王麗娟 張鳳有 師永晶

(內(nèi)蒙古錫盟藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000)

蒙成藥斯日道格扎特巴是由訶子、黃柏、連翹、木鱉子(制)、天竺黃、紅花、苦地丁、白糖8味藥組成的復(fù)方制劑，具治協(xié)日痞病功效。為有效控制其成品質(zhì)量，本文建立起對(duì)處方中君藥黃柏中成分鹽酸小檗堿作為定量分析的指標(biāo)成分。高效液相色譜法具有靈敏、準(zhǔn)確、分離度好等優(yōu)點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)表明該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為斯日道格扎特巴中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:島津LC－2010A HT型高效液相色譜儀，BP121－S型電子天平(d=0.1mg)，BP211－D型電子天平(d=0.01mg)，AS20500A型超聲振蕩器，島津UV－1700型紫外分光光度計(jì)。

1.2 試劑與試藥:鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào):110713－200609)中國(guó)藥品生物制品檢定所;乙腈、甲醇為色譜純;水為高純水;其它試劑均為分析純。

1.3 樣品:由內(nèi)蒙古錫林郭勒盟蘇尼特左旗蒙醫(yī)院提供。

2 色譜條件

色譜柱:色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，本實(shí)驗(yàn)研究采用 kromasil 100－C18柱(250 ×4.6mm 5μm)，柱號(hào)606191;流動(dòng)相:水 －乙腈(55:45，每 100mL含KH2PO40.34g，十二烷基磺酸鈉0.17g)為流動(dòng)相 ;流速:1mL·min－1;柱溫:40℃，檢測(cè)波長(zhǎng):345nm，進(jìn)樣量均為10μl。

3 方法和結(jié)果

3.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

3.2 供試品溶液的制備:取本品細(xì)粉約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入鹽酸－甲醇(1→100)溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率50KHz)30min，放冷，再稱定重量，用鹽酸－甲醇(1→100)溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得。

3.3 測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

3.4 專屬性考察:陰性對(duì)照試驗(yàn):按對(duì)照品、供試品制備方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，另取按處方比例并以相同工藝制備的缺黃柏的陰性對(duì)照，按供試品溶液制備法制得陰性對(duì)照溶液，分別精密吸取對(duì)照品、陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測(cè)得結(jié)果為陰性對(duì)照色譜圖中，在與鹽酸小檗堿對(duì)照品以及供試品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰出現(xiàn)。表明處方中其它組份對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無干擾。色譜圖見圖1、圖2、圖3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照品色譜圖

3.5 線性關(guān)系考察:精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品10.39mg，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述對(duì)照品溶液各 0.4、0.6、0.8 、1.0、1.2、1.4 mL分別置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各取10μl進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果鹽酸小檗堿在0.16624～0.58184μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為Y=3898962x－909.93r=0.9996

3.6 精密度試驗(yàn):取同一批供試品6份，各約0.5g，精密稱定，分別按對(duì)照品、供試品的制備及測(cè)定法的方法操作，測(cè)定每份供試品含量，結(jié)果平均含量為 1.548mgμg－1，RSD=1.27%。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一份供試品溶液，按供試品溶液的制備項(xiàng)下方法制備，按上述色譜條件測(cè)定，分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h 進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果 RSD=1.34%，表明鹽酸小檗堿在24h內(nèi)的峰面積積分值基本穩(wěn)定不變。

3.8 加樣回收試驗(yàn):取同一批供試品9份，各約0.25g，精密稱定，按對(duì)照品、供試品制備方法操作，其中3份分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.3912mg·mL－1)0.5mL，另3份分別精密加入上述鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1.0mL，其余3份分別精密加入上述鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液1.5mL，分別按含量測(cè)定法項(xiàng)下方法操作，測(cè)定每份含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3.9 樣品含量測(cè)定:取樣品 3批(批號(hào) 20090305，20090303，20090317)按對(duì)照品、供試品制備方法及測(cè)定法項(xiàng)下的方法處理并測(cè)定，3批樣品的測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

4.1 本文考察了不同流動(dòng)相系統(tǒng)，由于樣品成份復(fù)雜，相互干擾比較嚴(yán)重，經(jīng)反復(fù)調(diào)整試驗(yàn)，最終確定流動(dòng)相為水－乙腈(55:45，每100mL含 KH2PO40.34g，十二烷基磺酸鈉0.17g)，樣品中鹽酸小檗堿峰分離度達(dá)到2.0以上，理論板數(shù)較高，結(jié)果比較理想。

4.2 在樣品制備考察時(shí)，對(duì)溶媒，提取時(shí)間等均進(jìn)行了比較實(shí)驗(yàn)，最終確定以鹽酸－甲醇(1→100)溶液為提取溶媒，超聲處理30min效果較好。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì)，中華人民共和國(guó)藥典［S］.一部北京:化學(xué)工業(yè)出版社.2005:214－215