張潤(rùn)祥 王志君 丁 寧

(1.呼和浩特市食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.內(nèi)蒙古食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010070)

蒙酸模原植物載于18世紀(jì)蒙醫(yī)伊希巴拉珠爾著《認(rèn)藥白晶鑒》。19世紀(jì)蒙藥學(xué)家占布拉道爾吉著《無誤蒙藥鑒》載:“根、莖紅色葉大圓形，粗糙，鋪地而生，根和莖色紅外其他與大黃相同，但根具多皺，種子三角形?！惫δ?殺“粘”，下瀉，消腫，愈傷。用于“粘”疫，痧疾，丹毒，乳腺炎，腮腺炎，骨折，金傷［1］。因此，為了考察該藥材的質(zhì)量，本研究建立了其有效成分大黃酚的HPLC含量測(cè)定方法。

1 儀器與試劑

日本島津2010AHT高效液相色譜儀、日本島津LC－20A高效液相色譜儀:紫外及二極管陣列檢測(cè)器，島津LC－Solution色譜工作站。甲醇為色譜純;其他均為分析純?cè)噭?水為純化水;大黃酚對(duì)照品(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110796－200716)。蒙酸模(收集于呼和浩特市黃花村、平頂村、呼消喜來，共計(jì)3批供試品)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:色譜柱:AlltimaTM －C18柱(250×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇—0.1%的磷酸溶液，梯度洗脫［0 ～10min，甲醇 65%;10 ～ 25min，甲醇 65% →80%;25 ～45min，甲醇 80%］;檢測(cè)波長(zhǎng):430nm;柱溫:35℃;流速:1.0 mL·min－1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取大黃酚對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含16μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備:取本品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，濾過。精密量取續(xù)濾液5mL，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)?%鹽酸溶液10mL，超聲處理2min，再加三氯甲烷10mL，加熱回流1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷洗滌3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 專屬性考察:精密吸取甲醇空白溶劑，大黃酚對(duì)照品溶液，供試品溶液各10μL注入液相色譜儀。大黃酚對(duì)照品色譜峰峰純度好，紫外光譜最大吸收為430nm;供試品溶液中色譜峰保留時(shí)間與大黃酚對(duì)照品一致，在430nm處有最大吸收;甲醇空白溶劑無吸收。表明該含量測(cè)定方法專屬性好，空白溶劑無干擾。(色譜圖見圖1、2、3)

圖1 空白溶劑色譜圖

圖2 大黃酚對(duì)照品色譜圖(2號(hào)峰)

圖3 供試品色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察:按“2.2”對(duì)照品溶液制備方法稱取大黃酚對(duì)照品3.173mg，置200mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度(濃度為15.86μg·mL－1)。分別精密吸取對(duì)照品溶液 1.0、2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0mL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積;以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸，回歸方程為Y=2748.91358 X － 748.56387，r=0.9999。結(jié)果表明，大黃酚在15.865 ～475.950μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10，12h進(jìn)樣測(cè)定，RSD 為1.51%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品按供試品溶液制備方法制備6份樣品溶液，分別注入液相色譜儀測(cè)定峰面積，RSD為0.96%。

2.8 精密度試驗(yàn):吸取同一批供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，RSD為1.22%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn):取同一批已知含量的樣品6份，每份取約0.25g(正常量的一半)，精密稱定，分別精密加入大黃酚對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，同法操作，分別注入液相色譜儀測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)

2.10 樣品測(cè)定:分別取供試品各2份，以上述方法進(jìn)行分析，大黃酚含量(按干燥品計(jì)算)分別為:0.238%、0.135%、0.157%。

3 討論

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇采用島津LC－20A二極管陣列檢測(cè)器，在200～600nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果大黃酚在254、430nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，但430nm波長(zhǎng)處雜質(zhì)峰干擾較少，故選擇430nm波長(zhǎng)處作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

［1］衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).蒙藥分冊(cè)［S］.1998.46.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.22、1118、1171.