姬懷雪，王 艷，邵珠民，惠 慧

徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，徐州 221002

丁苯乳膏是我院研制的復(fù)方制劑，分別含0.1%丁酸氫化可的松和0.5%鹽酸苯海拉明。丁酸氫化可的松是一種中效糖皮質(zhì)激素藥物，療效適中而副作用相對(duì)較低，具有抗炎、免疫、抗增生作用[1]；鹽酸苯海拉明為抗組胺藥，具有抗變態(tài)反應(yīng)、止癢消腫作用[2]；兩藥合用能起到明顯的協(xié)同作用，且不增加不良反應(yīng)，主要用于治療神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎、慢性濕疹，亦用于蟲咬、過(guò)敏性濕疹等，療效確切，臨床效果好。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定了兩組分的含量[3]，克服了乳膏基質(zhì)中羥苯乙酯的干擾，結(jié)果表明本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確。

1 材 料

1.1 儀器

美國(guó)Waters高效液相色譜儀（包括1525二元高壓梯度泵、717自動(dòng)進(jìn)樣器、2487雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器、Empower操作平臺(tái)）；UV-2401PC（日本島津公司）；FA1004B型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸苯海拉明原藥（遼源市百康藥業(yè)有限公司，批號(hào):090307）；丁酸氫化可的松原藥（浙江仙琚制藥有限公司公司，批號(hào):20120101）；丁酸氫化可的松對(duì)照品（批號(hào):100303-200101，純度:98.57%）、鹽酸苯海拉明對(duì)照品（批號(hào):110728-200806，純度:99.7%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；丁苯乳膏（自制樣品，批號(hào):20120309、20120316、20120320）；乳膏基質(zhì)（天津市天驕制藥有限公司，批號(hào):20110807）；乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑為分析純；所用輔料均為藥用規(guī)格。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:XTerra RP C18（250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液（35∶27∶38）；流速:1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng):232 nm；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取丁酸氫化可的松對(duì)照品25 mg、鹽酸苯海拉明對(duì)照品125 mg，分別用流動(dòng)相溶解并稀釋至50 mL，用過(guò)濾器過(guò)濾，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.8 mL加入10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密稱取兩成分置于同一量瓶中，同法制得對(duì)照品混合溶液。

2.2.2 樣品溶液 精密稱取本品2 g置于小燒杯中，加流動(dòng)相40 mL，超聲處理5 min，再于冰浴中冷卻1 h，取出后用孔徑0.45 μm微孔濾膜快速過(guò)濾，濾液置于50 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液 精密稱取空白基質(zhì)2 g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成陰性樣品溶液。

2.3 方法專屬性

分別取陰性樣品溶液、對(duì)照品溶液、樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果顯示基線平穩(wěn)，兩主藥之間及與其他雜質(zhì)成分分離度良好，柱效高，峰形理想。

圖1 高效液相色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密量取對(duì)照品混合溶液 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程（n=6）:丁酸氫化可的松為Y=3.348×104C-3.427×104（r=0.9999），線性范圍為 25～50 μg·mL-1；鹽酸苯海拉明為 Y=1.157×104C+2.918×104（r=0.9999），線性范圍為 125～250 μg·mL-1。結(jié)果表明，丁酸氫化可的松在25～50 μg·mL-1范圍內(nèi)、鹽酸苯海拉明在125～250 μg·mL-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度的線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明峰面積的RSD分別為0.86%、0.95%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份樣品溶液，分別在 0、2、4、6、8 h 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，結(jié)果無(wú)明顯變化，RSD為0.78%，說(shuō)明樣品液在8 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足含量測(cè)定要求。

2.7 回收率試驗(yàn)

分別精密稱取丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明的對(duì)照品，模擬處方比例按“2.2.1”項(xiàng)下配制對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)方法制備樣品溶液，在“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以回歸方程計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品6份，精密稱定，按照樣品溶液制備的方法制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定峰面積，計(jì)算丁酸氫化可的松和鹽酸苯海拉明的含量，RSD分別為0.95%、0.83%，表明本法重復(fù)性較好。

2.9 樣品含量測(cè)定

分別精密稱取3種不同批號(hào)的樣品，按樣品溶液的制備方法制備相應(yīng)批號(hào)的樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，將測(cè)定峰面積代入回歸方程，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

3 討 論

3.1 波長(zhǎng)的選擇

為排除干擾，準(zhǔn)確地進(jìn)行兩主藥的含量測(cè)定，分別對(duì)丁酸氫化可的松、鹽酸苯海拉明進(jìn)行紫外掃描。發(fā)現(xiàn)兩者紫外圖譜的交叉點(diǎn)波長(zhǎng)為232 nm。綜合分析和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果表明，選擇此波長(zhǎng)能兼顧兩主藥的測(cè)定。

3.2 流動(dòng)相的選擇

高效液相色譜法的難點(diǎn)在于流動(dòng)相的選擇，對(duì)于本品含量測(cè)定的研究，曾試驗(yàn)過(guò)許多不同的流動(dòng)相，如:甲醇-水、乙腈-水、乙腈-1%三乙胺（29∶71）（用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至6.5）等，效果都不理想，尤其是乳膏基質(zhì)中的防腐劑——羥苯乙酯影響最大，比較難和鹽酸苯海拉明分離。通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，最終選擇甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液；此外，由于不同比例的流動(dòng)相對(duì)分離效果的影響很大，通過(guò)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，甲醇-乙腈-0.5%醋酸銨溶液的比例為（35∶27∶38）最為合適，分離度、峰形、保留時(shí)間均適宜。

3.3 樣品溶液的制備

大量的參考文獻(xiàn)報(bào)道，在制備乳膏的樣品溶液時(shí)采用加熱振搖的辦法提取被測(cè)成分，但此方法比較費(fèi)時(shí)。本試驗(yàn)采用超聲波處理制備供試品溶液的方法，測(cè)定結(jié)果滿意，耗時(shí)短。經(jīng)試驗(yàn)，選擇超聲5 min的時(shí)間，即可使兩成分完全溶出。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

本試驗(yàn)分別對(duì)對(duì)照品溶液、對(duì)照品混合溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示兩個(gè)回歸方程基本一致，因此選擇測(cè)定對(duì)照品混合溶液，這樣能夠同時(shí)得到兩種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，節(jié)約了試驗(yàn)時(shí)間。本乳膏劑含量測(cè)定的允許范圍為標(biāo)示量的90.0%～110.0%。

綜上，本實(shí)驗(yàn)建立了簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的HPLC法測(cè)定丁苯乳膏中兩組分的含量方法，有利于基層醫(yī)院該類制劑的快檢。

[1]張建中.幾種新的外用糖皮質(zhì)激素[J].中國(guó)藥物應(yīng)用與監(jiān)測(cè)，2005，2（5）:30-3.

[2]張廣求，張美祥，鄭錦秀.鹽酸苯海拉明凝膠的制備及質(zhì)量控制[J]. 中國(guó)藥房，2005，16（14）:1065-7.

[3]吳 畏，陳 雅，余 穎.復(fù)方更昔洛韋乳膏的質(zhì)量控制與穩(wěn)定性考察[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（12）:236-8.