大,繼發(fā)神經(jīng)-體液-炎癥反應(yīng)[4],誘導(dǎo)心肌膠原蛋白的合成與分泌,促進(jìn)心肌纖維化和左心室重構(gòu)。硝酸異山梨醇酯、培哚普利和中藥均可顯著縮小冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后心肌梗死面積,提示通過(guò)減少心肌梗死,可抑制心肌梗死后心肌重構(gòu);而益氣養(yǎng)陰活血解毒中藥還可通過(guò)降低血清膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ含量,發(fā)揮多靶點(diǎn)協(xié)同效應(yīng),固其抗心肌梗死后心室重構(gòu)效應(yīng)優(yōu)于硝酸異山梨醇酯和培哚普利。

        綜上,益氣養(yǎng)陰活血解毒法中藥對(duì)心肌梗死后左心室重構(gòu)具有較好的治療效應(yīng),并初步證實(shí)其抗心肌梗死后心室重構(gòu)的機(jī)制與抑制膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ的合成與分泌有關(guān),其確切的機(jī)制尚待深入研究。

        [1]SkalickáH Jr,Horák J,Aschermann M,et al.Myocardial infarction,left ventricle remodeling and cellular therapy.Vnitr Lek,2009,55:37-44.

        [2]Xu SY,Bian RL,Chen X.Methodology of pharmacological experiments.2nd ed.Beijing:People Medical Publishing House,2001:283.(in Chinese)徐淑云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:283.

        [3]Li CX,Shen XM,Liu M.Effect of midkine on ventricular remodeling and serum matrix metalloproteinase-9 levels in rats with acutemyocardial infarction.Chin JCardiovasc Med,2010,15:466-470.(in Chinese)李春霞,沈小梅,劉敏.中期因子對(duì)大鼠急性心肌梗死后心室重構(gòu)和基質(zhì)金屬蛋白酶9水平的影響.中國(guó)心血管雜志,2010,15:466-470.

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        Influence of Yiqi Yangyin Huoxue Jiedu com pounds on infarcted myocardium and ventricular remodeling after acute myocardial infarction in rats

        WANGWei.Department of Cardiology,Penglai People's Hospital,Penglai265600,China>

        WANGWei,Email:plyywangwei@163.com

        Myocardial infarction;Cardiac remodeling,ventricular;Yiqi Yangyin Huoxue Jiedu compounds;Collagen;Rats

        2012-02-22)

        (本文編輯:周白瑜)

        10.3969/j.issn.1007-5410.2012.04.016

        265600蓬萊市人民醫(yī)院心內(nèi)科

        王偉,電子信箱:plyywangwei@163.com

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